短梗霉多糖薄膜及用于菌種保藏的方法技術

本發明專利技術提供一種短梗霉多糖（ｐｕｌｌｕｌａｎ）薄膜及用于菌種保藏的方法，該薄膜流涎法制備，膜的厚度為０．０２ｍｍ～０．０４ｍｍ，拉伸強度２７ＭＰａ～３２ＭＰａ，直角撕裂強度３１ＫＮ／ｍ～３８ＫＮ／ｍ，透光率９５％～９８％，氧氣透過量２．７ｃｍ↑［３］／ｍ↑［２］．ｂａｒ．ｄ～１．６ｃｍ↑［３］／ｍ↑［２］．ｂａｒ．ｄ；采用短梗霉多糖薄膜保藏菌種的方法，在兩層經無菌處理短梗霉多糖薄膜的中間涂上甘油和海藻糖保護劑及微生物菌種，貼緊后以塑料膜套封，可以滿足干燥、缺氧、低溫、缺營養和添加保護劑等菌種保藏的環境要素。這種帶有菌種的膜片匯編成冊，便于微生物菌種的分類研究，占地面積小，操作方便，不需要昂貴的設備，郵寄方便，使用時只需剪下菌種保藏片的一個小保藏單元，溶于培養基中，微生物即可生長。（*該技術在2024年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種新的微生物保藏方法。
技術介紹
微生物菌種保藏方法常用的有斜面法，砂管法、礦油保藏法、冷凍干燥法和液氮保藏法等。斜面法、礦油保藏法，砂管法等保藏時間過長菌種會逐漸衰亡，冷凍干燥法和液氮法菌種保藏效果好，但需相應設備條件，成本較高，液氮還易引起爆炸，不安全。上述各種方法保藏菌種所占用空間大，郵寄，使用都不方便。現行各種微生物保藏方法比較(周德慶，微生物學教程，高等教育出版社2002，5)見下表
技術實現思路
本專利技術的目的在于針對上述存在的問題，提出一種，這種保藏方法占用空間小，保藏成本低，郵寄、使用方便、安全。實現本專利技術目的的短梗霉多糖薄膜，其膜的厚度為0.02mm～0.04mm，拉伸強度27Mpa～32Mpa，直角撕裂強度31KN/m～38KN/m，透光率95％～98％，氧氣透過量2.7cm3/m2.bar.d～1.6cm3/m2.bar.d所述的短梗霉多糖薄膜的制備方法，以流涎法制備，其方法為首先由發酵得到短梗霉多糖，發酵原料采用淀粉，淀粉經水解得到葡萄糖和寡聚糖混合物，該混合物配制培養基，由短梗霉發酵轉化成為短梗霉多糖；該多糖經菌體分離、脫色、過濾、濃縮成濃度為15g/100ml～20g/100ml的短梗霉多糖溶液；將濃縮的短梗霉多糖溶液裝入密封容器內，然后給密封容器內施加0.08Mpa～0.15Mpa的氣壓，噴嘴開度調至0.1mm～0.2mm，熱風溫度調至60～80℃，控制干燥后的薄膜厚度為0.02mm～0.04mm。所述的短梗霉多糖薄膜用于保藏菌種的方法，首先將其薄膜裁剪成面積大小為8mm×8mm～20mm×20mm單元膜片，并進行無菌處理；然后在兩層經無菌處理的短梗霉多糖薄膜中間涂上甘油和海藻糖保護劑及微生物菌種，將二膜貼緊后，外層以另二層經無菌處理的塑料膜套封，構成一個多糖薄膜菌種保藏單元；再將該菌種保藏單元匯編成保藏冊，在-24℃以下保存，時間可達12個月，使用時取出保藏單元，剪開塑料外封，將含有菌種的多糖膜投入培養基中，多糖膜溶化，菌種即可生長。所采用的外層塑料薄膜為耐高溫和可熱封的尼龍復合膜，或是聚酯復合膜，耐受溫度為121℃～125℃。所述的短梗霉多糖薄膜的無菌處理，其處理方法為短梗霉多糖膜用15W紫外燈20cm距離照射20分鐘。所述的外封的塑料膜的無菌處理，其處理方法為其塑料膜在滅菌鍋內121℃滅菌30分鐘。本專利技術中待保藏的微生物菌種從斜面上和平皿菌落上挑取，涂布于一層短梗霉多糖膜之上，另一層短梗霉多糖膜涂布保護劑甘油和海藻糖、然后將二膜貼緊、外層套二張塑料膜，并將四邊封口，形成保藏單元，其操作過程全部在無菌室內完成。其保藏單元片匯編成類似于集郵冊的細菌分冊，酵母分冊，霉菌分冊，放線菌分冊，冊的材料可以是塑料聚酯膜等，冊內的每一頁可插入多張保藏單元片，每一冊由若干頁組成。本專利技術具體是這樣來實現的第一、無菌短梗霉多糖膜片制備首先由發酵得到短梗霉多糖，發酵原料采用淀粉，淀粉經水解得到葡萄糖和寡聚糖混合物，該混合物配制培養基，由短梗霉發酵轉化成為短梗霉多糖。該多糖經菌體分離、脫色、過濾、濃縮成濃度為15g/100ml～20g/100ml，以流涎法制得短梗霉多糖薄膜，流涎法制膜由三個單元組成，第一個單元為一密封容器內裝濃縮的多糖；第二個單元為流涎噴頭；第三個單元是配有不銹鋼循環帶的干燥箱(見圖1)，箱內可通熱風加熱。