一種工業化生產核桃活性肽及制備方法技術

本發明專利技術公開一種工業化生產核桃活性肽及制備方法。本發明專利技術以核桃為原料，采用風味蛋白酶、胃蛋白酶和中性蛋白酶多酶酶解，然后通過滅酶、離心、過濾、濃縮、脫色和噴霧干燥等工序，制得核桃活性肽。其分子量小于1000Da的組分占90％以上，游離氨基酸含量低于5％，并至少含有3％含量的四肽纈氨酸?色氨酸?異亮氨酸?絲氨酸(Val?Trp?Ile?Ser，VWIS)序列肽段。本發明專利技術的生產方法具有生物活性高、加工成本低、處理量大、便于工業化生產的優點，以此方法制備的核桃活性肽可以作為新的功能性營養成分應用于普通食品、保健食品和藥品的開發與生產，具有廣闊的市場前景。

An industrialized production of walnut active peptide and preparation method

The invention discloses a kind of industrialized production walnut active peptide and a preparation method. The walnut as raw material is enzymolysis with flavor protease, pepsin and neutral protease, and then walnut active peptide is prepared by enzyme killing, centrifugation, filtration, concentration, decolorization and spray drying process. The molecular components of less than 1000Da accounted for more than 90%, the free amino acid content of less than 5%, four peptide valine tryptophan serine isoleucine and containing at least 3% content (Val Trp Ile Ser, VWIS) peptide sequence. The production method of the invention has high biological activity, low processing cost, large capacity, easy industrial production, development and production of walnut peptide prepared in this way can be used as a functional nutrient application in ordinary food, health food and medicine, and has broad market prospects.

