一種低分子量海參多糖的制備方法技術

一種低分子量海參多糖的制備方法。是將海參經洗凈、絞碎、加熱膠化、冷凍干燥、粗粉碎、氣流粉碎和納米粉碎制成納米海參粉，再用蛋白酶進行１～３次酶解，而后離心得到低分子海參多糖溶液；繼而經加鹽醇沉、離心得低分子海參總多糖粗品，最后將其用雙氧水脫色、加鹽醇沉、離心干燥制得低分子海參多糖。如將得到的低分子海參總多糖粗品溶解加鉀鹽并于低溫析出海參糖氨聚糖沉淀，上清液為海參巖藻多糖溶液，離心將其分開，分別進行脫色。加鹽醇沉、分離、干燥得到低分子海參巖藻多糖；加鉀鹽低溫析出，經分離、干燥得到海參低分子糖氨聚糖。發明專利技術利用膠化納米化海參直接進行低分子多糖，分子量低，人體的吸收好、服用量大大降低，而作用明顯增強。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于來源于海參食品，本專利技術屬于海參類食品領域，采用加熱、冷 凍干燥、氣流粉碎、球磨粉碎的加工方法；同時，也涉及海參的醫藥配制品， 特別是用酶解技術制備多糖的方法。
技術介紹
海參是我國著名的"海味八珍"之一，中華民族的先人食用海參滋補養 生有著悠久的歷史，仿剌參中的主要成分為膠原蛋白，將鮮活海參清洗后直接 進行冷凍干燥，其蛋白質含量為45%左右，脂質占20%左右，多糖占8-10%左右， 無機鹽占20%左右，其中脂質中還包含皂甙等成分。經過試驗分析結果表明海 參中的膠原蛋白如果不經過任何處理，如加熱等，人體的有效吸收率極其低下， 不到1%。此結果已有文獻報道。在《中國海洋藥物》雜志2001年第4期中"海參 海中人參" 一文中，對于海參膠原蛋白的組成和作用以經有了詳細的介紹，提 示海參蛋白膠可與傳統中藥補膠的阿膠、龜板膠、鹿角膠在成分和作用上相媲 美。同時海參中的非膠原蛋白成分，提高了單一膠原蛋白的營養價值，此又為 上述傳統藥膠所不及。海參中的脂質以磷脂為主，它是一種低膽固醇動物性食 品，含有大量的對人體有益的多不飽和脂肪酸等成分，如DHA、 EPA、 AA等。同時海參中所含有的皂甙，具有多種生理活性，能夠對抗多種頑疾。多糖是海參的另一類重要成分，有文獻報導海參多糖主要有兩種， 一為海 參糖氨聚糖或粘多糖(Holothurian Glycosaminoglycan， HG ),是由D-N-乙 酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-巖藻糖組成的分支雜多糖，相對分子質量在4 —5萬左右，另一種海參巖藻多糖(Holothurian Fucan ， HF)，是由L-巖藻糖構 成的支鏈勻多糖，相對分子質量在8-10萬左右。現己確定，兩種海參多糖的結 構特殊，都為海參所特有。同時，海參多糖以其在組織中的含量之高和多糖的 硫酸化程度之大，在動物類食品資源中極為罕見。近年來，國內外對海參多糖， 特別是對HG及其改構物(如解聚物，DHG)的廣泛藥理研究證實它有多種藥效 1、 HG對抗多種實驗動物腫瘤的生長，對MA-737乳腺癌和T795肺癌生長抑制率分別高達79%和60%以上，同時還能抑制M737乳腺癌的人工肺轉移和Lewis肺癌 自然轉移；2、 HG提高機體細胞免疫功能，改善和增強因荷瘤或使用抗癌藥物 引起的動物機體免疫功能低下狀況；3、 HG對抗新生血管生成，包括移植性腫瘤 誘發的新生血管生成；4、 HG為一種新型抗凝劑，在凝血過程的不同環節顯示 多重作用。HG在抗凝機理和安全性等方面要優于肝素；5、 HG可通過激活纖溶 酶原而促進纖維蛋白溶解，同時HG能抑制纖維蛋白的單體間聚合、改變纖維蛋 白凝塊結構，從而有利于藥物纖溶；6、在動物靜脈血栓模型和急性小鼠肺栓賽 模型中，HG能抑制栓塞形成并提高動物生存率。