人類基因HSPC018(CBCCFE10)制造技術

本發明專利技術公開了ＣＢＣＣＦＥ１０多肽和多核苷酸以及通過重組技術生產該多肽的方法。本發明專利技術還公開了在治療和診斷試驗中利用ＣＢＣＣＦＥ１０多肽和多核苷酸的方法。（*該技術在2018年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及新鑒定的多核苷酸、由其編碼的多肽和這些多核苷酸和多肽在治療和可能可以用于治療的其激動劑、拮抗劑和/或抑制劑化合物的鑒定中的用途以及這些多肽和多核苷酸的生產。專利技術背景尋找藥物的方法正經歷著根本性的變化，新的方法中包括“功能基因組學”，即基于基因組或基因的高流通量生物學。該方法正在迅速取代原來基于“位置克隆”的方法。首先鑒定表現為生物功能或遺傳病的表型，然后根據其遺傳圖譜位置逆向尋找有關基因。功能基因組學主要依賴各種生物信息學工具，由現有的多個分子生物學數據庫中鑒定可能的目的基因序列。這就需要不斷鑒定和表征其他基因及其相關多肽/蛋白質，作為尋找藥物的靶。專利技術概述本專利技術涉及CBCCFE10，特別是CBCCFE10多肽和多核苷酸和重組材料以及它們的生產方法。另一方面，本專利技術涉及利用這些多肽和多核苷酸的方法，包括治療白血病和再生障礙性貧血(以下稱為本專利技術限定疾病)等疾病。再一方面，本專利技術涉及利用本專利技術提供的材料鑒定激動劑和拮抗劑/抑制劑的方法以及利用鑒定的化合物治療與CBCCFE10不平衡相關的癥狀。最后，本專利技術涉及檢查與CBCCFE10活性或水平異常相關的疾病的診斷試驗。專利技術詳述一方面，本專利技術涉及CBCCFE10多肽。這些肽包括含有以下氨基酸序列的分離多肽，所述氨基酸序列與序列2的整個氨基酸序列的同一性為至少70％，優選同一性為至少80％，更優選同一性為至少90％，更加優選同一性為至少95％，最優選同一性為至少97-99％。這些多肽還包括含有序列2的氨基酸序列的多肽。本專利技術的肽還包括以下分離的多肽，其氨基酸序列與序列2的整個氨基酸序列的同一性為至少70％，優選同一性為至少80％，更優選同一性為至少90％，更加優選同一性為至少95％，最優選同一性為至少97-99％。這些多肽還包括序列2的多肽。本專利技術的多肽還包括由含有序列1的多核苷酸編碼的分離多肽。本專利技術的多肽引起人們的關注是因為HSPC018克隆自臍帶血造血祖細胞CD34+細胞，并且沒有同源物。因此，它被認為在造血過程中起作用。這些特性以下稱為“CBCCFE10活性”或“CBCCFE10多肽活性.”或“CBCCFE10生物活性”。這些活性還包括所述CBCCFE10多肽的抗原和免疫原活性，特別是序列2的多肽的抗原和免疫原活性。優選，本專利技術的多肽具有至少一種CBCCFE10的生物活性。本專利技術的多肽可以是“成熟”蛋白的形式，也可以是較大蛋白如融合蛋白的一部分。通常包括附加氨基酸序列較為有利，附加氨基酸序列包括分泌或前導序列，原序列，幫助純化的序列如聚組氨酸殘基，或重組生產過程中有助于穩定的附加序列。本專利技術也包括上述多肽的變體，即參照物中保守氨基酸發生置換的多肽，保守置換是指一個殘基被具有類似特性的其他氨基酸殘基置換。典型的這種置換包括Ala，Val，Leu和Ile之間的置換；Ser和Thr之間的置換；酸性殘基Asp和Glu之間的置換；Asn和Gln之間的置換；堿性殘基Lys和Arg之間的置換；或芳香族殘基Phe和Tyr之間的置換。特別優選的是其中置換、缺失或增加幾個、5-10個、1-5個1-3個、1-2個或1個氨基酸或這些方式的組合的變體。本專利技術的多肽可以通過任何合適的方式制備。這些多肽包括分離的天然存在的多肽，重組生產的多肽，合成生產的多肽，或這些方法組合生產的多肽。制備這些多肽的方法在本領域廣為人知。本專利技術另一方面涉及CBCCFE10多核苷酸。這些多核苷酸包括含有以下核苷酸序列的分離多核苷酸，所述核苷酸序列編碼的多肽與序列2的整個氨基酸序列的同一性為至少70％，優選同一性為至少80％，更優選同一性為至少90％，更加優選同一性為至少95％。