【技術實現步驟摘要】
一種工業化生產核桃活性肽及制備方法
本專利技術屬于生物
，具體涉及一種工業化生產核桃活性肽及制備方法。
技術介紹
核桃又名杏實。核桃富含蛋白質、脂肪、糖類、胡蘿卜素、B族維生素、維生素C、維生素P以及鈣、磷、鐵等營養成分。其中胡蘿卜素的含量在果品中僅次于芒果，人們將核桃稱為抗癌之果。核桃含有豐富的脂肪油，有降低膽固醇的作用，因此，核桃對防治心血管系統疾病有良好的作用；中醫中藥理論認為，核桃具有生津止渴、潤肺定喘的功效，常用于肺燥喘咳等患者的保健與治療。美國研究人員的一項最新研究成果顯示，膽固醇水平正常或稍高的人，可以用核桃取代其膳食中的低營養密度食品，達到降低血液膽固醇并保持心臟健康的目的。申請號CN201410386832.1公開了“一種核桃多肽飲料的制備方法”。主要包括去除核桃仁的紅衣；制得核桃油和核桃粕；磨漿得到核桃蛋白原液，漿渣分離，均質處理，得到核桃蛋白液；酶解；滅酶，得到核桃多肽溶液；七、向核桃多肽溶液中加入輔料，加水定容后進行均質處理，得到核桃多肽飲料。在得到肽的過程中對酶解液未進行各種過濾等操作，會殘留部分雜質以及對肽的純度和活性以及口感產生影響。通過對核桃粉進行蛋白酶酶解，將蛋白酶解成小分子量的低聚肽，大大增加了產品的溶解性，核桃活性肽的成功制備為傳統食品核桃粉農產品深加工提供了一條新型工業化道路，使核桃粉這一豐富的普通食品蛋白資源得到充分利用，大大擴大了核桃粉作為一種傳統普通食品原料的應用領域，提高了大宗農產品的附加值，發揮了更大的經濟價值，并提高了綜合的社會效益。與原蛋白相比，小分子的核桃活性肽更加容易被消化吸收。由于其一系列良好的食品加工性能，核桃活性肽也可與其它不同來源的蛋白質混合，以提高其營養價值，也可用于生產速溶飲品、功能飲料、肉制品、乳制品、焙烤食品等多樣化的食品。隨著科技的發展，蛋白質工程技術的應用，采用酶解技術制取生物活性肽及其蛋白水解物的研究和產品開發已經成為熱點和主流，酶解核桃蛋白質制取多肽的實驗室技術文獻已有部分，但是工業中生產核桃肽的制備方法還沒有。
技術實現思路
本專利技術目的在于提供一種核桃活性肽的制備方法，以解決技術問題。一種核桃活性肽的制備方法，包括以下步驟：A、將核桃預處理，進行超微粉碎，過200-600目，以100∶2～10(L∶kg)的液料比用水和核桃粉混合調漿，調節pH8-9微堿化處理，加熱至60～80℃。保溫攪拌30～120min；B、將反應罐中的堿性料液泵入離心機中，分離成清液和渣料，收集渣料，將渣料加水稀釋，加熱至60～80℃，攪拌并分離，以同樣的處理方式進行3次；C、調節上清液的pH值至4-6后，機械攪拌8-12h、離心，收取沉淀，沉淀即為核桃蛋白，重復兩次；D、將沉淀加水復溶，加熱至75-100℃，時間15-45min，使得蛋白質變性，然后進行高壓均質；E、調節上述溶液pH至5-10，加入專用酶制劑∶風味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶為5～7∶2～3∶3～5，酶解溫度為40-65℃，時間為1.5-8h；F、酶解結束之后，滅酶溫度90-125℃，滅酶時間為1-3h，結束后得粗酶解液；G：為將粗酶解液離心、過濾、蒸發濃縮、加入活性炭脫色，然后噴霧干燥得到核桃活性肽粉。如上述的核桃活性肽的制備方法，其特征在于，所述的步驟A中，進行超微粉碎可以提高酶解率，充分利用物質組分。如上述的核桃活性肽的制備方法，其特征在于，所述的步驟C中，采用熱變性的方法，可以更加利于酶解，酶解更加充分。同時熱變性之后進行高壓均質，進一步提高酶解效率。如上述的核桃活性肽的制備方法，其特征在于，所述的步驟D，專用酶制劑組合包括風味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶為5～7∶2～3∶3～5。研究發現其專用酶制劑組合的酶解效率遠大約單一酶的酶解效率。如上述的核桃活性肽的制備方法，其特征在于，噴霧干燥所用的為中低溫噴霧干燥塔，進一步保留熱敏活性物質，并且中低溫噴霧干燥塔是首次在肽工藝中得到應用。一種核桃活性肽的制備方法，其特征在于，按照權利要求1所述的制備方法，所述核桃低聚肽其特征在于分子量小于1000Da的組分占90％以上，游離氨基酸含量低于5％，并至少含有3％含量的四肽纈氨酸-色氨酸-異亮氨酸-絲氨酸(Val-Trp-Ile-Ser，VWIS)序列肽段。除了上面所描述的目的、特征和優點之外，本專利技術還有其它的目的、特征和優點。下面將對本專利技術作進一步詳細的說明。具體實施方式以下對本專利技術的實施例進行詳細說明，但是本專利技術可以根據權利要求限定和覆蓋的多種不同方式實施。1、一種核桃活性肽的制備方法，包括以下步驟：A、將核桃預處理，進行超微粉碎，過200-600目，以100∶7(L∶kg)的液料比用水和核桃粉混合調漿，調節pH9微堿化處理，加熱至70℃。