用于膿毒癥快速診斷的IL-6和IL-10二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種用于膿毒癥快速診斷的IL?6和IL?10二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒，所述試劑盒包括免疫層析試紙條，及位于試紙條上的金膠墊、硝酸纖維膜；所述金膠墊上的金標(biāo)抗體由抗IL?6抗體和抗IL?10抗體組成，所述硝酸纖維膜上從左至右依次為包被抗IL?6抗體的檢測線、包被抗IL?10抗體的檢測線、包被羊抗鼠抗體的質(zhì)控線。本發(fā)明專利技術(shù)還提供用于檢測結(jié)果判斷的標(biāo)準(zhǔn)比色卡，用于對比區(qū)分早期膿毒癥、嚴(yán)重膿毒癥、革蘭陰性菌感染和革蘭陽性菌感染。本發(fā)明專利技術(shù)的試劑盒具有穩(wěn)定、簡單、快速、準(zhǔn)確、無污染和費(fèi)用低等優(yōu)點，可批量化生產(chǎn)，提高膿毒癥的早期快速診斷效率，降低患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，降低膿毒癥的病死率，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益。

For the rapid diagnosis of sepsis IL 6 and IL 10 two gold immunochromatographic assay kit

The invention relates to a method for rapid diagnosis of sepsis IL 6 and IL 10 two gold immunochromatographic assay kit, the kit includes a immunochromatographic test strip, and is located in the gold pad, nitrocellulose membrane test strip; the gold labeled antibody colloidal gold pad by resistance IL 6 antibody and anti IL antibody 10, the nitrocellulose membrane from left to right: packet detection line, anti IL 6 antibody packet detection line, anti IL 10 antibody coated Goat anti mouse antibody control line. The present invention also provides a standard color ratio card for judging the results of the test, which is used for distinguishing early sepsis, severe sepsis, gram negative bacteria infection and gram positive bacteria infection. The kit has the advantages of stability, simplicity, fast, accuracy, no pollution and low cost, can be batch production, improve the early diagnosis efficiency of sepsis, reduce the economic burden of patients, reduce the mortality of sepsis, and has significant economic benefits.

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
用于膿毒癥快速診斷的IL-6和IL-10二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒
本專利技術(shù)涉及醫(yī)療檢測
，具體地說，是膿毒癥快速診斷的IL-6和IL-10二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒。
技術(shù)介紹
膿毒癥是各級醫(yī)院常見的嚴(yán)重感染性疾病，其感染源絕大部分為細(xì)菌。嚴(yán)重膿毒癥的病死率更是居高不下，可高達(dá)30-50％，中國每年死于膿毒癥的人數(shù)近100萬。膿毒癥治療成功的關(guān)鍵是早期診斷、早期干預(yù)，因此，如何早期快速的診斷膿毒癥是決定膿毒癥預(yù)后的關(guān)鍵因素。IL-6是Th-2細(xì)胞分泌的促炎因子，促進(jìn)B細(xì)胞增殖分化和分泌抗體，促進(jìn)T細(xì)胞分化成CTL，作為內(nèi)源性致熱源參與炎癥反應(yīng)，引起白細(xì)胞升高并促進(jìn)肝臟合成急性時相蛋白(CRP)。IL-10是Th-2細(xì)胞分泌的抗炎因子，在病原菌抗原呈遞過程中抑制細(xì)胞因子和趨化因子的釋放，阻止抗原呈遞的過程，同時它還抑制了T細(xì)胞的克隆增殖，從而起到對抗炎癥反應(yīng)的作用。