一種能夠抑制流感病毒 PA 蛋白核酸內切酶活性的化合物制造技術

本發明專利技術提供了一種化合物，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述化合物均能夠抑制流感病毒PA蛋白核酸內切酶活性，具有抗流感病毒的功能。

A compound that inhibits the activity of an influenza virus PA protein endonuclease

The present invention provides a compound, the compound formula (I), (II) or (III) were synthesized. The compounds were able to inhibit the influenza virus PA protein endonuclease activity, has the function of anti influenza virus.

【技術實現步驟摘要】
一種能夠抑制流感病毒PA蛋白核酸內切酶活性的化合物
本專利技術涉及一種化合物，具體涉及一種能夠抑制流感病毒PA蛋白核酸內切酶活性的化合物。
技術介紹
流感病毒由于能夠在人畜間不斷地傳播、重組和突變，已成為人類公共健康的重要威脅。由于流感疫苗的局限性，即從新爆發病毒的鑒定到針對該病毒的疫苗的臨床應用至少會有6個月的滯后?？共《舅幬镆呀洺蔀槿祟悜獙α鞲斜l的重要手段，這種優勢在流感暴發和流行的初期尤為明顯。兩類抗病毒藥物已批準在臨床治療使用，即M2通道蛋白抑制劑(金剛烷胺和金剛乙胺)和神經氨酸酶(NA)抑制劑(奧司他韋和扎那米韋)。然而，耐藥菌株的出現，如季節性H3N2，2009年甲型H1N1，H5N1和H7N9高致病性禽流感等，很大程度上削弱了這兩類藥物的臨床使用價值。所以，新開發的能夠在不同流感病毒亞型間提供交叉保護作用的抗病毒新藥備受關注。流感病毒蛋白的生物學和結構功能學研究已在廣泛地開展，這也為新藥篩選提供了更多的靶點。需要特別指出的是，流感病毒RNA聚合酶中相關功能結構域的晶體結構已被成功解析。由于這些蛋白在不同流感亞型之間相當保守。因此，針對RNA聚合酶的功能結構域設計抑或是篩選的藥物更有機會對流感產生廣譜的抗病毒效果。流感病毒的RNA聚合酶復合體(RdRp)負責病毒基因組的轉錄和復制，該復合體由PB1、PB2和PA三個亞基組成。在一個被稱為“偷帽”(cap-snatching)的過程中，病毒信使RNA(mRNA)轉錄所需要的起始引物，是通過PA亞基的核酸內切酶活性(endonucleaseactivity)從宿主細胞的前體mRNA上切割而來的。晶體結構研究揭示PA亞基的氨基末端結構域(以下簡稱PAN)擁有核酸內切酶活性位點。該結構域在不同的甲型流感病毒亞型間高度保守，同時能夠在原核表達系統中功能性表達。重要的是，相關研究已經證實，替換PAN結構域中的關鍵氨基酸位點將顯著減少病毒毒力。所以，針對PAN核酸內切酶結構域篩選而來的抗病毒藥物所誘導產生耐藥毒株的可能性會大大降低。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服現有技術存在的不足之處而提供了一種化合物，所述化合物能夠抑制流感病毒PA蛋白核酸內切酶活性，本專利技術還提供了所述化合物的用途。為實現上述目的，所采取的技術方案：一種能夠抑制流感病毒PA蛋白核酸內切酶活性的化合物，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)所示的化合物的結構式如下：所述式(Ⅱ)所示的化合物的結構式如下：所述式(Ⅲ)所示的化合物的結構式如下：將上述所述式(Ⅰ)所示的化合物命名為PA-30，將上述所述式(Ⅱ)所示的化合物命名為PA-30-A-1，將上述所述式(Ⅱ)所示的化合物命名為PA-30-A-2，本專利技術所述式(Ⅰ)和式(Ⅱ)所示的化合物均對多個亞型的甲型流感病毒，包括甲型H1N1、H3N2、H5N1、H7N7、H7N9和H9N2具有廣譜的抗病毒療效。扎那米韋和PA-30-A-1在細胞水平的聯合治療產生協同抗流感病毒作用。BALB/c小鼠在感染致命劑量的H1N1流感病毒后接受PA-30-A-1的鼻腔給藥后，能夠顯著提高的存活率并減少肺組織中的病毒量。本專利技術提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括扎那米韋和上述所述的化合物。優選地，所述扎那米韋和權利要求1所述的化合物的摩爾比為1:10～10:1。本專利技術提供了上述所述的化合物在制備抗流感病毒的藥物中的用途。優選地，所述流感病毒為甲型、乙型和丙型流感病毒中的至少一種。本專利技術提供了上述所述的藥物組合物在制備抗流感病毒的藥物中的用途。