一種辣木耐冷性的快速鑒定方法技術

本發(fā)明專利技術公開一種辣木耐冷性的快速鑒定方法，包括選取若干待鑒定辣木植株枝條末梢10cm?20cm的部分作為試材，剪去葉片和側(cè)枝并清洗干凈，吸干試材表面上的水分；把試材剪成0.8?1.2cm長的小段，充分混合制成至少5組樣本；取其中一組樣本作為對照樣本，另外的各組樣本為低溫脅迫樣本；各低溫脅迫樣本封裝于塑料袋后放置于制冷設備中按不同梯度的低溫脅迫溫度進行8h?16h的低溫脅迫處理，然后在室溫下解凍；測定各組樣本外滲液的煮前電導值和煮后電導值，計算各低溫脅迫樣本的細胞傷害率，最后利用細胞傷害率數(shù)值、脅迫溫度和Logistic方程計算辣木的低溫半致死溫度LT50，LT50值越低說明該品種的耐冷性越強。本發(fā)明專利技術可快速評定待鑒定辣木品種的耐冷能力。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】
一種辣木耐冷性的快速鑒定方法
本專利技術涉及植物耐冷能力鑒定評價的
，尤其是一種辣木耐冷性的快速鑒定方法。
技術介紹
辣木(Moringaspp.)又稱鼓槌樹、奇樹，屬辣木科(Moringaceae)辣木屬(MoringaAdans.)，是一種熱帶、亞熱帶多功能植物，富含植物蛋白、維生素、葉酸、鈣、鐵等多種營養(yǎng)成分，具有獨特經(jīng)濟價值和保健功效。辣木適宜于熱帶及南亞熱帶地區(qū)種植，耐冷性是制約其向中亞熱帶及更北地區(qū)推廣的最大障礙。目前國內(nèi)外對辣木的研究主要集中在藥用價值和飼料利用等方面，而對辣木耐冷性的研究還未見有詳細報道，辣木耐冷性的鑒定評價還沒有統(tǒng)一標準。因此開展辣木品種資源耐冷性快速鑒定研究，對辣木的推廣及耐冷育種具有重要意義。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術要解決的技術問題是提供一種辣木耐冷性的快速鑒定方法，其可快速評定待鑒定辣木品種的耐冷能力，有利于辣木耐冷品種的選育及推廣。為達到上述目的，本專利技術的技術方案是：一種辣木耐冷性的快速鑒定方法，包括以下步驟：步驟一、選取若干待鑒定辣木植株枝條末梢10cm-20cm的部分作為試材，剪去葉片和側(cè)枝；然后用水清洗干凈后，吸干或晾干試材表面上的水分；步驟二、把吸干或晾干后的試材剪成0.8-1.2cm長的小段，充分混合后分成數(shù)量或質(zhì)量大致相同的n組樣本，n≥5；步驟三、取其中一組樣本作為對照樣本，不做低溫脅迫；另外的各組樣本為低溫脅迫樣本，各低溫脅迫樣本封裝于塑料袋后放置于制冷設備中進行8h-16h的低溫脅迫，各組低溫脅迫樣本的脅迫溫度依次為t2、t3……tn，tn-1-tn＝t0，其中t2為3℃-5℃，t0為3℃-5℃，各組低溫脅迫樣本的低溫脅迫時間相同；步驟四、低溫脅迫時間到后，從制冷設備中取出各組低溫脅迫樣本，然后在20℃-25℃的室溫下解凍1h-2h；步驟五、在解凍后的各組低溫脅迫樣本和未脅迫處理的對照樣本中分別取2g-5g的樣本，各組樣本中取出的樣本質(zhì)量相同，然后分別放入對應試管中，往各試管中加入樣本質(zhì)量8-12倍的去離子水，加入各試管中的去離子水的質(zhì)量相同；接著把各試管放入密閉容器中，然后利用真空泵對密閉容器進行抽氣處理10min-20min，各試管的抽氣處理時間相同，再接著取出各試管，用電導儀測定各試管中外滲液的煮前電導值；再接著把各試管放入100℃沸水浴中煮10min-20min，各試管在100℃沸水浴中煮的時間相同，然后取出各試管冷卻至20℃-25℃的室溫，再利用電導儀測定各試管中外滲液的煮后電導值；其中設定