哺乳動物細胞因子樣多肽-10制造技術

稱為Ｚｃｙｔｏ１０的哺乳動物細胞因子樣多肽，編碼它的多核苷酸，可特異結合該多肽的抗體，及可結合該抗體的抗獨特型抗體。Ｚｃｙｔｏ１０有助于促進傷口的愈合并利于刺激血小板的增殖。（*該技術在2018年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

技術介紹
激素和多肽生長因子調控多細胞生物的細胞增殖和分化。這些可擴散分子使細胞相互交流并一齊作用以形成細胞和器官，及修復和再生損傷組織。激素和生長因子的例子包括類固醇激素(如雌激素、睪丸素)、甲狀旁腺激素、促卵泡激素、白細胞介素、血小板衍生生長因子(PDGF)、表皮生長因子(EGF)、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、促紅細胞生成素(EPO)和降鈣素。激素和生長因子通過結合蛋白質影響細胞代謝。蛋白質可以是與細胞內信號傳導途徑有關的整合膜蛋白，諸如第二信使系統。其它類的蛋白質是可溶性分子。尤其令人感興趣的是細胞因子，即促進細胞增殖和／或分化的分子。細胞因子的例子包括促紅細胞生成素(EPO)，它刺激紅細胞的發育；血小板生成素(TPO)，它刺激巨核細胞譜系細胞的發育；及粒細胞集落刺激因子(G-CSF)，它刺激嗜中性粒細胞的發育。這些細胞因子有助于恢復貧血癥病人或接受癌癥化療病人體內正常的血細胞水平。這些細胞因子已經證實的體內活性說明了其它細胞因子、細胞因子興奮劑及細胞因子拮抗物的巨大臨床潛力和對它們的需求。專利技術簡述本專利技術通過提供新多肽及相關組合物和方法來滿足此需求。一方面，本專利技術提供了編碼被稱為Zcyto10之哺乳動物四α-螺旋細胞因子的分離多核苷酸。人Zcyto10多肽包括如SEQ ID NO1和SEQ ID NO2中所示之帶起始甲硫氨酸的176個氨基酸的序列。現認為氨基酸殘基1-24是信號序列，包含第25位殘基(亮氨酸)至176位氨基酸殘基(谷氨酸)、由SEQ ID NO12所限定的氨基酸序列代表成熟Zcyto10多肽。本專利技術的另一實施方案由SEQ ID NO3和SEQ ID NO4的序列所限定。SEQ ID NO4的多肽包括151個氨基酸殘基，其中第1-24位氨基酸含信號序列，成熟序列包括也由SEQ ID NO13限定的第25位氨基酸殘基(亮氨酸)至第151位氨基酸(谷氨酸)。另一活性變體包括SEQ ID NO2中第33位氨基酸殘基(半胱氨酸)至第176位氨基酸殘基。該變體也由SEQ ID NO26限定。小鼠Zcyto10也是包括如SEQ ID NO18和19所限定之176個氨基酸殘基的多肽。小鼠Zcyto10具有從SEQ ID NO19的第1位氨基酸殘基甲硫氨酸延伸至并包括第24位氨基酸殘基甘氨酸的信號序列。因而，成熟小鼠Zcyto10從SEQ ID NO19的第25位氨基酸殘基亮氨酸延伸至并包括第176位氨基酸殘基亮氨酸，也由SEQ ID NO20所限定。另一活性變體被認為自SEQ ID NO19的第33位氨基酸半胱氨酸延伸至第176位氨基酸。該變體也由SEQ ID NO25確定。在另外的實施方案中，該多肽進一步包括親和標志。SEQ ID NO33和34表示小鼠Zcyto10的一種變體。該變體為154個氨基酸殘基長，并具有從SEQ ID NO34第1位氨基酸殘基甲硫氨酸延伸至并包括第24位氨基酸殘基甘氨酸的信號序列。因而，成熟序列從SEQ ID NO34的第25位氨基酸殘基亮氨酸延伸至并包括第154位氨基酸殘基亮氨酸。成熟序列也用SEQ ID NO35表示。本專利技術的第二方面提供了表達載體，其中含(a)轉錄啟動子；(b)編碼Zcyto10多肽的DNA區段，和(c)轉錄終止子，其中啟動子、DNA區段和終止子有效連接。本專利技術的第三方面提供了已引入如上所述表達載體的人工培養真核或原核細胞，其中所說細胞表達該DNA區段所編碼的多肽。本專利技術的進一步方面提供了基本上由通過肽鍵連接之第一部分和第二部分組成的嵌合多肽。該嵌合多肽的第一部分基本上由以下組成(a)如SEQ ID NO2中所示的Zcyto10多肽；(b)SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO12、SEQ ID NO13、SEQ ID NO19、SEQ ID NO20、SEQ ID NO25、SEQ ID NO26、SEQ ID NO34或SEQ ID NO35的等位變體；和(c)與(a)或(b)至少90％相同的蛋白質多肽。