一種真菌制備草酸脫羧酶的方法技術

本發明專利技術涉及一種真菌制備草酸脫羧酶的方法，包括：（１）有機酸或無機酸溶液經過１２１℃高溫濕熱滅菌；（２）彩絨革蓋菌（Ｔｒａｍｅｔｅｓ　　ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）或黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｎｉｇｅｒ）等真菌的液體培養基初始ｐＨ值約為５．０～５．５，反應溫度２０～２５℃，通空氣量為２０～３０Ｌ／Ｌ.ｈ，在菌體生長的第三或第四天，快要進入對數生長期時開始添加上述的酸溶液，ｐＨ值０～３，用離心收集菌體細胞或過濾得到菌體細胞，用０．０５～０．２Ｍ　　ｐＨ值為３～３．７的醋酸緩沖溶液淋洗后再次收集，冷凍，研磨菌絲，加入０．０５～０．２Ｍ　　ｐＨ值為３～３．７的醋酸－醋酸鈉緩沖液，繼續研磨成糊狀，離心得到草酸脫羧酶液。本發明專利技術簡便易行，成本低，草酸脫羧酶活力是未加酸的８倍以上。草酸脫羧酶可廣泛應用于醫藥、食品、飲料、造紙、農業、分析等方面。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種真菌制備草酸脫羧酶的方法，包括下列步驟：（１）配制酸溶液濃度１ｍｏｌ／Ｌ～５ｍｏｌ／Ｌ的有機酸或無機酸溶液經過１２０～１２１℃高溫濕熱滅菌１０～３０ｍｉｎ，或過濾除菌；（２）制備草酸脫羧酶彩絨革蓋菌或黑曲 霉液體培養基初始ｐＨ值約為４．５～５．５，反應溫度２０～２８℃，通空氣量為２０～３０Ｌ／Ｌ.ｈ，在菌體生長的第三或第四天，快要進入對數生長期時開始添加上述的酸溶液作為誘導劑，使培養基ｐＨ值０～３，在培養過程中定期取樣測酶活，至酶活最大時終止反應；用離心機于轉速９０００～１２０００ｒｐｍ條件下離心２０～３０ｍｉｎ收集菌體細胞，或通過過濾得到新鮮的菌體細胞，用０．０５～０．２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ值為３～３．７的醋酸緩沖溶液淋洗后再次收集，將得到的新鮮菌絲體用液氮迅速冷凍，研磨 菌絲體成粉末狀，加入０．０５～０．２ｍｏｌ／ＬｐＨ值為３～３．７的醋酸－醋酸鈉緩沖液，繼續研磨成糊狀，離心機在１２０００ｒｐｍ，離心２０～３０ｍｉｎ，得到草酸脫羧酶液。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：洪楓，朱翠俠，
申請(專利權)人：東華大學，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]