大豆轉基因時間MON87705及其檢測方法技術

本發明專利技術提供了轉基因大豆事件MON87705以及包含可判斷該大豆事件的DNA的細胞、種子和植物。本發明專利技術還提供了包含可判斷樣品中所述大豆事件的核苷酸序列的組合物，用于檢測樣品中所述大豆事件核苷酸序列的存在的方法，用于檢測可判斷樣品中所述大豆事件的存在的核苷酸序列的探針和引物，培育這種大豆事件的種子成為大豆植物的方法，和產生包含可判斷該大豆事件的DNA的大豆植物的育種方法。

【技術實現步驟摘要】
大豆轉基因時間MON87705及其檢測方法本申請是申請日為2009年09月28日和專利技術名稱為“大豆轉基因時間MON87705及其檢測方法”的200980138582.7號專利技術專利申請的分案申請。相關申請的交叉引用本申請要求享有于2008年9月29日提交的美國臨時申請61/100,859的優先權。序列表的引入作為AnnexC/ST.25文本格式的序列表拷貝，含有2009年9月22日創建的、名稱為“56047-0000WO_seqlist.pdf”、大小為50995字節(在MS-DOS中確定)的文件，在此經由EFS網絡以電子方式提交，并通過引用并入本文。
本專利技術涉及轉基因大豆事件MON87705及其植物部分和種子。該事件顯示出包含改變的脂肪酸水平的油組成。本專利技術還涉及檢測生物樣品中大豆事件的存在的方法，并且提供能夠進行該檢測的核苷酸序列。
技術介紹
大豆是一種重要的作物，并且是世界許多地區的主要食物來源。生物技術方法已經應用于大豆以改進農藝學性狀和產品質量。一種這樣的質量性狀是包含改變的脂肪酸水平的大豆油。能夠檢測特定植物的轉基因/基因組DNA的存在以確定有性雜交的后代是否含有感興趣的轉基因/基因組DNA將是有利的。另外，當遵守要求上市前審批及對源自重組作物植物的食品進行標注的規定時，檢測特定植物的方法是有用的。大豆油已經通過多種育種方法改良，以產生對于特定市場的利益。但是，對于諸如色拉油、烹飪用油和煎炸用油消費者等主要大豆油使用者和諸如生物柴油(biodiesel)和生物潤滑油(biolube)市場等工業市場廣泛有益的大豆油無法獲得。現有的大豆油或者太過昂貴，或者缺乏重要的食品質量性質，如氧化穩定性、良好的煎炸食物味道或飽和脂肪含量，或重要的生物柴油性質，如適當的一氧化氮排放或耐寒性或低溫流動性。大豆油一般含有大約20％的油酸。油酸具有一個雙鍵，但是在高溫下仍然相對穩定，具有高油酸含量的油適于烹飪和其它需要加熱的過程。最近，推薦增加食用高油酸含量的油，因為油酸似乎能降低血液中的低密度脂蛋白(“LDLs”)的水平，而不影響高密度脂蛋白(“HDLs”)的水平。但是，油酸水平的一些限制是希望的，因為當油酸在高溫下降解時，它產生味道不好的化合物，并且減少了亞油酸氧化產生的好味道。Neff等人，JAOCS，77：1303-1313(2000)；Warner等人，J.Agric.FoodChem.49：899-905(2001)。因此優選使用油酸水平為65-85％(重量)或更低的油，以限制食品應用(例如煎炸用油和煎炸的食物)中的異味。其它優選的油為了改善氧化穩定性而具有高于55％(重量)的油酸水平。對于許多油應用來說，低于8％(重量)或甚至低于大約2-3％(重量)的飽和脂肪酸水平是理想的。大豆油一般含有大約16-20％的飽和脂肪酸：13-16％的棕櫚酸和3-4％的硬脂酸(總體參見Gunstone等人，TheLipidHandbook，Chapman&Hall，London(1994))。飽和脂肪酸具有高熔點，這在許多應用中是不希望的。當用作原料或燃料時，飽和脂肪酸導致在低溫下變渾濁(clouding)，并且賦予燃料較差的低溫流動性能，例如傾點和低溫過濾器堵塞點。