嵌合多肽的第二部分基本上由諸如親和標志之類的另一多肽組成。某實施方案中，親和標志是免疫球蛋白Fc多肽。本專利技術還提供編碼嵌合多肽的表達載體及被轉染以產生嵌合多肽的宿主細胞。本專利技術的另一方面提供了能特異結合如上所公開Zcyto10多肽的抗體，以及能中和抗Zcyto10多肽抗體的抗獨特型抗體。本專利技術的另一方面提供了含與藥用可接受載體聯合之純化Zcyto10多肽的藥物組合物。如本文所進一步論述的，在特征在于不適當細胞增殖、細胞分化或細胞因子產生的紊亂的預防和治療中，這樣的組合物可有助于調節細胞增殖、細胞分化或細胞因子產生。更特異的是，Zcyto10多肽可通過抑制細胞免疫應答而有助于自身免疫疾病的預防和治療。可用Zcyto10治療的自身免疫疾病包括IDDM、多發性硬化癥、類風濕性關節炎等等。同樣，本專利技術的Zcyto10多肽可有助于抑制癌細胞生長或增殖。本專利技術的Zcyto10多肽還可刺激免疫系統以更好地抵御微生物或病毒感染。尤其是，可系統性服用Zcyto10以提高個體的血小板產量。此外，本專利技術的Zcyto10多肽可用于氣管特異或氣管支氣管特異的應用中，諸如用于氣管支氣管上皮或其基底細胞的維持或傷口修復中，用于調節粘液產生或殘渣的粘纖毛清除中或用于哮喘、支氣管炎或氣管支氣管道其它疾病的治療中。它還可增強傷口愈合及促進受影響組織的再生，尤其有助于牙周疾病的治療。此外，Zcyto10多肽可用于治療皮膚病，大體上有諸如牛皮癬、濕疹和干皮病。本專利技術的另一實施方案涉及具Zcyto10多肽帶表位部分之氨基酸序列的肽或多肽，該Zcyto10多肽具有上述氨基酸序列。盡管長達并包括上述本專利技術多肽整個氨基酸序列的任何長度帶表位多肽也包括于本專利技術中，但具本專利技術Zcyto10多肽帶表位部分的氨基酸序列的肽或多肽包括具至少9個，優選至少15個，更優選至少30-50個氨基酸的多肽部分。還要求保護的是任何與另一多肽或載體分子融合的這些多肽。這樣的表位變體包括但不局限于SEQ ID NO25-32。自Zcyto10這些帶表位部分產生的抗體可用于從細胞培養基中純化Zcyto10。參照以下詳述和附圖，本專利技術的這些和其它方面將更加明顯。專利技術詳述此文所引用的所有參考文獻均全部引用作為參考。在詳述本專利技術之前，定義以下術語有助于對其的理解術語“親和標記”在此用于指能附著到第二種多肽上以利于第二種多肽的純化和檢測或者為第二種多肽與底物的結合提供位點的多肽片段。原則上，可得到抗體或其它特異結合劑的任何肽或蛋白質都可用作親和標記。親和標記包括多聚組氨酸片段、蛋白A、谷胱甘肽S轉移酶、谷氨酸-谷氨酸親和標記、P物質、FlagTM肽、鏈霉親和素結合肽、或其它抗原性表位或結合結構域。通常參閱Ford等人，蛋白質表達和純化295-107(1991)。編碼親和標記的DNA可從商品供應商處購得(如Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)。術語“等位變體”在此用于指一個基因占據相同染色體位點的兩種或多種變換形式中的任一種。等位變異是通過突變自然發生的，并可能導致種群內的表型多態性。基因突變可以是沉默的(所編碼多肽無變化)或編碼具有改變了的氨本文檔來自技高網...

【技術保護點】
編碼多肽的分離多核苷酸，所說的多肽與選自ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：４、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１３、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１９、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２０、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２６、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：３４和ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：３５的一種或多種多肽有至少９０％相同。

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：DC肯克林，BA哈爾德曼，A格羅斯曼，
申請(專利權)人：津莫吉尼蒂克斯公司，
類型：發明
國別省市：US[美國]