L11為對照樣本外滲液的煮前電導值，L21為對照樣本外滲液的煮后電導值，其它各低溫脅迫樣本外滲液的煮前電導值和外滲液的煮后電導值分別為L12、L22，L13、L23……L1n、L2n；步驟六、利用上述測定的電導值和細胞傷害率的計算公式y(tǒng)(％)＝[1-(1-L1n/L2n)/(1-L11/L21)]×100％計算經(jīng)低溫脅迫的各組樣本的細胞傷害率，獲得經(jīng)低溫脅迫的各組樣本的細胞傷害率為y2,y3……yn；步驟七、利用上述計算出來的細胞傷害率y2,y3……yn和Logistic方程“y＝k/(1+a·e-bt)”計算辣木的低溫半致死溫度LT50，Logistic方程中，y為上述計算出來的細胞傷害率，即對應為y2,y3……yn，k為細胞傷害率的飽和值，本方法中細胞傷害率消除本底干擾k值為100％，t為脅迫溫度，即對應為t2、t3……tn，a、b為參數(shù)；先把Logistic方程轉(zhuǎn)換成ln(k-y)/y＝lna-bt，令y’＝ln(k-y)/y＝lna-bt，y’為轉(zhuǎn)化后的細胞傷害率，利用脅迫溫度t對應轉(zhuǎn)化后的細胞傷害率y’值按照直線回歸方程的方法求出直線回歸方程和參數(shù)a、b，那么對直線回歸方程進行二階導數(shù)變換得方程曲線的拐點值lna/b，即為半致死溫度LT50＝lna/b；根據(jù)計算出的低溫半致死溫度LT50，可以判斷該辣木品種的耐冷性，低溫半致死溫度LT50越低說明該品種的耐冷性越強。進一步優(yōu)選，所述步驟一中，選取若干待鑒定辣木植株枝條末梢10cm-15cm的部分作為試材，剪去葉片和側(cè)枝后依次用自來水、去離子水沖洗干凈，然后用吸水紙吸干選取試材表面的水分。這樣可提高鑒定速度。優(yōu)選所述制冷設備為冰箱，步驟三中，每一組低溫脅迫樣本放置在一臺冰箱中。選用冰箱可以降低設備投入。優(yōu)選所述的室溫為25℃。進一步優(yōu)選，所述步驟二中，n＝7，即充分混合后分成數(shù)量或質(zhì)量大致相同的7組樣本。選擇7組的樣本數(shù)對鑒定速度和鑒定的準確性起到較好平衡，既減少投入，又能提高效率，確保鑒定的準確性。再進一步優(yōu)選，步驟三中、各低溫脅迫樣本封裝于塑料袋后放置于制冷設備中進行8h低溫脅迫。再進一步優(yōu)選，步驟三中、t2為4℃，t0為4℃，各組低溫脅迫樣本的脅迫溫度依次為4℃、0℃、-4℃、-8℃、-12℃和-16℃。再進一步，所述制冷設備從20℃-25℃室溫降至所述脅迫溫度的降溫速率為4℃/h。進一步優(yōu)選，步驟五中，在解凍后的各組低溫脅迫樣本和未脅迫處理的對照樣本中分別取2g的樣本，然后分別放入對應試管中，往各試管中加入樣本質(zhì)量10倍的去離子水，即加入20ml的去離子水，各試管的容量為50ml，各試管放入密封容器進行10min的抽氣處理。進一步優(yōu)選，步驟三中，對照樣本一經(jīng)確定，即按照步驟五的方法測定對照樣本外滲液的煮前電導值L11和外滲液的煮后電導值L21。這樣可以加快鑒定的速度。本專利技術的有益效果為：1、本專利技術以辣木枝條末梢10cm-20cm的部分作為試材，由于此部分處于半木質(zhì)化狀態(tài)，其植物細胞對寒冷環(huán)境比較敏感，通過低溫脅迫，測定其耐冷能力比較客觀準確，然后借助合理的樣本制作和樣本數(shù)量的確定，通過測定樣本的外滲液的煮前電導值和外滲液的煮后電導值，可以較快計算其細胞傷害率，然后利用Logistic方程“y＝k/(1+a·e-bt)”、細胞傷害率和對應的脅迫溫度可以快速計算辣木的低溫半致死溫度LT50。