一種家禽病原體高通量檢測芯片及其應用制造技術

本發明專利技術具體公開了一種家禽病原體高通量檢測芯片，包括病原體膠體金試紙，所述試紙包括Ⅰ臂、Ⅱ臂、Ⅲ臂，每一個臂包括樣品層1、膠體金標記層2、檢測反應層3、吸水層4組成，樣品層為共用層；所述膠體金標記層上包被有抗雞副嗜血桿菌抗體。本發明專利技術的免疫層析試劑盒，金標抗體上只有一個與抗原特異結合的位點，具有特異性強；靈敏度高，達到7.75ng/ml，檢測速度快、通量大、操作簡單方便、顏色穩定、檢測溫度適宜范圍寬、試紙保質期長和成本低廉等優點，并能夠實現半定量檢測。該快速檢測試紙條在4～40℃都可使用，5～15min以后便可觀察結果，適合于食品藥品、環保、檢驗檢疫等部門對樣品中的雞副嗜血桿菌進行快速檢測。

A high throughput detection chip for poultry pathogens and their applications

The invention discloses a poultry pathogen high-throughput detection chip, including the pathogen of colloidal gold strip, the strip including 1 arm, arm, arm II III, each arm includes a sample layer 1, colloidal gold detection reaction layer 2, layer 3, the water absorption layer 4, layer with total sample layer; the colloidal gold layer coated with anti Haemophilus paragallinarum antibody. Immunochromatography kit of the invention, only one gold labeled antibody and antigen specific binding sites, with strong specificity; high sensitivity to 7.75ng/ml, fast detection speed, high flux, simple operation, stable color, suitable temperature range, detection test paper and quality of long period and low cost. And to achieve semi quantitative detection. The fast test strip can be used at 4~40 C, and it can be observed after 5 ~ 15min. It is suitable for fast detection of Haemophilus influenzae in food, medicine, environmental protection, inspection and quarantine departments.

