含鹵化酶的載體和核酸片段,及鹵化化合物的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種鹵化方法，其包含在有鹵化酶參與的情況下鹵化化合物，其中該鹵化酶是（ａ）由ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１中詳列的序列，或是一種以遺傳密碼的簡并性為基礎(chǔ)，從其得來的序列編碼的，或是（ｂ）由一種核酸序列編碼的，該核酸序列編碼（ａ）的功能片段，或（ｃ）由一種序列編碼的，該序列在標準條件下與（ａ）或（ｂ）雜交，或是（ｄ）由一種序列編碼的，該序列具有與（ａ）下詳列的序列相比，超過３０％的同一性或超過６０％的相似性。（*該技術(shù)在2020年保護過期，可自由使用*）

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
,及鹵化化合物的方法
本專利技術(shù)涉及一種化合物的酶促鹵化方法。本專利技術(shù)更進一步涉及含鹵化酶或鹵化酶基因的核酸片段，載體和生物。長期以來，鹵化反應在化學合成中是已知的。它們用于制備大量鹵化的有機化合物。這些合成反應的缺點是需要特殊的植物用于該合成。必須特別保護這些植物不受腐蝕，這是因為反應產(chǎn)物常常是高度腐蝕性的。在合成過程中，不僅形成所需要的產(chǎn)物，而且還常常形成導致污染產(chǎn)物的副產(chǎn)物。如果這些副產(chǎn)物在最終的產(chǎn)物中不被容許，則它們必須經(jīng)過復雜的除去。此外，許多副產(chǎn)物均是有毒的。二氧芑的形成可發(fā)生在許多反應中。化學鹵化的其中一個選擇是酶促合成。它通常是高度選擇性的，即，通常沒有副產(chǎn)物形成。文獻中公開了被稱作鹵過氧化物酶的酶，其在有鹵素離子和過氧化氫參與的情況下鹵化有機化合物。這種酶的實施例是來源于生金色鏈霉菌(Kren等，Liebigs Ann./Red.，1997，112379-83)，紅城紅球菌(Schrijver等，Appl.Environ.Microbiol.，1997，63，51911-1916)，東方擬無枝酸菌(van Wageningen等，Chem.Biol.，1998，5155-162)，煙色卡爾黑霉(Hohaus等，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1997，36，No.182012-2013)，變青鏈霉菌或褐色沙雷氏菌(von Pée，K.H.，Ann.Rev.Microbiol.，1996，50375-99)的鹵過氧化物酶。鹵化反應到底是這些鹵過氧化物酶的真實酶促反應，還是它僅僅是一個副反應還不完全清楚。該酶經(jīng)常顯示較低的底物和共同底物親和力，及對于酶較低的特異性。除鹵過氧化物酶之外，文獻中還公開了其它鹵化酶。因而，Kirner等(J.Bacteriol.，1998，Vol.180，No.7，p.1939-1943)和Hohaus等(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1997，36，No.18，2012-2013)描述了一種鹵化酶，其將氯原子引入到色氨酸的7位中。此外，在Hammer等(Appl.Environ.Microbiol.，1997，Vol.63，No.6，2147-2154)，de Schrijver等(Appl.Environ.Microbiol.，1997，Vol.63，No.5，1911-1916)，Nowak-Thompson等(J.Bacteriol.，1999，1812166-2174)，Solenberg等(Chem.Biol.，4，1997195-202)和Dairi等(Biosci.，Biotechnol.Biochem.59，1995，1099-1106)中描述了更多的酶。在GenBank中發(fā)現(xiàn)了一9.9kb長的地中海擬無枝酸菌DNA的片段(Y16952)。Pelzer等描述了GenBank記錄中的此DNA的兩個功能。它編碼加氧酶和糖基轉(zhuǎn)移酶。其中沒有提到其它功能。以前，還沒有酶用于鹵化的有機化合物的工業(yè)制備。因此本專利技術(shù)的一個目的是提供一種用于工業(yè)合成鹵化的有機化合物的酶。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，此目的可以通過本專利技術(shù)的鹵化方法而達到，該方法包含在有鹵化酶參與的情況下鹵化化合物，其中該鹵化酶是(a)由SEQ ID NO1中詳列的序列，或是一種以遺傳密碼的簡并性為基礎(chǔ)，從其得來的序列編碼的，或是(b)由一種核酸序列編碼的，該核酸序列編碼(a)的功能片段，或(c)由一種序列編碼的，該序列在標準條件下與(a)或(b)雜交，或是(d)由一種序列編碼的，該序列具有與(a)下詳列的序列超過30％的同一性或超過60％的相似性(hnlichkeit)。