根據(jù)計算出的低溫半致死溫度LT50，可以判斷該辣木品種的耐冷性，低溫半致死溫度LT50越低說明該品種的耐冷性越強。這種鑒定方法能夠快速評定待鑒定辣木品種的耐冷能力，有利于辣木耐冷品種的選育及推廣。2、在測定外滲液的煮前電導值時，把各試管放入密閉容器中，然后利用真空泵對密閉容器進行抽氣處理，以抽出細胞間隙空氣，使水分容易滲入細胞間隙，細胞內(nèi)的溶質(zhì)易于滲出，有效縮短檢測時間，也利于提高檢測的準確性。3、本方法操作簡便，周期短，準確性高，可多次重復測定，能提供客觀、量化數(shù)據(jù)，適合大量材料的快速篩選。4、本方法設備簡單，除制冷設備外，其他設備相對便宜，鑒定成本低，利于推廣。具體實施方式下面結(jié)合具體的實施方式對本專利技術作進一步詳細說明。本具體實施方式選取‘多油辣木’、‘狹瓣辣木’、‘PKM1’這3個品種辣木的4年生健康植株作為鑒定對象，進行三次的鑒定操作，該供試植株均定植于福建省熱帶作物科學研究所辣木種質(zhì)資源圃。實施例一，隨機選取兩棵‘多油辣木’的4年生健康植株作為鑒定對象。一種辣木耐冷性的快速鑒定方法，包括以下步驟：步驟一，在兩棵‘多油辣木’的植株中隨機選取若干待鑒定辣木植株枝條末梢10cm-15cm的部分作為試材，選取的枝條必須是健康枝條，特別是選取的部分不受病蟲案影響，然后剪去葉片和側(cè)枝；依次用本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種辣木耐冷性的快速鑒定方法，包括以下步驟：步驟一、選取若干待鑒定辣木植株枝條末梢10cm?20cm的部分作為試材，剪去葉片和側(cè)枝；然后用水清洗干凈后，吸干或晾干試材表面上的水分；步驟二、把吸干或晾干后的試材剪成0.8?1.2cm長的小段，充分混合后分成數(shù)量或質(zhì)量大致相同的n組樣本，n≥5；步驟三、取其中一組樣本作為對照樣本，不做低溫脅迫；另外的各組樣本為低溫脅迫樣本，各低溫脅迫樣本封裝于塑料袋后放置于制冷設備中進行8h?16h的低溫脅迫，各組低溫脅迫樣本的脅迫溫度依次為t2、t3……tn，tn?1?tn＝t0，其中t2為3℃?5℃，t0為3℃?5℃，各組低溫脅迫樣本的低溫脅迫時間相同；步驟四、低溫脅迫時間到后，從制冷設備中取出各組低溫脅迫樣本，然后在20℃?25℃的室溫下解凍1h?2h；步驟五、在解凍后的各組低溫脅迫樣本和未脅迫處理的對照樣本中分別取2g?5g的樣本，各組樣本中取出的樣本質(zhì)量相同，然后分別放入對應試管中，往各試管中加入樣本質(zhì)量8?12倍的去離子水，加入各試管中的去離子水的質(zhì)量相同；接著把各試管放入密閉容器中，然后利用真空泵對密閉容器進行抽氣處理10min?20min，各試管的抽氣處理時間相同，再接著取出各試管，用電導儀測定各試管中外滲液的煮前電導值；再接著把各試管放入100℃沸水浴中煮10min?20min，各試管在100℃沸水浴中煮的時間相同，然后取出各試管冷卻至20℃?25℃的室溫，再利用電導儀測定各試管中外滲液的煮后電導值；其中設定L11為對照樣本外滲液的煮前電導值，L21為對照樣本外滲液的煮后電導值，其它各低溫脅迫樣本外滲液的煮前電導值和外滲液的煮后電導值分別為L12、L22，L13、L23……L1n、L2n；步驟六、利用上述測定的電導值和細胞傷害率的計算公式y(tǒng)(％)＝[1?(1?L1n/L2n)/(1?L11/L21)]×100％計算經(jīng)低溫脅迫的各組樣本的細胞傷害率，獲得經(jīng)低溫脅迫的各組樣本的細胞傷害率為y2,y3……yn；步驟七、利用上述計算出來的細胞傷害率y2,y3……yn和Logistic方程“y＝k/(1+a·e...

