生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法技術

本發明專利技術公開了生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法，涉及食品中非法添加劑的檢測方法，所述檢測方法為：先進行樣品前處理，得到樣品溶液，再采用高效液相色譜測定所得樣品溶液；其中，所述樣品為生鮮肉或肉制品；所述樣品前處理包括酶解、提取、凈化、濃縮、復溶和過濾，所述提取步驟的提取溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、環己烷、二甲基亞砜中的至少一種。本發明專利技術的樣品前處理中將酶解與水、提取試劑的有機溶劑相結合，可以縮短樣品的處理時間和提高瘦肉精提取率。

Detection of lean meat in fresh meat and meat products

The invention discloses a method for detecting clenbuterol in fresh meat and meat product, detection method involving illegal food additives, the detection method is as follows: first sample pretreatment, sample solution, and then determined by HPLC the sample solution; among them, the sample for raw meat or meat products; the sample pretreatment including hydrolysis, extraction, purification, concentration, dissolving and filtration, solvent extraction step of extracting the at least one dichloromethane, ethyl acetate and cyclohexane, two dimethyl sulfoxide in. The sample pretreatment process combines enzyme hydrolysis with organic solvents of water and extraction reagent, which can shorten the processing time and improve the extraction rate of clenbuterol.

【技術實現步驟摘要】
生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法
本專利技術涉及食品中非法添加劑的檢測方法，尤其涉及生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法。
技術介紹
瘦肉精是泛指養殖業非法使用的具有促進動物生長、提高瘦肉率的含β-腎上腺受體激動劑的一類物質，瘦肉精包括克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、班布特羅、酒石酸阿福特羅和苯乙醇胺A等幾十種化合物。研究發現，長期使用瘦肉精會使其在動物體內蓄積，人類食用瘦肉精超過安全值的動物肉類后，會出現震顫、心悸、精神緊張、頭痛、嘔心、嘔吐和四肢無力等癥狀，甚至危及生命。我國在內的許多國家都對食品動物中瘦肉精的違法使用實施了嚴格的監管，自2002年以來，我國就先后發布了多個官方公告文件以制止瘦肉精的非法使用。為了加強對瘦肉精藥物的監管，國內外科研人員對肉及肉制品中瘦肉精殘留量的檢測方法開展了廣泛地研究，現有的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜聯用法(LC-MS)、氣象色譜-質譜聯用法(GC-MS)、免疫分析法(ELISA)、膠體金免疫檢測試紙條(DIGFA)和毛細管電泳(EC)等。目前，檢測機構主要檢測瘦肉精中的克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺三種物質；而現有的檢測方法對生鮮肉及肉制品樣品的處理時間較長，瘦肉精提取效率低，對瘦肉精含量的檢測產生一定的影響。
技術實現思路
本專利技術目的在于克服現有瘦肉精檢測方法存在的不足，而提供一種樣品的處理時間短、瘦肉精提取率高的生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法，為實現上述目的，本專利技術采取的技術方案為：生生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法，所述檢測方法為：先進行樣品前處理，得到樣品溶液，再采用高效液相色譜測定所樣品溶液；其中，所述樣品為生鮮肉或肉制品，樣品前處理包括以下步驟:(1)酶解：稱取攪碎的樣品，向樣品中加入緩沖液和酶，酶解10～30min后離心，取上清液即得樣品酶解液；所述緩沖液為乙酸銨溶液，所述酶包括β-葡萄醛酸苷肽酶和芳基硫酸脂酶；(2)提取：按照每克樣品加入6～10mL提取試劑的比例向所得樣品酶解液中加入提取試劑，超聲提取5～10min，即得樣品提取液；其中，所述提取試劑由水和有機溶劑組成，水和有機溶劑的體積比為1:3～1:5，且所述有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、環己烷和二甲基亞砜中的至少一種；(3)凈化：向所得樣品提取液中加入吸水劑和鹽析劑，混勻后離心，取上清液即得樣品凈化液；所述吸水劑與樣品的質量比為1:2～2:3，所述鹽析劑與樣品的質量比為1:1～2:1；優選地吸水劑為Na2SO4，鹽析劑為NaCl，可以增加樣品提取液中鹽離子濃度，以降低瘦肉精溶解在水相中，從而提高瘦肉精溶解在提取試劑的有機溶劑中；Na2SO4具有很強的吸水性，進一步增加瘦肉精溶解在提取試劑的有機溶劑中；NaCl可以促進有機溶劑與水進行分層，提高瘦肉精分離效率。