一種復方丹參滴丸提取物的氫核磁共振檢測方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供一種基于氫核磁共振技術(shù)的復方丹參滴丸提取物中主要成分的定量分析方法，所述分析方法可以鑒定出提取物中的20個化合物，其中酚酸類化合物6種，皂苷類3種，糖類4種，氨基酸類3種，有機酸類4種，同時，可以測定其中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸和原兒茶醛6種主要成分的含量。

A method of hydrogen nuclear magnetic resonance detection for the extract of compound salvia miltiorrhiza drop pill

The present invention provides a method for quantitative analysis of main components of Compound Danshen dripping pill extract H-NMR technology based on the analysis, the method can identify 20 compounds in the extract, of which 6 kinds of phenolic compounds, saponins 3, sugar 4, 3 kinds of amino acids, 4 kinds of organic acids, at the same time can, determination of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1, Danshensu, salvianolic acid B, rosmarinic acid and protocatechuic aldehyde in 6 main content.

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種復方丹參滴丸提取物的氫核磁共振檢測方法
本專利技術(shù)提供一種基于氫核磁共振技術(shù)的復方丹參滴丸提取物中主要成分的定量分析方法，所述分析方法可以鑒定出提取物中的20個化合物，其中酚酸類化合物6種，皂苷類3種，糖類4種，氨基酸類3種，有機酸類4種，同時，可以測定其中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸和原兒茶醛6種主要成分的含量，能夠?qū)崿F(xiàn)對復方丹參滴丸提取物的全面、快速的質(zhì)量評估。
技術(shù)介紹
建立嚴格的中藥質(zhì)量標準和創(chuàng)建現(xiàn)代中藥工業(yè)生產(chǎn)質(zhì)量控制技術(shù)，確保中藥產(chǎn)品的安全、有效和穩(wěn)定，是中藥現(xiàn)代化研究領(lǐng)域的前沿課題，也是我國醫(yī)藥工業(yè)面臨的重大科技創(chuàng)新任務。因此，為更加全面、快速、準確地反映生產(chǎn)過程中復方丹參滴丸的整體質(zhì)量狀況，有必要采用核磁共振(NMR)技術(shù)對現(xiàn)有的標準做進一步升級，以提高中藥產(chǎn)品生產(chǎn)中的質(zhì)量控制水平，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。核磁共振，是指核磁矩不為零的原子核，在外磁場的作用下，核自旋能級發(fā)生塞曼分裂，共振吸收某一特定頻率的射頻輻射的物理過程。目前，日本藥典已收錄NMR分析方法用于中藥材、漢方藥物制劑的質(zhì)量評估。為更加全面、快速、準確地反映生產(chǎn)過程中復方丹參提取物(浸膏)的整體質(zhì)量狀況，本專利技術(shù)首次采用定量氫核磁(qHNMR)技術(shù)建立了用于復方丹參滴丸生產(chǎn)質(zhì)量控制的非色譜定量分析方法，既可進行產(chǎn)品中間體的“宏觀定性”，還可對其中主要成分—丹參素、原兒茶醛和丹酚酸B進行準確的定量分析，以期提高產(chǎn)品生產(chǎn)中的質(zhì)量控制水平，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。定量氫核磁共振法(quantitative1Hnuclearmagneticresonance，qHNMR)，即采用氫核磁共振技術(shù)對化合物進行定量分析的一種方法。復方丹參滴丸是由丹參、三七、冰片3味中藥制成，目前市場上有售，市售復方丹參滴丸說明書的主要內(nèi)容如下：【功能主治】活血化瘀，理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹、癥見胸悶、心前區(qū)刺痛冠心病心絞痛見上述證候者。【主要成分】復方丹參滴丸主要成分：丹參、三七、冰片。【包裝規(guī)格】薄膜衣滴丸每丸重27mg，180丸/瓶。【用法用量】口服或舌下含服，一次10丸，一日3次，4周為一個療程；或遵醫(yī)囑。有關(guān)文獻中也公開了其制備方法如：配方：丹參82.87％，三七16.21％，冰片0.92％。制備方法：⑴丹參、三七用8倍重量的水煮沸提取2次，第一次2小時，第二次1小時，混合提取液。⑵提取液過濾濃縮。⑶以提取物和冰片一起作為藥物活性成分，基質(zhì)為聚乙二醇，投料比為：提取物藥物：基質(zhì)＝1：5.5，加入冰片，液體石蠟為冷凝劑，藥物溫度90℃，化料時間1.5小時，冷凝液溫度1℃，滴距7cm，滴速每分鐘35滴制備成滴丸。