密封容器與流涎噴頭以管道相連，制膜時，密封容器內施加0.08Mpa～0.15Mpa的氣壓，多糖被壓入流涎噴頭經噴嘴均勻分布到不銹鋼循環帶上，噴嘴開度調至0.1mm～0.2mm，熱風溫度調至60～80℃，控制干燥后的薄膜厚度為0.02mm～0.04mm。制得的膜裁剪為8mm×8mm～20mm×20mm的面積大小，該多糖膜是無色透明的，其拉伸強度27Mpa～32Mpa，直角撕裂強度31KN/m～38KN/m，透光率95％～98％，氧氣透過量2.7cm3/m2.bar.d～1.6cm3/m2.bar.d以上薄膜置于無菌室內，在15W紫外燈下照射殺菌，照射距離為20cm，照射時間為20分鐘，經照射處理后成為無菌的多糖膜備用。第二、外封的塑料膜的選取和滅菌短梗霉多糖膜作載體保藏微生物，必須要外封一層塑料膜，這樣保藏膜片才不會污染空氣中的微生物，外封的塑料膜也必須是無菌的，這樣就可保證封藏的多糖膜上保存的菌種是無雜菌的，外封的塑料膜選取耐高溫的尼龍膜、聚酯或類似的復合材料，將這種塑料膜包扎后在滅菌鍋內121℃滅菌30分鐘，取出置無菌室內，備用。第三、待保藏微生物菌種的培養本專利技術保藏的微生物菌種主要指細菌、酵母、霉菌和放線菌，所保藏的微生物可以是菌種保藏中心收藏的菌種，也可是其它任何途徑得來的菌種，待培養的微生物菌種以其相應的培養基分別在平皿和試管斜面上進行培養，得到單菌落和純的斜面菌種。第四、制作菌種保藏單元在無菌室內，挑取生長好的純菌種，涂布于準備好的短梗霉多糖膜片上，在另一多糖膜片上涂布滅過菌的甘油，然后將二膜片緊貼，甘油和菌種擠壓混勻被封存在二膜之間，取已滅過菌的二層塑料膜，面積略大于上述多糖膜片，以便于熱封機四邊封口。將二層塑料膜上下套封載有菌種的多糖膜片，以手提式熱封機沿邊緣四邊封口，形成密封的菌種保藏單元。第五、制作菌種保藏冊以一般塑料材料如聚酯等制備成集郵冊形式的菌種保藏冊，冊的封面可標上細菌分冊，霉菌分冊，酵母分冊，放線菌分冊。冊內頁具有類似于集郵冊的很多柵格，柵格內分門別類的插入上述已制備的菌種保藏單元片。上述保藏冊置于冰箱內-24℃以下長期保存。第六、測保藏單元活菌數將上述保藏冊的菌種保藏單元，每3-6個月各取一菌測其活菌數。以短梗霉多糖膜為載體進行菌種保藏，由于短梗霉多糖成膜性好，所成的膜不透氧，具有與塑料膜類似的可熱封性，可以滿足菌種保藏低溫、無氧、干燥、缺營養和添加保護劑等環境要素，由于短梗霉多糖的基本結構是葡萄糖、對微生物沒有毒害作用。本專利技術用短梗霉多糖膜作載體保藏菌種，占用空間小，保藏成本低，郵寄、使用方便、安全。附圖說明圖1 短梗霉多糖流涎成膜和鼓風干燥示意2 菌種保藏冊封面示意中序號1流液嘴，2多糖膜料液，3控制板，4不銹鋼循環帶，5干燥箱，6鼓風機，7電熱絲，8主動機，9卷膜盤具體實施方式實施例1大米淀粉經水解得到葡萄糖和寡聚糖混合物，該混合物配制培養基，由短梗霉發酵轉化成為短梗霉多糖。該多糖經菌體分離、脫色、過濾、、精制、濃縮至濃度為20g/100ml，打入噴膜頭內，噴嘴開度0.1mm，以恒定壓力0.09MPa噴膜，循環不銹鋼帶均勻接膜，80℃熱風干燥得到0.03mm厚透明干燥的多糖薄膜一卷，測得其性能指標如下拉伸強度32Mpa直角撕裂強度38KN/m透光率96％ 氧氣透過量1.6cm3/m2.bar.d實施例2將實施例1制得的多糖膜裁剪成10mm×10mm的單元片，置于無菌室內，以15W紫外燈，20cm距離分別照射5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘對膜片殺菌，殺菌結束后，以少量生理鹽水溶解膜片，然后分別涂布在完全培養基和肉湯培養基的平皿上30℃培養6天，觀察結果如下照射時間(分鐘)5 10152030完全培養基上菌落數173 0 0 0肉湯培養基上菌落數131 0 0 0多糖膜片經紫外照本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種短梗霉多糖薄膜，其特征在于膜的厚度為０．０２ｍｍ～０．０４ｍｍ，拉伸強度２７Ｍｐａ～３２Ｍｐａ，直角撕裂強度３１ＫＮ／ｍ～３８ＫＮ／ｍ，透光率９５％～９８％，氧氣透過量２．７ｃｍ↑［３］／ｍ↑［２］．ｂａｒ．ｄ～１．６ｃｍ↑［３］／ｍ↑［２］．ｂａｒ．ｄ。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：李世杰，
申請(專利權)人：李世杰，
類型：發明
國別省市：83[中國|武漢]