【技術特征摘要】
1.一種辣木耐冷性的快速鑒定方法，包括以下步驟：步驟一、選取若干待鑒定辣木植株枝條末梢10cm-20cm的部分作為試材，剪去葉片和側(cè)枝；然后用水清洗干凈后，吸干或晾干試材表面上的水分；步驟二、把吸干或晾干后的試材剪成0.8-1.2cm長的小段，充分混合后分成數(shù)量或質(zhì)量大致相同的n組樣本，n≥5；步驟三、取其中一組樣本作為對照樣本，不做低溫脅迫；另外的各組樣本為低溫脅迫樣本，各低溫脅迫樣本封裝于塑料袋后放置于制冷設備中進行8h-16h的低溫脅迫，各組低溫脅迫樣本的脅迫溫度依次為t2、t3……tn，tn-1-tn＝t0，其中t2為3℃-5℃，t0為3℃-5℃，各組低溫脅迫樣本的低溫脅迫時間相同；步驟四、低溫脅迫時間到后，從制冷設備中取出各組低溫脅迫樣本，然后在20℃-25℃的室溫下解凍1h-2h；步驟五、在解凍后的各組低溫脅迫樣本和未脅迫處理的對照樣本中分別取2g-5g的樣本，各組樣本中取出的樣本質(zhì)量相同，然后分別放入對應試管中，往各試管中加入樣本質(zhì)量8-12倍的去離子水，加入各試管中的去離子水的質(zhì)量相同；接著把各試管放入密閉容器中，然后利用真空泵對密閉容器進行抽氣處理10min-20min，各試管的抽氣處理時間相同，再接著取出各試管，用電導儀測定各試管中外滲液的煮前電導值；再接著把各試管放入100℃沸水浴中煮10min-20min，各試管在100℃沸水浴中煮的時間相同，然后取出各試管冷卻至20℃-25℃的室溫，再利用電導儀測定各試管中外滲液的煮后電導值；其中設定L11為對照樣本外滲液的煮前電導值，L21為對照樣本外滲液的煮后電導值，其它各低溫脅迫樣本外滲液的煮前電導值和外滲液的煮后電導值分別為L12、L22，L13、L23……L1n、L2n；步驟六、利用上述測定的電導值和細胞傷害率的計算公式y(tǒng)(％)＝[1-(1-L1n/L2n)/(1-L11/L21)]×100％計算經(jīng)低溫脅迫的各組樣本的細胞傷害率，獲得經(jīng)低溫脅迫的各組樣本的細胞傷害率為y2,y3……yn；步驟七、利用上述計算出來的細胞傷害率y2,y3……yn和Logistic方程“y＝k/(1+a·e-bt)”計算辣木的低溫半致死溫度LT50，Logistic方程中，y為上述計算出來的細胞傷害率，即對應為y2,y3……yn，k為細胞傷害率的飽和值，本方法中細胞傷害率消除本底干擾k值為100％，t為脅迫溫度，即對應...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：張?zhí)煜?/a>，林藝華，林宗鏗，陳振東，曹明華，楊俊杰，
申請(專利權)人：福建省熱帶作物科學研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：福建,35