抗氧化及預(yù)防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法及其應(yīng)用技術(shù)

抗氧化及預(yù)防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法，涉及一種融合蛋白。根據(jù)ＰｒｏＴα的基因序列，設(shè)計(jì)上下游引物Ｐ１和Ｐ２，將Ｐ１引入ＢａｍＨⅠ酶切位點(diǎn)，將Ｐ２引入ＥｃｏＲⅠ酶切位點(diǎn)。采用ＲＴ－ＰＣＲ方法得前胸腺素α原全長基因ｃＤＮＡ，將ＰＣＲ產(chǎn)物純化后與ｐＭＤ１８－Ｔ　　Ｖｅｃｔｏｒ連接，轉(zhuǎn)化ＤＨ５α感受態(tài)細(xì)胞，對７個(gè)單克隆基因序列和參考的ｐｒｏＴα的基因序列比對。用ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ雙酶切ＰｒｏＴα　　ＰＣＲ產(chǎn)物，將ＰｒｏＴα基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的原核表達(dá)載體ｐＧＥＸ　　６Ｐ－１中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌得轉(zhuǎn)基因ＢＬ２１菌株，培養(yǎng)后加入ＩＰＴＧ誘導(dǎo)表達(dá)，菌液離心后的沉淀用上樣緩沖液溶解，離心取上清電泳。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
抗氧化及預(yù)防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法，其特征在于其包括以下步驟：　　　　１）根據(jù)ＰｒｏＴα的基因序列，設(shè)計(jì)上游引物Ｐ１和下游引物Ｐ２，上游引物Ｐ１和下游引物Ｐ２分別為：　　　　上游引物Ｐ１：５’－ＧＣＧＧＡＴＣＣＡＴＧＴＣＡＧＡＣＧＣＡＧＣＣＧＴＡ－３’，　　　　下游引物Ｐ２：５’－ＧＣＧＡＡＴＣＣＣＴＡＧＴＣＡＴＣＣＴＣＧＴＣＧＧＴＣ－３’，　　　　將上游引物Ｐ１引入ＢａｍＨⅠ酶切位點(diǎn)，將下游引物Ｐ２引入ＥｃｏＲ　　Ⅰ酶切位點(diǎn)；　　　　２）采用ＲＴ－ＰＣＲ方法獲得前胸腺素α原全長基因ｃＤＮＡ，將ＰＣＲ產(chǎn)物純化后與ｐＭＤ１８－Ｔ　　Ｖｅｃｔｏｒ連接，重組載體命名為ＴＰ，轉(zhuǎn)化ＤＨ５α感受態(tài)細(xì)胞，將鑒定的陽性菌液測序；　　　　３）采用生物學(xué)軟件ＤＮＡｍａｎ對７個(gè)單克隆基因序列和參考的ｐｒｏＴα的基因序列進(jìn)行比對；　　　　４）用ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ雙酶切ＰｒｏＴαＰＣＲ產(chǎn)物，將ＰｒｏＴα基因片斷插入經(jīng)同樣雙酶切的原核表達(dá)載體ｐＧＥＸ　　６Ｐ－１中，命名為ＰＰ，轉(zhuǎn)化大腸桿菌ＢＬ２１，獲得轉(zhuǎn)基因ＢＬ２１菌株，在ＬＢ培養(yǎng)基３７℃培養(yǎng)，加入ＩＰＴＧ，３７℃誘導(dǎo)表達(dá)，菌液離心后的沉淀用上樣緩沖液溶解，沸水浴后離心取上清，進(jìn)行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳，獲得融合蛋白。...

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周克夫，李俊燕，
申請(專利權(quán))人：廈門大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：92[中國|廈門]