用于本專利技術(shù)方法中的鹵化酶可以按照技術(shù)人員已知的方法從生物體中分離。優(yōu)選地，它可以從合成鹵化化合物，例如糖肽抗生素的生物體中分離。這種生物體的實施例可以在細菌和，真核生物如藻類，像Ascophyllum或Synechocystis，地衣，真菌如卡爾黑霉屬，酵母和，細菌如革蘭氏陽性菌，像放線菌目，芽孢桿菌目或革蘭氏陰性菌如假單胞菌屬中找到。鹵化酶還可以從諾卡菌形放線菌綱或鏈霉菌綱中分離?？梢郧姨貏e優(yōu)選從產(chǎn)生糖肽抗生素的假諾卡氏菌科(Pseudonocardiaceae)家族成員，和相關(guān)的細菌中，如假諾卡氏菌屬(Pseudoncardia)，糖單孢菌屬(Saccharomonospora)，糖多孢菌屬(Saccharopolyspora)，無枝酸菌屬(Amycolatopsis)，熱密卷菌屬(Thermocrispum)，Pseudoamycolata，擬孢囊菌屬(Kibdelosporangium)，假諾卡氏菌屬(Amycolata)，放線多孢菌屬(Actiopolyspora)，放線動孢菌屬(Actinokineospora)或雙孢放線菌屬中分離鹵化酶(在下文和申請中，認為單數(shù)和復數(shù)是同義詞)，所提到的實施例是下列屬和種，即地中海擬諾卡氏菌(Nocardiamediterranei)，地中海擬無枝酸菌(Amycolatopsis mediter βanei)，地中海擬鏈霉菌(Streptomyces mediterranei)，諾卡氏菌(Nocardia Spec.)，擬無枝酸菌(Amycolatopsis spec.)，擬鏈霉菌(Streptomyces spec.)，東方擬諾卡氏菌(Nocardia orientalis)，東方擬無枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)，東方擬鏈霉菌(Streptomyces orientalis)，豐加鏈霉菌(Streptomyces toyocaensis)或綠產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomyces viridochromogenes)。特別優(yōu)選是由東方擬無枝酸菌C329.4，A82846和ATCC19795和地中海擬無枝酸菌DSM 5908生產(chǎn)的。該酶還可從鏈霉菌屬，特別是地中海擬鏈霉菌生物中分離。此外，鹵化酶或編碼鹵化酶的核酸可以從紅球菌屬(Rhodococcus)，高溫單孢菌屬(Thermomonospora)，芽孢桿菌屬(Bacillus)，沙雷氏菌屬(Serratia)，鏈霉菌屬(Actinosporangium)，馬杜拉放線菌屬(Actinomadura)，游動放線菌屬(Actinoplanes)或小單孢菌屬(Micromonospora)中分離出來。鹵化酶的基因可以用技術(shù)人員已知的各種技術(shù)從這些生物體的基因文庫中分離出來。這些技術(shù)其中之一是，例如，經(jīng)由與SEQ ID NO1中詳列的序列或此序列的一部分雜交，而從基因文庫“釣取”基因。在教科書，例如Sambrook，J.等(1989)Molecular cloningAlaboratory manual，Cold Spring，Harbor Laboratory Press，F(xiàn).M.Ausubel等(1994)Current protocols in molecularbiology，John Wiley和Sons，或D.M.Glover等，DNA Clong，Vol.1(1995)，IRL Press(ISBN 019-963476-9)中找到了適當?shù)脑囼灧桨浮Ｋ峒暗谋疚臋n來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種鹵化方法，其包含在有鹵化酶參與的情況下鹵化化合物，其中該鹵化酶是（ａ）由ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１中詳列的序列，或是一種以遺傳密碼的簡并性為基礎(chǔ)，從其得來的序列編碼的，或是（ｂ）由一種核酸序列編碼的，該核酸序列編碼（ａ）的功能片段， 或（ｃ）由一種序列編碼的，該序列在標準條件下與（ａ）或（ｂ）雜交，或是（ｄ）由一種序列編碼的，該序列具有與（ａ）下詳列的序列，超過３０％的同一性或超過６０％的相似性。

【技術(shù)特征摘要】
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：S佩爾策，P胡貝爾，R修斯穆斯，J雷克滕瓦爾德，D赫克曼，W沃爾勒本，
申請(專利權(quán))人：BASF公司，
類型：發(fā)明
國別省市：DE[德國]