復方丹參滴丸在制備過程中需要制備丹參，三七的提取物，為了對丹參，三七的提取物進行質(zhì)量控制，需要尋找有效，快速，準確的鑒定方法，本專利技術(shù)對此進行了研究，并找到一種方法對其進行檢測，所述方法可以最大限度的達到上述要求為控制藥品質(zhì)量提供依據(jù)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供一種中藥復方丹參滴丸提取物的氫核磁共振檢測方法，所述方法包括如下步驟：步驟1，工作液的制備稱取內(nèi)標物3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽，以氘代甲醇溶液溶解制成工作液；步驟2，標準品溶液的制備稱取丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1標準品用氘代甲醇溶液溶解制成標準品溶液；步驟3，供試品溶液的制備稱取復方丹參滴丸提取物干粉，加入工作液，經(jīng)過提取分離得到供試品溶液；步驟4，測定將標準品溶液和供試品溶液注入超導核磁共振波譜儀，得到核磁共振波譜圖；步驟5，根據(jù)所得核磁共振波譜圖中與丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對應的質(zhì)子峰峰面積，計算各組分的含量；其中，步驟4所述超導核磁共振波譜儀設定的氫核磁測試條件如下：采用25-35°脈沖序列采集樣品溶液的1HNMR圖譜,測定溫度290-310K，觀測頻率590-610MHz，譜寬12330-12340Hz，采樣數(shù)據(jù)點65530-65540，掃描次數(shù)8-64次，延遲時間0.9-1.1s，采集時間2.6560-2.6570s，接受增益120-180，用TSP信號定標；其中，步驟5應用以下公式計算各個組分的含量：其中PX為待測物的濃度，PTSP為內(nèi)標TSP的濃度；AX為待測物的中質(zhì)子峰的峰面積，ATSP為內(nèi)標TSP的質(zhì)子峰的峰面積；MX為待測物的分子量，MTSP為內(nèi)標TSP的分子量；NX為待測物的產(chǎn)生峰面積的質(zhì)子個數(shù)，NTSP為內(nèi)標TSP所產(chǎn)生峰面積的質(zhì)子個數(shù)。優(yōu)選的，本專利技術(shù)的復方丹參滴丸提取物的氫核磁共振檢測方法如下:步驟1，工作液的制備精密稱定3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽內(nèi)標物適量，以氘代甲醇溶液定容，制成每0.8-1.2mL氘代甲醇溶液中含有0.48-0.52mg3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽的儲備液，再制成含有0.0098-0.012mg/mL3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽的氘代甲醇工作液；步驟2，標準品溶液的制備分別精密稱定丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1標準品適量，以氘代甲醇工作液定容，制得混合標準品溶液Ⅰ，將混合標準品溶液Ⅰ倍比稀釋得到混合標準品溶液Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，其中丹酚酸B的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL；丹參素的濃度分別為0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL，1.80-2.20mg/mL；迷迭香酸的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.0mg/mL；原兒茶醛的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL；人參皂苷Rg10.10-0.30mg/mL，0.40-0.60mg/mL，0.70-0.90mg/mL，1.20-1.80mg/mL，2.50-3.50mg/mL；人參皂苷Rb10.10-0.20mg/mL，0.30-0.40mg/mL，0.50-0.60mg/mL，1.0-1.20mg/mL，2.0-2.50mg/mL；步驟3，供試品溶液的制備將滴丸提取物浸膏冷凍干燥，得到滴丸提取物的干燥粉末，精密稱定提取物干燥粉末5-100mg，分別加入300-2000μL氘代甲醇工作液，超聲8-12min，離心13000-15000rpm，8-12min，轉(zhuǎn)移至4-6mm核磁管中作為供試品溶液；步驟4，測定將標準品溶液和供試品溶液注入超導核磁共振波譜儀，得到核磁共振波譜圖；步驟5，根據(jù)標準核磁共振波譜圖計算供試品溶液中丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量；其中，步驟4所述超導核磁共振波譜儀設定的氫核磁測試條件如下：采用30°脈沖序列zg30采集樣品溶液的1HNMR圖譜，測定溫度290-310K，觀測頻率590-610MHz，本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種中藥復方丹參滴丸提取物的氫核磁共振檢測方法，所述方法包括如下步驟：步驟1，工作液的制備：稱取內(nèi)標物3?(三甲基甲硅烷)丙二酸?d4鈉鹽，以氘代甲醇溶液溶解制成工作液；步驟2，標準品溶液的制備：稱取丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1標準品用氘代甲醇溶液溶解制成標準品溶液；步驟3，供試品溶液的制備：稱取復方丹參滴丸提取物干粉，加入工作液，經(jīng)過提取分離得到供試品溶液；步驟4，測定：將標準品溶液和供試品溶液注入超導核磁共振波譜儀，得到核磁共振波譜圖；步驟5，根據(jù)所得核磁共振波譜圖中與丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對應的質(zhì)子峰峰面積，計算各組分的含量；其中，步驟4所述超導核磁共振波譜儀設定的氫核磁測試條件如下：采用25?35°脈沖序列采集樣品溶液的1H?NMR圖譜,測定溫度290?310K，觀測頻率590?610MHz，譜寬12330?12340Hz，采樣數(shù)據(jù)點65530?65540，掃描次數(shù)8?64次，延遲時間0.9?1.1s，采集時間2.6560?2.6570s，接受增益120?180，用TSP信號定標；其中，步驟5應用以下公式計算各個組分的含量：...