優選地，所述流感病毒為甲型、乙型和丙型流感病毒中的至少一種。本專利技術的有益效果在于：本專利技術提供了一種化合物，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述化合物均能夠抑制流感病毒PA蛋白核酸內切酶活性，具有抗流感病毒的功能。附圖說明圖1為本專利技術實施例1中PA-30-A-1及PA-30在多周期病毒生長試驗中的抗病毒作用圖；圖2為本專利技術實施例1中PA-30-A-1和PA-30的體外抗病毒效果圖；圖3為本專利技術實施例1中PA-30-A-1和PA-30的體內抗病毒效果圖。具體實施方式為更好的說明本專利技術的目的、技術方案和優點，下面將結合具體實施例對本專利技術作進一步說明。實施例11材料和方法1.1細胞、病毒及小分子化合物犬腎細胞(MDCK)在包含有10％熱滅活胎牛血清(FBS)，50單位/毫升青霉素和50微克/毫升鏈霉素(P/S)的MEM培養基中培養。MDCK在病毒感染后，在含有1微克/毫升的TPCK胰蛋白酶但不含有胎牛血清的MEM中培養?？偣灿?株/6種亞型的流感病毒株，即A/HK/415742/09(H1N1)、A/HongKong/1/1968(H3N2)、A/Shenzhen/406H/2006(H5N1)、A/HongKong/156/97(H5N1)、A/Vietnam/1194/2004(H5N1)、A/Netherlands/219/2003(H7N7)、A/Anhui/1/2013(H7N9)和A/HK/1073/1999(H9N2)分別在MDCK細胞中增殖并在本研究中使用。此外，還有一株在BALB/c小鼠體內多次傳代獲得的小鼠致死性流感病毒株A/HK/415742Md/09(H1N1)，是在雞胚中增殖并應用于本次研究的動物實驗的。病毒的滴度通過空斑試驗(plaqueassay)測定后，分裝并保存在-80攝氏度。所有與活病毒相關試驗是在生物安全2級或3級設施中進行的。1.2選擇性指數選擇性指數(selectivityindex)是通過50％的細胞毒性濃度(CC50)除以50％的病毒抑制濃度(IC50)計算而來的，該指標數值越高則指示該藥物擁有越好的臨床應用前景。我們通過MTT法測定了每種小分子化合物的CC50，再通過空斑減數試驗確定IC50值，最終得到了每個候選化合物的選擇性指數。1.3多周期病毒生長試驗MDCK細胞在接種了感染復數(MOI)為0.002的流感H1N1病毒后，在含有20微摩的小分子化合物以及1微克/毫升TPCK胰蛋白酶的MEM培養基中培養。感染0、6、21、25、32、47和54小時后，收集病毒上清液并使用空斑法測定病毒滴度。1.4交叉保護力試驗本專利技術所述化合物針對多個亞型的流感病毒，包括甲型H1N1、H3N2、H5N1、H7N7、H7N9和H9N2的抗病毒效果也進行了測試。簡單地說，MDCK細胞在接種0.002個MOI的流感病毒后1小時，用PBS洗去未進入細胞的病毒粒子，并將培養基置換成新鮮的含有不同濃度(20、5、1.25、0.31微摩)本專利技術所述化合物的MEM培養基。病毒接種24小時候后，收集細胞上清液，并采用反轉錄-實時熒光定量聚合酶鏈式反應(RT-qPCR)技術測定病毒的滴度。1.5本專利技術所述化合物的協同抗病毒效果評估在細胞水平，我們評估了本專利技術所述化合物PA-30-A-1和扎那米韋潛在的協同抗病毒作用。首先，MDCK細胞接種0.002個MOI的流感病毒，然后采用5種不同的藥物組合進行測定。37℃培養24小時后，收集不同組合方案的上清液并采用空斑法測定病毒滴度。在本試驗中，我們對PA-30-A-1和扎那米韋的在IC50比率為10:1，5:1，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種能夠抑制流感病毒PA蛋白核酸內切酶活性的化合物，其特征在于，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)所示的化合物的結構式如下：

【技術特征摘要】
1.一種能夠抑制流感病毒PA蛋白核酸內切酶活性的化合物，其特征在于，所述化合物為式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)所示的化合物的結構式如下：所述式(Ⅱ)所示的化合物的結構式如下：所述式(Ⅲ)所示的化合物的結構式如下：2.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括扎那米韋和權利要求1所述的化合物。3.根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭伯建，袁碩峰，高一村，周婕，
申請(專利權)人：香港神農有限公司，
類型：發明
國別省市：中國香港,81