含有低水平飽和脂肪酸的油產品受到消費者和食品工業的偏愛，因為它們被認為是更健康的和/或可以按照FDA的規定標上“不含飽和脂肪”。另外，低飽和度的油減少或者消除了對諸如色拉油等食品用油進行防凍準備的需求。在生物柴油和潤滑油應用中，具有低水平飽和脂肪酸的油賦予改進的低溫流動性能，并且在低溫下不會渾濁。產生具有中油酸和低飽和物含量的種子的大豆系是理想的。此處公開的方法使得能夠產生油酸水平在55-80％的中等油酸范圍且飽和脂肪酸水平低于8％的大豆種子。已知外來基因在植物中的表達受其染色體位置的影響，可能是由于染色質結構(如異染色質)或靠近整合位點的轉錄調控元件(如增強子)的接近性(Weising等人，1988，Ann.Rev.Genet22：421-477)。基于這個原因，通常需要篩選大量的事件以判斷以引入的目標基因的最佳表達為特征的事件。例如，在植物和其它生物中已觀察到：引入基因的表達水平在事件之間差異很大。在表達的空間或時間模式上也有差異，例如，轉基因在不同植物組織中的相對表達的差異，這可能不符合從引入的基因構建體中存在的轉錄調控元件預期的模式。基于這個原因，通常產生數百至數千個不同的事件，并對這些事件進行篩選，以選擇具有所需轉基因表達水平和用于商業目的的模式的單一事件。具有理想的轉基因表達水平或模式的事件可以用于通過使用傳統育種方法的有性遠交將轉基因滲入其它遺傳背景中。這種雜交的后代保持原轉化體的轉基因表達特征。這一策略用來確保適當地適應當地特定生長條件的許多品種中的可靠的基因表達。可以通過任何公知的核酸檢測方法如聚合酶鏈反應(PCR)或使用核酸探針的DNA雜交來檢測轉基因的存在。這些檢測方法一般集中于經常使用的遺傳元件，如啟動子、終止子、標記基因等。因此，這些方法可能無法用于區分不同的事件，特別是使用相同的DNA構建體產生的那些，除非鄰近插入的DNA的染色體DNA(“側翼DNA”)的序列是已知的。例如，Taverniers等人(J.Agric.FoodChem.，53：3041-3052，2005)討論了事件特異性的PCR分析方法，其中證明了用于轉基因玉米株系Bt11、Bt176和GA21及用于油菜(canola)事件GT73的事件特異性追蹤系統。在這項研究中，事件特異性的引物和探針基于各事件的基因組/轉基因連接區(junction)的序列進行設計。轉基因植物事件特異性的DNA檢測方法也已在美國專利6,893,826、6,825,400、6,740,488、6,733,974、6,689,880、6,900,014和6,818,807中描述。本專利技術涉及具有包含改變的脂肪酸水平的油組成的轉基因大豆(Glycinemax)植物MON87705，并且涉及大豆植物MON87705的DNA構建體和大豆MON87705及其后代中轉基因/基因組插入區域的檢測。專利技術概述本專利技術包括被命名為MON87705的轉基因大豆植物及其與大豆事件MON87705不可區分的后代(這些后代也含有至少一個對應于插入的轉基因DNA的等位基因)，其種子以保藏號PTA-9241保藏于美國典型培養物保藏中心(ATCC)。本專利技術的另一方面是大豆事件MON87705的后代植物或種子或該植物和種子的可再生部分。本專利技術也包括大豆事件MON87705的植物部分，該植物部分包括但不限于：花粉、胚珠、花、芽、根、莖、葉、莢、種子和分生組織。MON87705的基因組中含有的新型遺傳組合物和來自MON87705的產物，如油、粗粉、細粉、食品、蛋白質補充劑和殘留在已收獲對應于MON87705的大豆植物的田間的生物質，是本專利技術的方面。本專利技術提供一種大豆植物，其能夠產生具有包含大約55-80％(重量)的油酸和少于8％(重量)的飽和脂肪酸的油組成的種子，其中所述油組成的遺傳決定因素可從ATCC保藏號為PTA-9241的大豆獲得。根據本專利技術的一個方面，提供了用于檢測是否存在來自被命名為MON87705的本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種大豆植物細胞，其包含含有多核苷酸的DNA分子，該多核苷酸具有是選自SEQ?ID?NO:1、2和18的兩個或多個序列或互補于該序列的序列,其中所述大豆植物細胞是非繁殖細胞。

