一種多肽－人組織陰離子轉運多肽13.93和編碼這種多肽的多核苷酸制造技術

本發明專利技術公開了一種新的多肽－－人組織陰離子轉運多肽１３．９３，編碼此多肽的多核苷酸和經ＤＮＡ重組技術產生這種多肽的方法。本發明專利技術還公開了此多肽用于治療多種疾病的方法，如惡性腫瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各類炎癥等。本發明專利技術還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發明專利技術還公開了編碼這種新的人組織陰離子轉運多肽１３．９３的多核苷酸的用途。（*該技術在2023年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物
，具體地說，本專利技術描述了一種新的多肽——人組織陰離子轉運多肽13.93，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。
技術介紹
肝細胞能夠通過肝基底外側細胞從肝竇狀血小管攝取大量不同的親脂性組織陰離子如多種膽汁陰離子與甾族復合物，鈉離子依賴性與非鈉離子依賴性的轉運系統位于肝基底外側細胞質膜區域上，與牛磺酸(或甘氨酸)結合的膽酸通過鈉離子-牛磺膽酸協同轉運多肽(NTCP)優先地被肝細胞攝取，這在鼠與人肝細胞中均發現(Hagenbuch B et al.，1991)。另一方面，肝細胞對非膽酸結合狀態的組織陰離子的攝取是通過非鈉離子依賴性的載體獨特性地進行，這些載體可能包括膽汁轉運激酶(37KD)、四溴酚酞磺酸鈉和膽紅素結合蛋白(55KD)、一種特殊的組織陰離子結合蛋白(55KD)(Tiribelli C.，1990；Berk PD et al.，1987；Wolkoff AW et al.，1993)，此外已被克隆的鼠與人肝組織陰離子轉運多肽74亦進行非鈉離子依賴性的組織陰離子如四溴酚酞磺酸鹽、膽酸鹽、牛磺膽酸鹽、甘氨膽酸鹽、脫氧牛磺膽酸鹽等的轉運(Jacquemin E et al.，1994)。人肝組織陰離子轉運多肽(OATP)74基因由27110個核苷酸組成，含16個堿基對的聚腺苷酸尾，它的起始位點在第54個核苷酸處，其開放讀框序列延伸超過2010個核苷酸，編碼一個含670個氨基酸分子量為74KD的含8個潛在N-糖基化位點的蛋白。人肝組織陰離子轉運多肽74的序列提示蛋白含有10-12個跨膜區域、8個N-糖基化位點，其中的4個N-糖基化位點位于跨膜結構域9-12的大的親水嚕噗上(Kullak-Ublick et al.1995)。人肝組織陰離子轉運多肽74與鼠組織陰離子轉運多肽74非常密切，兩者有67％的同源性、82％的相似性，鼠組織陰離子轉運多肽74可能含有10個跨膜結構域、4個N-糖基化位點(Jacquemin E et al.，1994)，兩者很可能均屬組織陰離子轉運多肽基因家族(Kullak-Ublick et al.1995)。以人肝OATP互補RNA為探針，Northern雜交分析顯示來自人肝臟、腦、肺、腎、睪丸的mRNA的交叉激活。進一步的研究顯示高強度的雜交信號在人腦全mRNA、肝臟mRNA、腎mRNA中出現，并且一些數據提示人OATP在許多組織中以多種形式出現，主要表現為分子量的大小。人OATP在人體總的組織陰離子轉運上起著重要作用。人肝OATP在肝外多種組織的存在暗示了總體上它在人體組織的陰離子跨上皮運輸中的重要作用(Kullak-Ublick et al.，1995)。通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本專利技術的多肽的表達譜與人組織陰離子轉運多肽的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本專利技術被命名為人組織陰離子轉運多肽13.93。由于如上所述人組織陰離子轉運多肽13.93蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人組織陰離子轉運多肽13.93蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人組織陰離子轉運多肽13.93蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。
技術實現思路
本專利技術的一個目的是提供分離的新的多肽——人組織陰離子轉運多肽13.93以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人組織陰離子轉運多肽13.93的多核苷酸的重組載體。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人組織陰離子轉運多肽13.93的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。本專利技術的另一個目的是提供生產人組織陰離子轉運多肽13.93的方法。本專利技術的另一個目的是提供針對本專利技術的多肽——人組織陰離子轉運多肽13.93的抗體。本專利技術涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有<210>2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有<210>2氨基酸序列的多肽。本專利技術另外涉及一種含有本專利技術多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本專利技術多肽的方法。本專利技術還涉及一種能與本專利技術多肽特異性結合的抗體。本專利技術還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人組織陰離子轉運多肽13.93蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術的多肽。本專利技術還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術的其它方面由于本文的技術的公開，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。本專利技術提供了一種多肽——人組織陰離子轉運多肽13.93，其基本上是由<210>2所示的氨基酸序列組成的。本專利技術的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優選重組多肽。本專利技術的多肽可以是天然純化的產物，或是化學合成的產物，或使用重組技術從原核或真核宿主(例如，細菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動物細胞)中產生。根據重組生產方案所用的宿主，本專利技術的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本專利技術的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。本專利技術還包括人組織陰離子轉運多肽13.93的片段、衍生物和類似物。如本專利技術所用，術語“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持本專利技術的人組織陰離子轉運多肽13.93相同的生物學功能或活性的多肽。本專利技術多肽的片段、衍生物或類似物可以是(I)這樣一種，其中一個或多個氨基酸殘基被保守或非保守氨基酸殘基(優選的是保守氨基酸殘基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遺傳密碼子編碼的；或者(II)這樣一種，其中一個或多個氨基酸殘基上的某個基團被其它基團取代包含取代基；或者(III)這樣一種，其中成熟多肽與另一種化合物(比如延長多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合；或者(IV)這樣一種，其中附加的氨基酸序列融合進成熟多肽而形成的多肽序列(如前導序列或分泌序列或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列)通過本文的闡述，這樣的片段、衍生物和類似物被認為在本領域技術人員的知識范圍之內。本專利技術提供了分離的核酸(多核苷酸)，基本由編碼具有<210>2氨基酸序列的多肽的多核苷酸組成。本專利技術的多核苷酸序列包括<210>1的核苷酸序列。本專利技術的多核苷酸是從人胎腦組織的cDNA文庫中發現的。本專利技術的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。編碼成熟多肽的編碼區序列可以與<210>1所示的編碼區序列相同或者是簡并的變異體。如本專利技術所用，“簡并的變異體”在本專利技術中是指編碼具有<210>2的蛋白質或本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種分離的多肽－人組織陰離子轉運多肽１３．９３，其特征在于它包含有：〈２１０〉２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：毛裕民，謝毅，
申請(專利權)人：上海博德基因開發有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]