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測，研究者發(fā)現(xiàn)IL-6、IL-10在膿毒癥的早期(感染一小時內(nèi))就異常升高，其對細(xì)菌感染預(yù)測值的特異性和敏感性均優(yōu)于傳統(tǒng)的CRP(p<0.001)，IL-6和IL-10在各種病毒感染組中明顯低于細(xì)菌感染組(p<0.001)，IL-6和IL-10能區(qū)分膿毒癥和重癥膿毒癥，其升高水平與病人死亡率呈正相關(guān)。因此，IL-6、IL-10對細(xì)菌感染的膿毒癥的診斷有著重要的意義，但是流式細(xì)胞術(shù)分析費(fèi)用昂貴、技術(shù)要求高，難以普及到基層醫(yī)院。膠體金免疫層析法是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的免疫標(biāo)記技術(shù)，具有穩(wěn)定、簡單、快速、準(zhǔn)確、無污染和費(fèi)用低等獨特優(yōu)點。中國專利200680021670.5公開了一種膿毒癥的診斷方法，具體包括預(yù)測具有發(fā)展膿毒癥危險的個體中膿毒癥發(fā)展形成的方法，通過評價個體的生物標(biāo)記譜中的特征，如這些特征滿足特定數(shù)值集，則該個體可能發(fā)展為膿毒癥；該專利還提供了預(yù)測具有發(fā)展膿毒癥階段危險的個體中膿毒癥階段發(fā)展形成及診斷個體中膿毒癥的方法，其中生物標(biāo)記包括IL-6和IL-8。現(xiàn)有技術(shù)中尚未發(fā)現(xiàn)利用IL-6和IL-10組合，通過膠體金免疫層析法診斷膿毒癥，并對膿毒癥嚴(yán)重程度進(jìn)行分級方面的研究。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供膿毒癥快速診斷的IL-6和IL-10二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒。為實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采取的技術(shù)方案是：一種用于膿毒癥快速診斷的IL-6和IL-10二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒，包括IL-6和IL-10二聯(lián)免疫層析試紙條，所述免疫層析試紙條包括底板、樣品墊、金膠墊、硝酸纖維膜層和吸水紙層，其特征在于，所述金膠墊上的金標(biāo)抗體由抗IL-6抗體和抗IL-10抗體組成，所述硝酸纖維膜上從左至右依次為包被抗IL-6抗體的檢測線、包被抗IL-10抗體的檢測線、包被羊抗鼠抗體的質(zhì)控線。作為本專利技術(shù)的一個優(yōu)選實施方案，所述試劑盒還包括用于檢測結(jié)果判斷的標(biāo)準(zhǔn)比色卡，所述標(biāo)準(zhǔn)比色卡包括IL-6比色卡和IL-10比色卡，所述IL-6比色卡包括兩個濃度梯度的顏色，分別為227.7pg/mL和40.6pg/mL；IL-10比色卡包括三個濃度梯度的顏色，分別為96.0pg/mL、42.0pg/mL和20.0pg/mL。作為本專利技術(shù)的一個優(yōu)選實施方案，所述試劑盒還包含操作說明，所述操作說明記載以下內(nèi)容：免疫層析試紙條的檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)比色卡的顏色進(jìn)行對比，判斷檢測樣本IL-6和IL-10濃度，(1)當(dāng)IL-6大于40.6pg/mL和IL-10大于20.0pg/mL為膿毒癥；(2)當(dāng)IL-6大于227.7pg/mL,IL-10大于42.0pg/mL為嚴(yán)重膿毒癥；(3)當(dāng)IL-6大于227.7pg/mL和IL-10大于96.0pg/mL為革蘭陰性菌感染；(4)當(dāng)IL-6大于227.7pg/mL和IL-10小于96.0pg/mL為革蘭陽性菌感染。IL-6、IL-10指標(biāo)對細(xì)菌感染的膿毒癥的診斷有著重要的意義，但是目前普遍采用的流式細(xì)胞術(shù)分析費(fèi)用高、設(shè)備購置昂貴、技術(shù)要求高、檢測時間較長(實際需要2天)；膠體金免疫層析法有穩(wěn)定、簡單、快速、準(zhǔn)確、無污染和費(fèi)用低等獨特優(yōu)點；該檢測技術(shù)不但臨床檢測費(fèi)用便宜，而且能夠在20分鐘左右完成檢測，更為重要的是不要基層醫(yī)院購置昂貴設(shè)備、對基層醫(yī)院的檢測員也沒有高技術(shù)要求。本專利技術(shù)的IL-6和IL-10組合的二聯(lián)免疫膠體金試劑盒，對膿毒癥的早期、快速診斷，以及抗生素的合理使用有著重要的意義，并且指導(dǎo)膿毒癥的早期治療，進(jìn)而降低膿毒癥的臨床病死率。本專利技術(shù)的二聯(lián)免疫膠體金試劑盒不僅能提高我國膿毒癥的早期快速診斷效率，更能促進(jìn)企業(yè)對試劑盒的批量化生產(chǎn)，從而更廣泛的應(yīng)用到各級醫(yī)院，必將提高膿毒癥的早期診斷率，降低病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，降低膿毒癥的病死率，并給社會帶來一定的經(jīng)濟(jì)效益。