【技術實現步驟摘要】
一種家禽病原體高通量檢測芯片及其應用
本專利技術涉及生物檢測
，尤其涉及一種家禽病原體高通量檢測芯片及其應用。
技術介紹
我國的家禽養殖仍以小規模大群體為主，而規模化、現代化養殖正在興起。未來，我國家禽養殖業的發展趨勢必然是走適度規模化、現代化之路，但這需要一個漫長的過程。肉雞和蛋雞的養殖是家禽養殖中重要組成部分；肉雞和蛋雞的養殖過程中，雞病的預防與治療是一個永恒的話題，是養殖戶時刻繃緊的一根弦。疾病防治工作不到位的表現有以下幾點：并發病和繼發病多，增加了防治工作的難度。疾病發生時，會出現同時伴有兩種及其以上的病原體，從而引發混合感染，從而不利于對雞病的防治工作；病原體發生變異，造成防疫難度。病原毒力出現減弱，其出現的癥狀、病理等發生新變化。給免疫工作造成一定的困難；耐藥菌株增多，從而降低細菌性病原治療效果。抗菌藥物能夠破壞細菌結構，起到抗菌殺菌的作用。藥效因環境等因素不理想時，細菌不會被完全滅亡，反而產生耐藥性；寄生蟲病種類增多，減弱雞群抵抗力。一旦寄生蟲病防治不到位，那么寄生蟲會消弱雞群的抵抗力，造成細菌侵入容易，雞病群發現象也比較常見。因此，必須開發一些可以快速檢測和排除雞疾病的檢測芯片或者試劑盒。
技術實現思路
針對現有技術的上述不足，本專利技術提供一種家禽病原體高通量檢測芯片及其應用，以解決上述的技術問題。本專利技術是通過以下技術方案實現的：一種家禽病原體高通量檢測芯片，包括病原體膠體金試紙，所述試紙包括Ⅰ臂、Ⅱ臂、Ⅲ臂，每一個臂包括樣品層1、膠體金標記層2、檢測反應層3、吸水層4組成，樣品層為共用層；所述膠體金標記層上包被有抗雞副嗜血桿菌抗體，所述檢測反應層上設置有檢測線T和質控線C，所述檢測線上包被有雞副嗜血桿菌抗原，所述質控線包被有羊抗兔IgG，所述檢測用金標抗體可以與檢測用包被抗原結合反應并顯色，且檢測用金標抗體上只有一個與抗原特異結合的位點；所述樣品層、膠體金標記層和檢測反應層按照從左至右、從上至下的順序依次結合在背襯板同一面上，膠體金標記層和檢測反應層的端部重疊；所述吸水層結合在檢測反應層的另一端。附圖說明圖1是本專利技術的結構示意圖。其中：Ⅰ臂、Ⅱ臂、Ⅲ臂；樣品層1、膠體金標記層2、檢測反應層3、吸水層4、檢測線T、質控線C。具體實施方式結合以下實施例對本專利技術作進一步描述。一種家禽病原體高通量檢測芯片，如圖1所示，包括病原體膠體金試紙，所述試紙包括Ⅰ臂、Ⅱ臂、Ⅲ臂，每一個臂包括樣品層1、膠體金標記層2、檢測反應層3、吸水層4組成，樣品層為共用層；所述膠體金標記層上包被有抗雞副嗜血桿菌抗體，所述檢測反應層上設置有檢測線T和質控線C，所述檢測線上包被有雞副嗜血桿菌抗原，所述質控線包被有羊抗兔IgG，所述檢測用金標抗體可以與檢測用包被抗原結合反應并顯色，且檢測用金標抗體上只有一個與抗原特異結合的位點；所述樣品層、膠體金標記層和檢測反應層按照從左至右、從上至下的順序依次結合在背襯板同一面上，膠體金標記層和檢測反應層的端部重疊；所述吸水層結合在檢測反應層的另一端。優選地，所述病原體為雞副嗜血桿菌(Haemophilus)，所述膠體金標記層上包被有抗雞副嗜血桿菌抗體是以雞副嗜血桿菌體作為抗原免疫動物后制備獲得的。優選地，所述樣品層為吸水性良好的材料制成，所述背襯板為塑料制成。優選地，所述檢測線為1～4條，質控線為1～4條。更優選地，所述所述檢測線為1～2條，質控線為1～3條。優選地，所述膠體金標記層和檢測反應層的材料為動物腸道膜制備的生物膜；所述動物腸道膜為豬腸道膜制備的生物膜。更優選地，所述膠體金標記層為豬大腸膜制備的生物膜，所述檢測反應層為豬小腸膜制備的生物膜。本專利技術首次將膠體金試紙做成Ⅰ臂、Ⅱ臂、Ⅲ臂，每一個臂的樣品層重合共用，該設計方案可以實現一次加樣，同時進行三次檢測。有些樣品來源珍貴或者樣品數量非常稀缺，加樣一次進行一次檢測的話，如果檢測過程發生操作失誤或者所用試紙過期實現，則會造成稀有樣品的浪費，影響科研的順利進行；對于這種情況，使用本專利技術的膠體金試紙即可以避免上述的問題發生。同時一次加樣三次檢測，即同時有三個結果出現可供讀取，這種檢測結果更具客觀性。該檢測方法有利于提高工作效率，對于大量樣品的篩選有重要的現實意義。結果判斷：質控線的作用是：無論樣品溶液中是否含有雞副嗜血桿菌，膠體金標記層包被的金標抗體上移到達質控線時都可以與質控線上的IgG結合，聚集形成肉眼可見的紅色顆粒，質控線始終顯色，如果質控線不顯色，表示本次測試無效。本專利技術嚴格控制膠體金標抗體、雞副嗜血桿菌抗原和羊抗兔IgG的比例。具體應用時，可根據不同的檢測線或參數線的顯色與否以及顏色的深淺，判定樣液中是否含有雞副嗜血桿菌，以及含量的多與少，實現半定量檢測。當兩條檢測線T1和T2均顯紅色時，則樣品為陰性(即不含雞副嗜血桿菌)；當檢測線T1顯色，檢測線T2不顯色時，則樣品中含有雞副嗜血桿菌，但其濃度不高；當兩條檢測線均不顯色時，則樣品中雞副嗜血桿菌的濃度很高，以此進行半定量檢測。當檢測線T顏色深于參考線C3時，則樣品為陰性(不含雞副嗜血桿菌或極微量)；當檢測線T顏色深于C3淺于參考線C2時，則樣品含有雞副嗜血桿菌，濃度比較低；當檢測線T顏色深于C2淺于C1時，則樣品中含有雞副嗜血桿菌，濃度比較高；當檢測線T不顯色時，則樣品中含有雞副嗜血桿菌，濃度非常高，以此進行半定量檢測。作為優選地實施例，以下將詳細介紹豬小腸膜應用于生物膜的方法，包括以下步驟：S1.將收集到的豬小腸膜保濕，具體為定期噴淋37℃去離子水，后續操作過程保持豬小腸膜保持濕潤的狀態；S2.輕輕地將半球狀豬小腸膜沿著經線切開、攤平，即將豬小腸膜平面化；S3.將上述步驟的豬小腸膜置于燒杯中，加入適量去離子水，將燒杯置于振蕩器上，46℃，100-120rpm，振蕩1-2h，振蕩結束后，將蛋殼膜置于流動緩慢的水中漂洗，清除膜表面雜質；S4.將上述步驟的豬小腸膜置于平面上，使用鑷子將豬小腸膜分層外膜和內膜；S5.將外膜置于50mMTris-HCl(pH7.5)，10mMCaCl2溶液中，置于磁力攪拌器上，孵育40-55℃，30min，每100ml上述溶液加入20mg/ml的蛋白酶K100ul，繼續孵育10-20min；S6.將內膜置于50mMTris-HCl(pH7.0)，10mMCaCl2溶液中，置于磁力攪拌器上，孵育40-55℃，10min，每100ml上述溶液加入20mg/ml的蛋白酶K10ul，繼續孵育5-10min；S7.步驟S5和S6反應結束后，快速取出，置于流動的自來水中沖洗3-5min，之后使用75％酒精清洗3-5次，每次5min；S8.上述步驟的膜使用去離子水清洗3-5次，每次3min，結束后4℃，保濕保存備用。本專利技術的免疫層析試劑盒，金標抗體上只有一個與抗原特異結合的位點，具有特異性強；靈敏度高，達到7.75ng/ml，檢測速度快、通量大、操作簡單方便、顏色穩定、檢測溫度適宜范圍寬、試紙保質期長和成本低廉等優點，并能夠實現半定量檢測。該快速檢測試紙條在4～40℃都可使用，5～15min以后便可觀察結果，適合于食品藥品、環保、檢驗檢疫等部門對樣品中的雞副嗜血桿菌進行快速檢測。實驗例分別不同方法檢測統一來源的樣品，包括本專利技術的免疫層析試劑盒、高效液相本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種家禽病原體高通量檢測芯片，其特征在于，包括病原體膠體金試紙，所述試紙包括Ⅰ臂、Ⅱ臂、Ⅲ臂，每一個臂包括樣品層1、膠體金標記層2、檢測反應層3、吸水層4組成，樣品層為共用層；所述膠體金標記層上包被有抗雞副嗜血桿菌抗體，所述檢測反應層上設置有檢測線T和質控線C，所述檢測線上包被有雞副嗜血桿菌抗原，所述質控線包被有羊抗兔IgG，所述檢測用金標抗體可以與檢測用包被抗原結合反應并顯色，且檢測用金標抗體上只有一個與抗原特異結合的位點；所述樣品層、膠體金標記層和檢測反應層按照從左至右、從上至下的順序依次結合在背襯板同一面上，膠體金標記層和檢測反應層的端部重疊；所述吸水層結合在檢測反應層的另一端。

