IL-18抑制劑在治療或預(yù)防膿毒癥中的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種ＩＬ－１８抑制劑在制備治療和／或預(yù)防膿毒癥和其他以全身炎癥反應(yīng)綜合征（ＳＩＲＳ）為特點(diǎn)的疾病的藥物中的應(yīng)用，所述的疾病選自重度膿毒癥和膿毒癥休克，所述的藥物也用于與膿毒癥相關(guān)的心功能不全。（*該技術(shù)在2022年保護(hù)過(guò)期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本申請(qǐng)享有2001年5月16日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?0/291,463的權(quán)益，其公開(kāi)的內(nèi)容被納入作為參考。本專利技術(shù)涉及IL-18抑制劑在治療和/或預(yù)防膿毒癥(sepsis)中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1989年有人檢測(cè)到在感染小鼠的血清中用牛分枝桿菌誘導(dǎo)以及用脂多糖(LPS)攻擊的因子。這個(gè)因子在白介素-2(IL-2)存在下能夠誘導(dǎo)正常小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)液的干擾素-γ(IFN-γ)(Nakamura等人，1989)。該因子所起的作用不是IFN-γ的直接誘導(dǎo)劑，而是與IL-2、抗CD3或有絲分裂原一起作為共刺激劑。有人嘗試由內(nèi)毒素后處理過(guò)的小鼠血清進(jìn)一步鑒定這種活性，結(jié)果揭示了一種與上述活性相關(guān)、分子量為50-55kDa表觀均一的蛋白質(zhì)(Nakamura等人，1993)。由于其他細(xì)胞因子可以作為產(chǎn)生IFN-γ的共刺激劑，所以無(wú)法通過(guò)中和抗IL-1、IL-4、IL-5、IL-6或TNF的抗體來(lái)阻斷血清活性，提示它是一種截然不同的因子。同一批科學(xué)家證實(shí)了以瘡皰棒狀桿菌(P.acnes)預(yù)處理的小鼠肝臟提取物中含有由內(nèi)毒素誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-γ的共刺激劑(Okamura等人，1995)。此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷母闻K巨噬細(xì)胞群(Kupffer細(xì)胞)擴(kuò)展，所以低劑量細(xì)菌脂多糖(LPS)是可致命的，但對(duì)未經(jīng)預(yù)處理的小鼠作類似處理是不致命的。該因子被命名為IFN-γ誘導(dǎo)因子(IGIF)，后來(lái)又被稱為白細(xì)胞介素-18(IL-18)，由這些經(jīng)瘡皰棒狀桿菌處理過(guò)的小鼠肝臟提純至均漿，獲得部分氨基酸序列。采用由純化IL-18的氨基酸序列所產(chǎn)生的簡(jiǎn)并寡核苷酸來(lái)克隆小鼠IL-18cDNA(Okamura等人，1995)。IL-18的人cDNA序列在1996年已有報(bào)導(dǎo)。白細(xì)胞介素IL-18(Tsutsui等人，1996；Nakamura等人，1993；Okamura等人，1995；Ushio等人，1996；)具有IL-1蛋白質(zhì)家族的結(jié)構(gòu)特征。與其他大多數(shù)具有四螺旋束結(jié)構(gòu)的細(xì)胞因子不同，IL-18全部為β-折疊結(jié)構(gòu)。IL-18與IL-1β相似，被合成為一種沒(méi)有生物活性的前體(proIL-18)，缺少信號(hào)肽(Ushio等人，1996)。IL-1β和IL-18前體由caspase 1(IL-1β轉(zhuǎn)化酶或ICE)在P1位置上天冬氨酸殘基之后割開(kāi)。即使沒(méi)有信號(hào)肽，所得到的成熟細(xì)胞因子也可從細(xì)胞釋放出來(lái)(Ghayur等人，1997和Gu等人，1997)。眾所周知，IL-18是一種通過(guò)T輔助I型(Th1)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-2和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子)的共刺激劑(Kohnoet等人，1997)，也是通過(guò)小鼠天然殺傷細(xì)胞克隆由FAS配體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的共刺激劑(Tsutsui等人，1996)。白介素-12(IL-12)是一種由單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和其他抗原呈遞細(xì)胞產(chǎn)生的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子。它是細(xì)胞介導(dǎo)的先天性免疫反應(yīng)與后天性免疫反應(yīng)和諧結(jié)合的關(guān)鍵(Trinchieri，1998)。它由雜二聚體組成，而雜二聚體由二個(gè)分離基因的共價(jià)連接產(chǎn)物構(gòu)成重鏈(p40)和輕鏈(p35)。IL-12受某些細(xì)菌、細(xì)菌產(chǎn)物、胞內(nèi)寄生物和病毒刺激而產(chǎn)生。