多肽同一性為至少97％是高度優選的，多肽同一性為至少98-99％更高度優選，多肽同一性為至少99％是最優選的。這些多核苷酸包括含有編碼序列2的多肽的序列1中的核苷酸序列的多核苷酸。本專利技術的多核苷酸還包括含有以下核苷酸序列的分離的多核苷酸，上述核苷酸序列與編碼序列2氨基酸序列的核苷酸序列整個編碼區的同一性為至少70％，優選同一性為至少80％，更優選同一性為至少90％，更加優選同一性為至少95％。同一性為至少97％的多核苷酸是高度優選的，同一性為至少98-99％的多核苷酸更高度優選，同一性為至少99％的多核苷酸是最優選的。本專利技術的多核苷酸還包括含有以下核苷酸序列的分離的多核苷酸，上述核苷酸序列與序列1的整個核苷酸序列的同一性為至少70％，優選同一性為至少80％，更優選同一性為至少90％，更加優選同一性為至少95％。同一性為至少97％的多核苷酸是高度優選的，同一性為至少98-99％的多核苷酸更高度優選，同一性為至少99％的多核苷酸是最優選的。這些多核苷酸包括含有序列1的多核苷酸的多核苷酸和序列1的多核苷酸。本專利技術也提供上述多核苷酸的互補多核苷酸。序列1的核苷酸序列為cDNA序列，含有一個多肽編碼序列(核苷酸149-649)，編碼序列2的167氨基酸的多肽。編碼序列2多肽的核苷酸序列可以與序列1中的多肽編碼序列相同，或者不同，而是由于遺傳密碼的豐余(簡并)形成的，但也編碼序列2的多肽。預期本專利技術優選的多肽和多核苷酸具有其同源多肽和多核苷酸類似的生物功能/特性。并且，本專利技術的優選多肽和多核苷酸具有至少一種CBCCFE10活性。本專利技術的多核苷酸可以通過標準克隆和篩選技術從cDNA文庫中獲得，該文庫使用表達序列標記(EST)分析由來自人臍帶血細胞的mRNA衍生(Adams，M.K.，et al.，Science(1991)2521651-1656；Adams，M.D.，et al.，Nature，(1992)355632-634；Adams，M.D.，et al.，Nature(1995)377 Supp3-174)。本專利技術的多核苷酸也可以來自天然來源如基因組DNA文庫，或可以使用眾所周知的市售技術合成。當本專利技術的多核苷酸用于重組生產本專利技術的多肽時，該多核苷酸可以包括成熟多肽的編碼序列本身；成熟多肽編碼序列與其他編碼序列框內融合的序列，其他編碼序列例如前導或分泌序列、前或原或前原蛋白序列或其他融合多肽部分的編碼序列。例如可以編碼幫助融合多肽純化的標記序列。在本專利技術這一方面的一些優選實施方案中，標記序列是6-組氨酸肽或HA標記，前者以pQE載體提供(Qiagen，Inc.)，有關論述參見Gentz et al.，Proc Natl Acad Sci USA(1989)86821-824。多核苷酸也可以含有非編碼的5′或3′序列，如轉錄、非翻譯序列，剪切和聚腺苷酸化信號，核糖體結合位點和穩定mRNA的序列。本專利技術進一步優選的實施方案包括編碼多肽變體的多核苷酸，所述變體包括序列2的氨基酸序列(序列2)，其中置換、缺失或增加幾個、5-10、1-5、1-3、1-2或1個氨基酸殘基或是這些方式的組合。本專利技術的多核苷酸與序列1的核苷酸序列等同或足夠等同，因此可以用作cDNA和基因組DNA的雜交探針或核酸擴增(PCR)反應的引物，以分離編碼本專利技術多肽的全長cDNA和基因組克隆，也可以分離與序列1具有高序列相似性的其他基因(包括編碼除人以外的物種的同源物和直向同源物的基因)的cDNA和基因組克隆。一般這些核苷酸序列與參照物序列本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種選自以下多肽的分離的多肽：（ｉ）含有與序列２的整個氨基酸序列的同一性為至少：（ａ）７０％（ｂ）８０％（ｃ）９０％；或（ａ）９５％的氨基酸序列的分離多肽；（ｉｉ）含有序列２氨基酸序列的分離多肽；或（ｉｉｉ） 其氨基酸序列為序列２的分離多肽。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：俞亞平，沈宇，黃薇，顧柏煒，
申請(專利權)人：上海第二醫科大學，
類型：發明
國別省市：CN[中國]