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種中藥復方丹參滴丸提取物的氫核磁共振檢測方法，所述方法包括如下步驟：步驟1，工作液的制備：稱取內(nèi)標物3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽，以氘代甲醇溶液溶解制成工作液；步驟2，標準品溶液的制備：稱取丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1標準品用氘代甲醇溶液溶解制成標準品溶液；步驟3，供試品溶液的制備：稱取復方丹參滴丸提取物干粉，加入工作液，經(jīng)過提取分離得到供試品溶液；步驟4，測定：將標準品溶液和供試品溶液注入超導核磁共振波譜儀，得到核磁共振波譜圖；步驟5，根據(jù)所得核磁共振波譜圖中與丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對應的質(zhì)子峰峰面積，計算各組分的含量；其中，步驟4所述超導核磁共振波譜儀設定的氫核磁測試條件如下：采用25-35°脈沖序列采集樣品溶液的1HNMR圖譜,測定溫度290-310K，觀測頻率590-610MHz，譜寬12330-12340Hz，采樣數(shù)據(jù)點65530-65540，掃描次數(shù)8-64次，延遲時間0.9-1.1s，采集時間2.6560-2.6570s，接受增益120-180，用TSP信號定標；其中，步驟5應用以下公式計算各個組分的含量：其中PX為待測物的濃度，PTSP為內(nèi)標TSP的濃度；AX為待測物的中質(zhì)子峰的峰面積，ATSP為內(nèi)標TSP的質(zhì)子峰的峰面積；MX為待測物的分子量，MTSP為內(nèi)標TSP的分子量；NX為待測物的產(chǎn)生峰面積的質(zhì)子個數(shù)，NTSP為內(nèi)標TSP所產(chǎn)生峰面積的質(zhì)子個數(shù)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟如下:步驟1，工作液的制備：精密稱定3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽內(nèi)標物適量，以氘代甲醇溶液定容，制成每0.8-1.2mL氘代甲醇溶液中含有0.48-0.52mg3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽的儲備液，再制成含有0.0098-0.012mg/mL3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽的氘代甲醇工作液；步驟2，標準品溶液的制備：分別精密稱定丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1標準品適量，以氘代甲醇工作液定容，制得混合標準品溶液Ⅰ，將混合標準品溶液Ⅰ倍比稀釋得到混合標準品溶液Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，其中丹酚酸B的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL；丹參素的濃度分別為0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL，1.80-2.20mg/mL；迷迭香酸的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.0mg/mL；原兒茶醛的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL；人參皂苷Rg10.10-0.30mg/mL，0.40-0.60mg/mL，0.70-0.90mg/mL，1.20-1.80mg/mL，2.50-3.50mg/mL；人參皂苷Rb10.10-0.20mg/mL，0.30-0.40mg/mL，0.50-0.60mg/mL，1.0-1.20mg/mL，2.0-2.50mg/mL；步驟3，供試品溶液的制備：將滴丸提取物浸膏冷凍干燥，得到滴丸提取物的干燥粉末，精密稱定提取物干燥粉末5-100mg，分別加入300-2000μL氘代甲醇工作液，超聲8-12min，離心13000-15000rpm，8-12min，轉(zhuǎn)移至4-6mm核磁管中作為供試品溶液；步驟4，測定：將標準品溶液和供試品溶液注入超導核磁共振波譜儀，得到核磁共振波譜圖；步驟5，根據(jù)標準核磁共振波譜圖計算供試品溶液中丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量；其中，步驟4所述超導核磁共振波譜儀設定的氫核磁測試條件如下：采用30°脈沖序列zg30采集樣品溶液的1HNMR圖譜，測定溫度290-310K，觀測頻率590-610MHz，譜寬12330-12340Hz，采樣數(shù)據(jù)點65530-65540，掃描次數(shù)16-64次，延遲時間1.0000s，采集時間2.6564s，接受增益120-130，用TSP信號定標。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟如下:步驟1，工作液的制備：精密稱定3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽內(nèi)標物適量，以氘代甲醇溶液定容，制成每0.8-1.2mL氘代甲醇溶液中含有0.48-0.52mg3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽的儲備液，再制成含有0.0098-0.012mg/mL3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽的氘代甲醇工作液；步驟2，標準品溶液的制備：分別精密稱定丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1標準品適量，以氘代甲醇工作液定容，制得混合標準品溶液Ⅰ，將混合標準品溶液Ⅰ倍比稀釋得到混合標準品溶液Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，其中丹酚酸B的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL；丹參素的濃度分別為0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL，1.80-2.20mg/mL；迷迭香酸的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.0mg/mL；原兒茶醛的濃度分別為0.05-0.10mg/mL，0.10-0.20mg/mL，0.20-0.40mg/mL，0.50-0.70mg/mL，0.80-1.20mg/mL；人參皂苷Rg10.10-0.30mg/mL，0.40-0.60mg/mL，0.70-0.90mg/mL，1....

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：褚揚，姜苗苗，馬曉慧，王躍飛，李偉，孫鶴，
申請(專利權(quán))人：天士力制藥集團股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：天津,12