(4)濃縮：氮吹將所得樣品凈化液進行氮吹濃縮，得到濃縮物；(5)復溶：采用由乙酸水溶液和乙醇組成的混合液溶解步驟(4)所得濃縮物，得到樣品復溶液；所述乙酸水溶液中乙酸的體積分數為0.15％～0.25％，乙酸水溶液與乙醇的體積比為1:1～1:3；(6)過濾：向所述樣品復溶液中加入吸附劑，混勻后離心、取上清液，再使用濾膜過濾，即得樣品溶液；對樣品復溶液先采取吸附除雜，再經有機過濾膜過濾，可以提純瘦肉精的純度，避免影響后續的的高效液相色譜測定；使用超聲波清洗機處理上樣液3～5min；超聲波清洗機可以除去上樣液中的氣泡，避免影響后續的的高效液相色譜測定。本專利技術的檢測方法包括樣品前處理和高效液相色譜測定；所述樣品前處理包括酶解、提取、凈化、濃縮、復溶和過濾，本專利技術樣品的前處理先采用酶解，酶解之后再加入提取試劑，其中，水可以增加樣品的分散程度，從而提高有機溶劑與樣品酶解液充分接觸，得以改善提取效果；同時，將酶解與水、有機溶劑提取相互結合，協同有效地縮短樣品的提取時間。作為上述技術方案的改進，所述步驟(1)中，酶解時間為20min。優選地，由于β-葡萄醛酸苷肽酶/硫酸脂酶最佳活性條件為：pH＝5.2，溫度為37℃，因此乙酸銨緩沖液的pH值為5.2，溫度為37℃。作為上述技術方案的改進，所述步驟(2)中，所述提取溶劑為二氯甲烷；二氯甲烷具有較優的提取效果。作為上述技術方案的改進，所述步驟(2)中，有機溶劑為乙酸乙酯和二甲基亞砜的混合液，且乙酸乙酯與二甲基亞砜的體積比為2:1，乙酸乙酯和二甲基亞砜的混合液具有較優的提取效果。作為上述技術方案的改進，所述步驟(2)中，按照每克樣品加入9mL提取試劑的比例向所得樣品酶解液中加入提取試劑，且所述提取試劑中，水和有機溶劑的體積比為1:4；過多的水分和少量的有機溶劑將影響瘦肉精的提取效果。作為上述技術方案的改進，所述步驟(3)中，吸水劑與樣品的質量比為3:5，鹽析劑與樣品的質量比為1.5:1。適量的吸水劑、鹽析劑可以提高瘦肉精溶解在提取試劑的有機溶劑中，又可以避免過多鹽離子影響后續的高效液相色譜測定。作為上述技術方案的改進，所述步驟(5)中，乙酸水溶液中乙酸的體積分數為0.20％，乙酸水溶液與乙醇的體積比為1:2。提取出瘦肉精的溶解效率較高，且更匹配高效液相色譜梯度洗脫程序。作為上述技術方案進一步地改進，所述高效液相色譜測定的條件為：色譜柱為：C18色譜柱，柱長為250mm，柱內徑為4.6mm，粒徑為5μm；檢測波長為：243nm；流速為：0.5mL/mim；進樣量為：10μL；流動相由流動相A和流動相B組成，流動相A為0.05mol/ml乙酸銨水溶液，且流動相A中含有體積分數為0.1％的乙酸，流動相B為乙醇。在所述測定條件下，瘦肉精具有明顯的吸收峰。作為上述技術方案更進一步地改進，所述高效液相色譜的梯度洗脫程序為:時間為0min時，流動相中流動相A的體積分數為75％，流動相B的體積分數為25％；時間為5min時，流動相中流動相A的體積分數為60％，流動相B的體積分數為40％；時間為8min時，流動相中流動相A的體積分數為60％，流動相B的體積分數為40％；時間為13min時，流動相中流動相A的體積分數為40％，流動相B的體積分數為60％；時間為15min時，流動相中流動相A的體積分數為40％，流動相B的體積分數為60％。在所述梯度洗脫程序中，克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺易區分開。作為上述技術方案更進一步地改進，所述高效液相色譜測定的標準品為克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺，標準品溶液的溶劑為乙醇。將標準品溶液注入高效液相色譜儀，以峰面積(Y)為縱坐標，標準品混合液的濃度(X，μg/mL)為橫坐標，繪制標準曲線。本專利技術的有益效果在于：本專利技術提供一種生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法，本專利技術的檢測方法包括樣品前處理和高效液相色譜測定；樣品前處理包括酶解、提取、凈化、濃縮、復溶和過濾，提取試劑為水和有機溶劑，將樣品的酶解和水、有機溶劑提取相結合可以縮短提取時間和提高瘦肉精的提取效率。凈化過程中采用吸水劑(如Na2SO4)和鹽析劑(如NaCl)，可以使瘦肉精充分地溶解在提取試劑的有機溶劑中。本專利技術還改進高效液相色譜測定的條件，使溶解在乙酸水溶液與乙醇混合溶中瘦肉精(克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺)能被流動相分離開來，進行快速有效地檢測。具體實施方式為更好地說明本專利技術的目的、技術方案和優點，下面本文檔來自技高網...

