一種CIK細胞培養基制造技術

本發明專利技術公開了一種CIK細胞培養基，該CIK細胞培養基為含有胎牛血清的RPMI?1640培養基，還含有人胱抑素C，人胱抑素C的質量濃度為20?30mg/L。本發明專利技術證明人胱抑素C可以提高CIK細胞的腫瘤殺傷活性，本發明專利技術提供的含有人胱抑素C的培養基可以用于誘導培養CIK細胞。

A CIK cell culture medium

The invention discloses a CIK cell culture medium, the CIK cell culture medium containing fetal bovine serum RPMI 1640 medium containing human cystatin C concentration of human cystatin C for 20 30mg/L. The invention proves that human cystatin C can improve the tumor killing activity of CIK cells, and the culture medium provided with human cystatin C can be used for inducing the culture of CIK cells.

【技術實現步驟摘要】
一種CIK細胞培養基
本專利技術屬于細胞培養領域，具體涉及一種CIK細胞培養基。
技術介紹
細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-inducedkiller，CIK)是人外周血單個核細胞在白細胞介素-1、白細胞介素-2、抗CD3單克隆抗體和γ-干擾素聯合刺激下獲得的增殖能力強、細胞毒作用強的免疫效應細胞，在細胞治療領域發揮著不可替代的作用。如何提高CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷力一直是免疫治療領域研究熱點，因為CIK細胞的殺傷力直接關乎細胞治療的療效。
技術實現思路
本專利技術旨在提供一種CIK細胞培養基，以培養出更具殺傷力的CIK細胞。本專利技術通過如下技術方案得以實現：一種CIK細胞培養基，為含有胎牛血清的RPMI-1640培養基，還含有人胱抑素C，人胱抑素C的質量濃度為20-30mg/L。優選地，胎牛血清體積濃度為10-20％。優選地，還含有抗生素。優選地，抗生素為青霉素和鏈霉素，青霉素的濃度為100U/mL，鏈霉素的濃度為120U/mL。人胱抑素C在提高CIK細胞對腫瘤殺傷活性方面的應用。優選地，所述腫瘤為人髓性白血病。本專利技術優點：本專利技術提供的培養基可以有效提高CIK細胞對腫瘤的殺傷力。附圖說明圖1為不同組CIK細胞對K562細胞的殺傷率(％)。具體實施方式為了更好地解釋本專利技術的技術方案，下面結合具體實施例進一步介紹。實施例中未特別強調的實驗材料均為常規實驗材料，屬于本領域技術人員易于獲得的范疇。實施例1：一、實驗材料RPMI-1640培養液，美國Gibco公司；胎牛血清，美國Gibco公司；人胱抑素C，桂林英美特生物技術有限公司，貨號KAY0001，純度>96％。二、實驗方法1、CIK細胞的培養擴增取肝素抗凝的健康志愿者外周血20ml，用淋巴細胞分離液密度梯度離心(2400×g，20min)，輕輕吸取灰白色層的單個核細胞，用生理鹽水洗滌3次，以RPMI-1640培養液調整細胞密度為5×106/mL，加到培養瓶內，每瓶15mL，置37℃、5％CO2培養箱中培養2h，輕輕搖勻，吸出懸浮細胞，離心后去上清分為兩組進行培養：(A)常規組：用含有胎牛血清(體積濃度15％)和IFN-γ(1000U/mL)的RPMI-1640培養基調節細胞密度為2.5×106/mL，然后于37℃、5％CO2培養箱內培養24h后再加入IL-2(500U/mL)、抗CD3單抗(25ng/mL)繼續培養。(B)改進組：用終濃度為25mg/L的人胱抑素C代替IFN-γ，其他同常規組。每隔3d根據細胞濃度補充含有胎牛血清的RPMI-1640培養基，并補充IL-2。培養12天后收集CIK細胞備用。2、CIK細胞的殺傷活性分別將常規組、改進組培養至第12天的CIK細胞與對數期的K562細胞按照效靶比5:1和10:1混合，同時設單獨的靶細胞及效應細胞孔，用LDH釋放法，測定490nm的吸光度(A)值，計算各組CIK對K562細胞的殺傷率(％)。三、實驗結果培養至第12天常規組、改進組的CIK細胞對K562細胞的殺傷率如表1和圖1所示。與常規組CIK細胞相比，改進組CIK細胞對K562細胞的殺傷率明顯較高。表1不同組CIK細胞對K562細胞的殺傷率(％)效靶比5:1殺傷率(％)效靶比10:1殺傷率(％)常規組32.5±4.145.2±4.7改進組47.3±3.962.5±4.3上述結果表明，人胱抑素C可以提高CIK細胞的腫瘤殺傷活性。實施例2一種CIK細胞培養基，為含有胎牛血清(體積濃度為15％)的RPMI-1640培養基，還含有人胱抑素C(質量濃度為25mg/L)和青霉素(100U/mL)、鏈霉素(120U/mL)。實施例3一種CIK細胞培養基，為含有胎牛血清(體積濃度為10％)的RPMI-1640培養基，還含有人胱抑素C(質量濃度為20mg/L)和青霉素(100U/mL)、鏈霉素(120U/mL)。實施例4一種CIK細胞培養基，為含有胎牛血清(體積濃度為20％)的RPMI-1640培養基，還含有人胱抑素C(質量濃度為30mg/L)和青霉素(100U/mL)、鏈霉素(120U/mL)。本專利技術證明人胱抑素C可以提高CIK細胞的腫瘤殺傷活性，本專利技術提供的含有人胱抑素C的培養基可以用于誘導培養CIK細胞。上述實施例僅用于進一步解釋本專利技術的技術方案，本領域技術人員應當明白，任何簡單替換或修改均不脫離本專利技術，本專利技術的保護范圍并不受限于上述具體實施例。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種CIK細胞培養基，為含有胎牛血清的RPMI?1640培養基，其特征在于：還含有人胱抑素C，人胱抑素C的質量濃度為20?30mg/L。

【技術特征摘要】
1.一種CIK細胞培養基，為含有胎牛血清的RPMI-1640培養基，其特征在于：還含有人胱抑素C，人胱抑素C的質量濃度為20-30mg/L。2.根據權利要求1所述的CIK細胞培養基，其特征在于：胎牛血清體積濃度為10-20％。3.根據權利要求1所述的CIK細胞培養基，其特...

【專利技術屬性】
技術研發人員：胡攀勇，張鐘祥，黃欣，
申請(專利權)人：南京佰泰克生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇,32