本專利技術(shù)優(yōu)點在于：1、本專利技術(shù)的二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒可實現(xiàn)對膿毒癥早期、快速診斷。2、本專利技術(shù)的二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒對指導(dǎo)抗生素的合理使用有著重要的意義。3、本專利技術(shù)的二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒可用于指導(dǎo)膿毒癥的早期治療，進(jìn)而降低膿毒癥的臨床病死率。4、本專利技術(shù)的試劑盒與現(xiàn)有技術(shù)比較具有穩(wěn)定、簡單、快速、準(zhǔn)確、無污染和費(fèi)用低等獨特優(yōu)點。附圖說明附圖1是抗原檢測原理圖。附圖2是二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒結(jié)構(gòu)示意圖。附圖3是二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒檢測過程示意圖。具體實施方式下面結(jié)合具體實施方式，進(jìn)一步闡述本專利技術(shù)。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本專利技術(shù)而不用于限制本專利技術(shù)的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本專利技術(shù)記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本專利技術(shù)作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實施例1IL-6和IL-10膠體金免疫層析試劑盒的制備1.1確定IL-6和IL-10診斷膿毒癥的臨界值(1)IL-6大于40.6pg/mL和IL-10大于20.0pg/mL設(shè)定為膿毒癥。(2)IL-6大于227.7pg/mL，IL-10大于42.0pg/mL設(shè)定為嚴(yán)重膿毒癥。(3)IL-6大于227.7pg/mL和IL-10大于96.0pg/mL設(shè)定為革蘭陰性菌感染。(4)IL-6大于227.7pg/mL和IL-10小于96.0pg/mL設(shè)定為革蘭陽性菌感染。IL-6設(shè)定兩個濃度梯度227.7pg/mL和40.6pg/mL；IL-10設(shè)定三個濃度梯度96.0pg/mL、42.0pg/mL和20.0pg/mL。1.2枸櫞酸三鈉還原法制備膠體金取0.01％氯金酸水溶液100ml加熱至沸，攪動下準(zhǔn)確加入1％檸檬酸三鈉水溶液0.7ml，金黃色的氯金酸水溶液在2分鐘內(nèi)變?yōu)樽霞t色，繼續(xù)煮沸15分鐘，冷卻后以蒸餾水恢復(fù)到原體積，即為膠體金溶膠。1.3膠體金的鑒定：分光光度計掃描吸收峰時光波長來估計金顆粒的大小。1.4免疫膠體金制備1.4.1蛋白質(zhì)的處理①透析除鹽：將蛋白質(zhì)置入透析袋中然后直接放入雙蒸水或極低濃度的鹽水(0本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
用于膿毒癥快速診斷的IL?6和IL?10二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒，包括IL?6和IL?10二聯(lián)免疫層析試紙條，所述免疫層析試紙條包括底板、樣品墊、金膠墊、硝酸纖維膜層和吸水紙層，其特征在于，所述金膠墊上的金標(biāo)抗體由抗IL?6抗體和抗IL?10抗體組成，所述硝酸纖維膜上從左至右依次為包被抗IL?6抗體的檢測線、包被抗IL?10抗體的檢測線、包被羊抗鼠抗體的質(zhì)控線。

【技術(shù)特征摘要】
1.用于膿毒癥快速診斷的IL-6和IL-10二聯(lián)膠體金免疫層析試劑盒，包括IL-6和IL-10二聯(lián)免疫層析試紙條，所述免疫層析試紙條包括底板、樣品墊、金膠墊、硝酸纖維膜層和吸水紙層，其特征在于，所述金膠墊上的金標(biāo)抗體由抗IL-6抗體和抗IL-10抗體組成，所述硝酸纖維膜上從左至右依次為包被抗IL-6抗體的檢測線、包被抗IL-10抗體的檢測線、包被羊抗鼠抗體的質(zhì)控線。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述膿毒癥快速診斷的IL-6和IL-10膠體金免疫層析試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括用于檢測結(jié)果判斷的標(biāo)準(zhǔn)比色卡，所述標(biāo)準(zhǔn)比色卡包括IL-6比色卡和IL-10比色卡，所述IL-6比色卡包括兩個濃度梯度的顏色，分別為227.7pg/mL和40.6pg/mL；所述IL-10比色卡包括...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：寧鉑濤，
申請(專利權(quán))人：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心，
類型：發(fā)明
國別省市：上海,31