下列功能要?dú)w因于IL-121)它是T細(xì)胞和天然殺傷細(xì)胞的IFN-γ的強(qiáng)誘導(dǎo)劑，2)它是這些細(xì)胞的共促有絲分裂因子，3)它對(duì)大多數(shù)系統(tǒng)的Th1反應(yīng)的發(fā)生起著關(guān)鍵的作用(繼而增加IFN-γ和TNF的產(chǎn)生及增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的活化等)，4)它增強(qiáng)具有細(xì)胞毒性的T淋巴細(xì)胞和天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性，以及5)它是遲發(fā)型超敏反應(yīng)所必需的。已發(fā)現(xiàn)，IFN-α或IFN-β能抑制經(jīng)金黃色葡萄球菌Cowan 1株處理過(guò)的分離小鼠脾白細(xì)胞中IL-12的產(chǎn)生(Karp等人，2000)。最近據(jù)報(bào)，IL-12參與器官特異性自身免疫炎癥疾病的致病機(jī)理，如多發(fā)性硬化癥(Karp等人，2000)和炎癥性腸胃疾病(IBD)(Blumberg和Strober，2001；Fiocchi，1999)，所以它被認(rèn)為是治療這些疾病的潛在藥靶。IL-18和IL-12在誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ上有明顯的協(xié)同作用(Okamura等人，1998)。對(duì)這種協(xié)同作用的機(jī)理的研究顯示，IL-12能使產(chǎn)生IFN-γ的細(xì)胞上IL-18受體的兩條鏈的表達(dá)上調(diào)(Kim等人，2001)。雖然IL-12和IL-18都能激活先天性免疫和后天性免疫，但受活化巨噬細(xì)胞刺激使它們的產(chǎn)生過(guò)量可誘導(dǎo)多種器官性疾病，包括免疫系統(tǒng)機(jī)能障礙(Seki等人，2000)。細(xì)胞因子結(jié)合蛋白(可溶性細(xì)胞因子受體)通常是其各自細(xì)胞表面細(xì)胞因子受體的胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。它們或通過(guò)可變換的剪接或通過(guò)細(xì)胞表面受體蛋白裂解而產(chǎn)生。過(guò)去已對(duì)這些可溶性受體進(jìn)行了敘述，例如，IL-6和IFN-γ的可溶性受體(Novick等人，1989)、TNF(Engelmann等人，1989；Engelmann等人，1990)、IL-1和IL-4(Maliszewski等人，1990)和IFN-α/β(Novick等人，1994；Novick等人，1992)。一種稱為骨保護(hù)素(OPG，也稱破骨抑制因子-OCIF)的細(xì)胞因子結(jié)合蛋白是TNFR/Fas家族的成員，它似乎是僅作為分泌蛋白而存在的第一種可溶性受體(Anderson等人，1997；Simonet等人，1997；Yasuda等人，1998)。通過(guò)在IL-18柱上進(jìn)行親和純化從尿中得到了結(jié)合IL-18的蛋白質(zhì)(IL-18BP)(Novick等人，1999)。IL-18BP在體外消除了IL-18對(duì)IFN-γ的誘導(dǎo)以及IL-18對(duì)NF-κB的活化。另外，IL-18BP還通過(guò)注射LPS抑制了小鼠中IFN-γ的誘導(dǎo)。IL-18BP基因位于人染色體11上，在包括IL-18BP基因的8.3Kb基因組序列中沒(méi)發(fā)現(xiàn)編碼跨膜結(jié)構(gòu)域的外顯子。迄今為止，在人身上發(fā)現(xiàn)通過(guò)變換剪接mRNA可產(chǎn)生IL-18BP的四種同種型。它們被命名為IL-18BP a、b、c和d，它們?nèi)烤蚕硐嗤腘末端，但C末端不同(Novick等人，1999)。這些同種型與IL-18的結(jié)合能力不同(Kim等人，2000)。在四種同種型中，人IL-18同種型a和c對(duì)IL-18具有中和能力已為人所知。最富含的IL-18BP同種型，即剪接變體同種型a，對(duì)IL-18具有高親和力，結(jié)合速率快，解離速率慢，解離常數(shù)(Kd)約為0.4nM(Kim等人，2000)。IL-18BP在脾中固有地表達(dá)，屬于免疫球蛋白超家族。有人利用計(jì)算機(jī)模型(Kim等人，2000)和基于類似蛋白IL-1β與IL-1R I型的相互作用(Vigers等人，1997)對(duì)參與IL-18和IL-18BP相互作用的殘基進(jìn)行了闡述。根據(jù)IL-18與IL-18BP結(jié)合的模型，提出將IL-18的42位上Glu殘基和89位上Lys殘基分別與IL-18BP的Lys-130和Glu-114結(jié)合(Kim等人，2000)。IL-18BP固有地存在于許多細(xì)胞中(Puren等人，1999)，并在健康人體內(nèi)循環(huán)(Urushihara等人，2000)，這是細(xì)胞因子生物學(xué)一種獨(dú)有現(xiàn)象。由于IL-18BP對(duì)IL-18具有高親和力(Kd＝0.4nM)以及在循環(huán)中IL-18BP的濃度較高(相對(duì)IL-18過(guò)量20倍摩爾)，本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種ＩＬ－１８抑制劑在制備治療和／或預(yù)防膿毒癥及其他以全身炎癥反應(yīng)綜合征（ＳＩＲＳ）為特點(diǎn)的疾病的藥物中的應(yīng)用，所述疾病選自重度膿毒癥和膿毒癥休克。

【技術(shù)特征摘要】
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：CA迪納洛，G范土齊，金修鉉，L雷茲尼科夫，M魯賓斯坦，D諾維克，B希瓦茨布德，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：耶達(dá)研究發(fā)展有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：IL[以色列]