【技術保護點】
生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法為：先進行樣品前處理，得到樣品溶液，再采用高效液相色譜測定所得樣品溶液；其中，所述樣品為生鮮肉或肉制品，樣品前處理包括以下步驟:(1)酶解：稱取攪碎的樣品，向樣品中加入緩沖液和酶，酶解10～30min后離心，取上清液即得樣品酶解液；所述緩沖液為乙酸銨溶液，所述酶包括β?葡萄醛酸苷肽酶和芳基硫酸脂酶；(2)提取：按照每克樣品加入6～10mL提取試劑的比例向所得樣品酶解液中加入提取試劑，超聲提取5～10min，即得樣品提取液；其中，所述提取試劑由水和有機溶劑組成，水和有機溶劑的體積比為1:3～1:5，且所述有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、環己烷和二甲基亞砜中的至少一種；(3)凈化：向所得樣品提取液中加入吸水劑和鹽析劑，混勻后離心，取上清液即得樣品凈化液；所述吸水劑與樣品的質量比為1:2～2:3，所述鹽析劑與樣品的質量比為1:1～2:1；(4)濃縮：氮吹將所得樣品凈化液進行氮吹濃縮，得到濃縮物；(5)復溶：采用由乙酸水溶液和乙醇組成的混合液溶解步驟(4)所得濃縮物，得到樣品復溶液；所述乙酸水溶液中乙酸的體積分數為0.15％～0.25％，乙酸水溶液與乙醇的體積比為1:1～1:3；(6)過濾：向步驟(5)所得樣品復溶液中加入吸附劑，混勻后離心、取上清液，再使用濾膜過濾，即得樣品溶液。...

【技術特征摘要】
1.生鮮肉及肉制品中瘦肉精的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法為：先進行樣品前處理，得到樣品溶液，再采用高效液相色譜測定所得樣品溶液；其中，所述樣品為生鮮肉或肉制品，樣品前處理包括以下步驟:(1)酶解：稱取攪碎的樣品，向樣品中加入緩沖液和酶，酶解10～30min后離心，取上清液即得樣品酶解液；所述緩沖液為乙酸銨溶液，所述酶包括β-葡萄醛酸苷肽酶和芳基硫酸脂酶；(2)提取：按照每克樣品加入6～10mL提取試劑的比例向所得樣品酶解液中加入提取試劑，超聲提取5～10min，即得樣品提取液；其中，所述提取試劑由水和有機溶劑組成，水和有機溶劑的體積比為1:3～1:5，且所述有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、環己烷和二甲基亞砜中的至少一種；(3)凈化：向所得樣品提取液中加入吸水劑和鹽析劑，混勻后離心，取上清液即得樣品凈化液；所述吸水劑與樣品的質量比為1:2～2:3，所述鹽析劑與樣品的質量比為1:1～2:1；(4)濃縮：氮吹將所得樣品凈化液進行氮吹濃縮，得到濃縮物；(5)復溶：采用由乙酸水溶液和乙醇組成的混合液溶解步驟(4)所得濃縮物，得到樣品復溶液；所述乙酸水溶液中乙酸的體積分數為0.15％～0.25％，乙酸水溶液與乙醇的體積比為1:1～1:3；(6)過濾：向步驟(5)所得樣品復溶液中加入吸附劑，混勻后離心、取上清液，再使用濾膜過濾，即得樣品溶液。2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中，酶解時間為20min。3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中，有機溶劑為二氯甲烷。4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中，有機溶劑為乙酸乙酯和二甲基亞砜的混合液，且乙酸乙酯與二甲基亞砜的體...

【專利技術屬性】
技術研發人員：謝家寬，
申請(專利權)人：廣東增源檢測技術有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東,44