【技術特征摘要】
2008.09.29 US 61/100,8591.一種大豆植物細胞，其包含含有多核苷酸的DNA分子，該多核苷酸具有是選自SEQIDNO:1、2和18的兩個或多個序列或互補于該序列的序列,其中所述大豆植物細胞是非繁殖細胞。2.從大豆植物獲得的大豆植物細胞，其中所述植物細胞包含多核苷酸，該多核苷酸具有是選自SEQIDNO:1、2和18的兩個或多個序列或互補于該序列的序列,其中所述大豆植物細胞是非繁殖細胞。3.一種油組合物，其包含大約55-80％的油酸和少于8％的飽和脂肪酸，其中所述油組合物的遺傳決定因素可從包含大豆轉基因事件MON87705的植物獲得，包含所述事件的代表性種子樣品以ATCC保藏號PTA-9241保藏于ATCC，其中所述油組合物還包含具有選自SEQIDNO:1、2和18的兩個或多個序列或互補于該序列的序列的多核苷酸。4.如權利要求3所述的油組合物，其中所述所述油組合物包含72.8％的油酸。5.如權利要求4所述的油組合物，其中所述所述油組合物還包含2.5％的棕櫚酸和3.4％的硬脂酸。6.一種產生包含改變的脂肪酸水平的大豆植物的方法，包括將包含大豆事件MON87705的植物與缺乏大豆事件MON87705的大豆植物雜交，以獲得包含所述大豆事件MON87705和改變的脂肪酸水平的植物，其中包含所述事件的種子的代表性樣品以ATCC保藏號PTA-9241保藏。7.從包含大豆轉基因事件MON87705的種子獲得的包含具有選自SEQIDNO:1、2和18的兩個或多個序列或互補于該序列的序列的多核苷酸的油組合物。8.由權利要求7所述的油組合物衍生的包含具有選自SEQIDNO:1、2和18的兩個或多個序列或互補于該序列的序列的多核苷酸的商品，選自烹飪用油、色拉油、起酥油、卵磷脂、無毒塑料、印刷油墨、潤滑劑、蠟、液壓流體、變壓器流體、溶劑、化妝品、護發產品和生物柴油。9.一種包含多核苷酸的DNA分子，該多核苷酸具有選自SEQIDNO:1、2和18列出的兩個或多個序列或互補于該序列的序列。10.一種分離的DNA分子，該DNA分子包含SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的至少大約11個至大約20個連續核苷酸。11.包含多核苷酸的大豆細胞的基因組，所述多核苷酸具有選自SEQIDNO:1、2和18列出的序列的兩個或多個序列或互補于該序列的序列。12.一種檢測生物樣品中大豆事件MON87705DNA的存在的方法，包括：i.使樣品接觸探針，該探針在嚴格雜交條件下與選自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2及其互補序列的序列雜交，并且在嚴格雜交條件下不與不含選自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2及其互補序列的序列的大豆植物基因組DNA雜交；ii.使所述樣品和所述探針經受嚴格雜交條件；和iii.檢測所述探針與所述樣品的結合；其中結合則判斷所述樣品中存在所述DNA。...

【專利技術屬性】
技術研發人員：N·瓦格納，W·C·伯恩斯，E·J·古西，P·D·羅伯斯，
申請(專利權)人：孟山都技術公司，
類型：發明
國別省市：美國,US