D?色氨酸在抑制銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素中的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了D?色氨酸在抑制銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)的D?色氨酸能有效降低銅綠假單胞菌綠膿菌素的產(chǎn)生，且D?色氨酸的起效濃度低，毒副作用小，對感染銅綠假單胞菌的創(chuàng)面及易感染銅綠假單胞菌的患者有很大的幫助。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了一種輔助抗銅綠假單胞菌的藥物，所述藥物中含有D?色氨酸。D?色氨酸可用于輔助抗銅綠假單胞菌的藥物中，可以廣泛應(yīng)用于創(chuàng)傷、燒傷、供皮區(qū)以及其它的銅綠假單胞菌感染治療，且起效劑量小，安全性高，應(yīng)用人群廣。

D tryptophan application in inhibition of Pseudomonas aeruginosa pyocyanin.

The invention discloses a D tryptophan application in inhibition of Pseudomonas aeruginosa pyocyanin in, which belongs to the field of biomedical technology. D tryptophan of the invention can effectively reduce the Pseudomonas aeruginosa pyocyanin production, effective concentration and D tryptophan is low, less toxic side effect, is of great help to the wound infection of Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas aeruginosa infection. The invention also discloses a medicine adjuvant against Pseudomonas aeruginosa, the drug containing D tryptophan. D tryptophan can be used for adjuvant anti Pseudomonas aeruginosa, can be widely used in trauma, burns, donor sites and other Pseudomonas aeruginosa infection treatment, and the effect of small dosage, high safety, wide application of the crowd.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
D-色氨酸在抑制銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素中的應(yīng)用
本專利技術(shù)涉及D-色氨酸在抑制銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)