【技術特征摘要】
1.一種家禽病原體高通量檢測芯片，其特征在于，包括病原體膠體金試紙，所述試紙包括Ⅰ臂、Ⅱ臂、Ⅲ臂，每一個臂包括樣品層1、膠體金標記層2、檢測反應層3、吸水層4組成，樣品層為共用層；所述膠體金標記層上包被有抗雞副嗜血桿菌抗體，所述檢測反應層上設置有檢測線T和質控線C，所述檢測線上包被有雞副嗜血桿菌抗原，所述質控線包被有羊抗兔IgG，所述檢測用金標抗體可以與檢測用包被抗原結合反應并顯色，且檢測用金標抗體上只有一個與抗原特異結合的位點；所述樣品層、膠體金標記層和檢測反應層按照從左至右、從上至下的順序依次結合在背襯板同一面上，膠體金標記層和檢測反應層的端部重疊；所述吸水層結合在檢測反應層的另一端。2.根據權利要求1所述的家禽病原體高通量檢測芯片，其特征在于，所述病原體為雞副嗜血桿菌，所述膠體金標記層上包被有抗雞副嗜血桿菌抗體是以雞副嗜血桿菌體...

【專利技術屬性】
技術研發人員：潘金文，
申請(專利權)人：潘金文，
類型：發明
國別省市：廣東,44