保溫攪拌80min；B、將反應罐中的堿性料液泵入離心機中，分離成清液和渣料，收集渣料，將渣料加水稀釋，加熱至70℃，攪拌并分離，以同樣的處理方式進行3次；C、調節上清液的pH值至5后，機械攪拌10h、離心，收取沉淀，沉淀即為核桃蛋白，重復兩次；D、將沉淀加水復溶，加熱至85℃，時間30min，使得蛋白質變性，然后進行高壓均質；E、調節上述溶液pH至6，加入專用酶制劑∶風味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶為6.3∶2.5∶4，風味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶的添加量為每克蛋白質2000單位，酶解溫度為50℃，時間為3h；F、酶解結束之后，滅酶溫度90-125℃，滅酶時間為1-3h，結束后得粗酶解液；G：為將粗酶解液離心、過濾，采用孔徑0.05～0.1μm的膜過濾設備進行過濾，條件為壓力0.2～0.4MPa，溫度30～80℃。蒸發濃縮、加入活性炭脫色，加入濃縮液總固體含量的5％活性炭質量進行脫色，然后噴霧干燥得到核桃活性肽粉。2、核桃活性肽的理化組成和分子量分布分析核桃活性肽的成分分析結果見表1，從中可以看出本專利技術制備的核桃活性肽總蛋白質含量高達98.2％，具有很高的產品質量。表1：核桃活性肽的基礎理化成分分析含量％總蛋白質(干基)98.2±0.35脂肪0.08±0.01灰分4.25±0.15將核桃活性肽樣品于GEL-HPLC中進樣以后，得到其凝膠色譜圖，用液相數據處理軟件將核桃活性肽的凝膠色譜數據代入校正曲線方程中進行計算，得到樣品的肽的相對分子質量及其分布范圍。分子量1000Da以下組分中的二肽、三肽的在人體內的吸收利用率極高，具有比游離氨基酸更高的營養價值和生理功能。本專利技術用峰面積歸一化法計算了核桃活性肽的相對分子質量分布范圍，如表2所示。由分子量分布結果可以看出，分子量小于1000Da的組分總共占91.49％，如果按氨基酸的平均分子量137Da來計算，分子量1000Da以下的組分則多是八肽以下的低聚肽，也包括部分游離氨基酸。其中分子量在140Da-500Da的占60.94％，占據了1000Da以下的絕大部分，這部分主要是二肽、三肽和四肽。表2：核桃活性肽分子量分布結果3、核桃活性肽中結構鑒定與標志性肽段定量根據國內外最新營養研究表明，蛋白質攝入后，并不完全水解成氨基酸，而是大部分以肽的形式被機體消化吸收。肽類物質除具有易消化、易吸收的營養功能外，更重要的生物學意義主要體現在其具有氨基酸不可比擬的生理活性功能。核桃活性肽作為一種混合性肽本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種核桃活性肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：A、將核桃預處理，進行超微粉碎，過200?600目，以100∶2～10(L∶kg)的液料比用水和核桃粉混合調漿，調節pH?8?9微堿化處理，加熱至60～80℃。保溫攪拌30～120min；B、將反應罐中的堿性料液泵入離心機中，分離成清液和渣料，收集渣料，將渣料加水稀釋，加熱至60～80℃，攪拌并分離，以同樣的處理方式進行3次；C、調節上清液的pH值至4?6后，機械攪拌8?12h、離心，收取沉淀，沉淀即為核桃蛋白，重復兩次；D、將沉淀加水復溶，加熱至75?100℃，時間15?45min，使得蛋白質變性，然后進行高壓均質；E、調節上述溶液pH至5?10，加入專用酶制劑：風味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶為5～7∶2～3∶3～5，酶解溫度為40?65℃，時間為1.5?8h；F、酶解結束之后，滅酶溫度90?125℃，滅酶時間為1?3h，結束后得粗酶解液；G：為將粗酶解液離心、過濾、蒸發濃縮、加入活性炭脫色，然后噴霧干燥得到核桃活性肽粉。

【技術特征摘要】
1.一種核桃活性肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：A、將核桃預處理，進行超微粉碎，過200-600目，以100∶2～10(L∶kg)的液料比用水和核桃粉混合調漿，調節pH8-9微堿化處理，加熱至60～80℃。保溫攪拌30～120min；B、將反應罐中的堿性料液泵入離心機中，分離成清液和渣料，收集渣料，將渣料加水稀釋，加熱至60～80℃，攪拌并分離，以同樣的處理方式進行3次；C、調節上清液的pH值至4-6后，機械攪拌8-12h、離心，收取沉淀，沉淀即為核桃蛋白，重復兩次；D、將沉淀加水復溶，加熱至75-100℃，時間15-45min，使得蛋白質變性，然后進行高壓均質；E、調節上述溶液pH至5-10，加入專用酶制劑：風味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶為5～7∶2～3∶3～5，酶解溫度為40-65℃，時間為1.5-8h；F、酶解結束之后，滅酶溫度90-125℃，滅酶時...

【專利技術屬性】
技術研發人員：林峰，
申請(專利權)人：林峰，
類型：發明
國別省市：江蘇,32