技術(shù)介紹
D-色氨酸(D-tryptophan，D-Trp)是一種淺褐色的晶體，分子式是C11H12N2O2，分子量204.23g/mol，熔點(diǎn)是282-285℃。D-色氨酸的分子結(jié)構(gòu)圖如圖1所示。銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)是臨床常見的多重耐藥菌，除了頑強(qiáng)的耐藥性，銅綠假單胞菌自身還能產(chǎn)生產(chǎn)生多種毒力因子，包括綠膿菌素、彈性蛋白酶、鼠李糖脂、凝集素等，對患者有明顯的毒副作用。其中綠膿菌素由phzABCDEFG操作子編碼，其毒性作用主要體現(xiàn)在：綠膿菌素能通過抑制乙酰膽堿并促進(jìn)PGE2及IL-6，IL-12的釋放來影響患者機(jī)體的免疫反應(yīng)，可能與患者干干銅綠假單胞菌后的疼痛及損傷有關(guān)；能通過氧化應(yīng)激反應(yīng)殺傷細(xì)胞；降低細(xì)胞活性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡及衰老相關(guān)分子的表達(dá)；可通過線粒體活性氧及線粒體酸性鞘磷脂酶誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞死亡等。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的之一，是提供D-色氨酸在抑制銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素中的應(yīng)用。D-色氨酸能有效降低銅綠假單胞菌綠膿菌素的產(chǎn)生，且D-色氨酸的起效濃度低，毒副作用小，對感染銅綠假單胞菌的創(chuàng)面及易感染銅綠假單胞菌的患者有很大的幫助。本專利技術(shù)解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：D-色氨酸在抑制銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素中的應(yīng)用。本專利技術(shù)的申請人經(jīng)過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，D-色氨酸對銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素的抑制率：D-色氨酸濃度為5mM時的抑制率>15％，D-色氨酸濃度為10mM時的抑制率>55％。由此可見，本專利技術(shù)的D-色氨酸可減少銅綠假單胞菌感染后毒力因子的產(chǎn)生，降低銅綠假單胞菌感染的毒性作用。本專利技術(shù)的目的之二，是提供一種輔助抗銅綠假單胞菌的藥物。D-色氨酸可用于輔助抗銅綠假單胞菌的藥物中，可以廣泛應(yīng)用于創(chuàng)傷、燒傷、供皮區(qū)以及其它的銅綠假單胞菌感染治療，且安全性高，應(yīng)用人群廣。本專利技術(shù)解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種輔助抗銅綠假單胞菌的藥物，所述藥物中含有D-色氨酸。在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本專利技術(shù)還可以做如下改進(jìn)。進(jìn)一步，所述藥物的劑型為乳劑、膏劑或溶液劑。采用上述進(jìn)一步的有益效果是：將D-色氨酸制成更多劑型，并應(yīng)用在醫(yī)用材料上，能更廣泛的發(fā)揮D-色氨酸抑制銅綠假單胞菌綠膿菌素的產(chǎn)生，減少銅綠假單胞菌感染后的毒性作用，為銅綠假單胞菌感染更優(yōu)選的治療方法。本專利技術(shù)的有益效果是：1.本專利技術(shù)的D-色氨酸可降低臨床感染銅綠假單胞菌后綠膿菌素的產(chǎn)生，降低銅綠假單胞菌感染的毒性作用。2.D-色氨酸對銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素的抑制率：D-色氨酸濃度為5mM時的抑制率>15％，D-色氨酸濃度為10mM時的抑制率>55％。3.D-色氨酸可用于輔助抗銅綠假單胞菌的藥物中，可以廣泛應(yīng)用于創(chuàng)傷、燒傷、供皮區(qū)以及其它的銅綠假單胞菌感染治療，且起效劑量小，安全性高，應(yīng)用人群廣。附圖說明圖1是本專利技術(shù)D-色氨酸的分子結(jié)構(gòu)圖。圖2是綠膿菌素標(biāo)準(zhǔn)品的工作曲線。圖3是本專利技術(shù)D-色氨酸對銅綠假單胞菌PAO1產(chǎn)綠膿菌素的影響。圖4是本專利技術(shù)D-色氨酸對銅綠假單胞菌PAO1中phzA基因表達(dá)的影響。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體附圖對本專利技術(shù)的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本專利技術(shù)，并非用于限定本專利技術(shù)的范圍。實(shí)施例1：將-80℃保存的銅綠假單胞菌PAO1劃板接種至LB固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h。挑取約1mm2的單克隆菌落至LB液體培養(yǎng)基中，200r/min，37℃培養(yǎng)6-8h。用新鮮LB液體培養(yǎng)基將D-色氨酸溶至20mM，再用培養(yǎng)基依次稀釋。將含不同濃度的D-色氨酸0、0.1、1、5、10mM的LB培養(yǎng)基分別取2ml于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔加入2μl0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊腜AO1菌液，各濃度做3個復(fù)孔。37℃培養(yǎng)24h。吸取待測菌液，4℃、12000rpm離心5min，小心吸取1ml上清液于新的2mlEP管，加入600μl氯仿，斡旋2min，充分萃取綠膿菌素，將混合液以12000rpm離心5min，小心吸取下層氯仿相于新的EP管中并加入250μl0.2N鹽酸，斡旋2min，待有機(jī)相與水相分離，小心吸取200μl水相于96孔板中，用酶標(biāo)儀測OD520。按相同檢測步驟測定綠膿菌素標(biāo)準(zhǔn)品的工作曲線(圖2)，經(jīng)濃度換算后，D-色氨酸對PAO1產(chǎn)綠膿菌素的影響見圖3，D-色氨酸濃度為5mM時，PAO1產(chǎn)綠膿菌素的抑制率>15％，D-色氨酸濃度為10mM時的抑制率>55％。實(shí)施例2將PAO1按試驗(yàn)例1步驟培養(yǎng)，收集菌液后離心所得沉淀按照RNeasyMiniKit提取試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作流程提取各組的RNA，測定各組RNA濃度后，按體系配比(20μl體系：PrimescriptRtmastermix4μl、cDNA1μg、超純水添至20μl)進(jìn)行cDNA逆轉(zhuǎn)錄。經(jīng)普通PCR驗(yàn)證cDNA能擴(kuò)增綠膿菌素編碼基因之一的phzA(具體序列見表1)，下一步進(jìn)行熒光定量PCR。配制20μl體系包括：PremixExTorqⅡ10μl，上下游引物各0.8μl，cDNA稀釋10倍后取2μl，超純水6.4μl。反應(yīng)條件為：95℃5S，(95℃5S，61℃30S，72℃20S)×40個循環(huán)。擴(kuò)增產(chǎn)物用管家基因rpsL的量歸一化后再進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。結(jié)果見圖4，不同濃度的D-色氨酸菌均能抑制銅綠假單胞菌PAO1中綠膿菌素編碼基因之一phzA的表達(dá)，進(jìn)一步驗(yàn)證D-色氨酸能抑制銅綠假單胞菌PAO1綠膿菌素的產(chǎn)生。表1PCR相關(guān)引物匯總表由此可見，D-色氨酸能有效降低銅綠假單胞菌綠膿菌素的產(chǎn)生。實(shí)施例3一種輔助抗銅綠假單胞菌的藥物，所述藥物中含有D-色氨酸。所述藥物的劑型為乳劑、膏劑或溶液劑。以上所述僅為本專利技術(shù)的較佳實(shí)施例，并不用以限制本專利技術(shù)，凡在本專利技術(shù)的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本專利技術(shù)的保護(hù)范圍之內(nèi)。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
D?色氨酸在抑制銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素中的應(yīng)用。

【技術(shù)特征摘要】
1.D-色氨酸在抑制銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素中的應(yīng)用。2.一種輔助抗銅綠假單胞菌的藥物，其特征在于，所述藥物中含有...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蔡挺，張順，費(fèi)秋萍，
申請(專利權(quán))人：蔡挺，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江,33