初步臨床試驗中證實了HG治療 彌漫性血管內凝血(DIC)和抗血栓形成的效果；7、 HG具有降低全血粘度及血 槳粘度的作用，同時顯示調節血脂的功能即降低血清膽固醇和甘油三酯水平， 升高高密度脂蛋白和降低低密度脂蛋白。海參的多種藥理功能已經可以看出海參及其低分子量糖氨聚糖的開發價值。然而海參多糖在海參中和蛋白結合，形成蛋白多糖，在膠原蛋白結構不被 破壞的前提下，更是無法接觸吸收。令外一個更重要的原因是海參多糖因其分 子量大，經人體口服無法有效收，文獻中報道的有關海參多糖的一些療效等方 面的報道中的給藥途徑都是注射給藥。關于海參(粘)多糖的制備已經有多件專利報道。ZL 99113247提供的方法 是海參絞碎成漿后用菠蘿蛋白酶單酶或用枯草桿菌中型蛋白酶和胃蛋白酶雙酶 進行酶解，其含2_10肽5 20%，粘多糖0.5 5%。 ZL 03111925. 5所述的方法 是海參制漿后利用自溶酶的酶解方法制得分子量為2 5萬的多聚糖。而ZL 200410054772. X、 CN 200410038284. X及CN 200710017839. 6等專利文件報道基 本上都是用新鮮海參進行酶解，包括自溶酶、外用酶進行酶解，然后經分離、 醇沉、精制而得到海參多糖。至于其制備方法的酶解度有多大、'得到的海參多 糖分子量有多大、是否達到HG和FG的要求、人體能否吸收都無從了解。
技術實現思路
本專利技術為解決現有技術中存在的問題，而提供一種以納米化海參為原料，制 備海參低分子量糖氨聚糖的方法。本專利技術的技術方案是利用海參(包括鮮海參，鹽漬、半干、干海參發制品)5制成納米海參粉，用納米海參粉酶解制得低分子海參多糖其中包括海參低分子糖氨聚糖(Depolymrized Holothurian Glycosaminoglycan ，簡稱DHG)和海參 低分子巖藻多糖(Depolymrized Holothurian Fucan ，簡稱DHF)。 本專利技術的制備過程如下(1) 原料處理將鮮活海參剪開，取出內臟，將其分別充分清洗干凈，可以僅 是用海參體壁，也可以連同海參內臟一起絞碎，置于密閉容器中。原料也可以 采用各種形式的海參制品，如干海參、半干海參、鹽漬海參等，將其發制好清 洗干凈置于密閉容器中。(2) 加熱膠化70 130。C下加熱lmin 20h。優選100 105。C， lh。(3) 冷凍干燥將膠化后的海參進行冷凍干燥，水分小于10%，優選水分小于 3% 。(4) 粗粉碎將冷凍干燥后的海參進行粗粉碎得到細度為10 300目不等的海 參粉。(5) 超微粉碎將粗粉碎的海參粉用氣流粉碎機進行超微粉碎，粉碎細度為100 3000目。(6) 納米粉碎將經過氣流粉碎的海參超微粉用高能球磨粉碎機進行納米化粉 碎，粉碎時間為4 20h，優選10 12h，細度可達到10 1000nm。其中用X-射線 檢測粒度分布，在0 300nm范圍，它的平均粒徑是100 200nm。(7) 酶解及分離納米海參粉與水以l: 3 10質量比加水溶解，按納米海參粉蛋白酶為lg:O. 1 1010mg的比例加入蛋白酶在相應的pH值下于40 7(TC進行 1 5h的酶解，而后加溫滅酶，0 10。C高速離心，取上清液；酶解所選用的蛋 白酶可以是各種酶，如菠蘿蛋白酶，木瓜蛋白酶，堿性蛋白酶，中性蛋白酶， 風味蛋白酶，胰蛋白酶等，同時可以是單種酶酶解，也可以是選用兩種或兩種 以上的蛋白酶進行酶解。優選納米海參粉末與水按照U 7的比例進行混勻，用 堿性蛋白酶Acalase與胰酶進行雙酶解。酶解溫度為40 70。C，先將pH調為7 8， 按照納米海參粉末與酶的質量比(l克0. 1 10mg)加入堿性蛋白酶Acalase， 進行酶解O. lh 5h后，將pH調節到8 10，按照納米海參粉末與酶的質量比(1 克10mg 1000mg)加入胰蛋白酶進行2次酶解0. 1 5h ，酶解溫度為40 70。C， 先將pH調為8 10。酶反應結束后將酶解反應液于90 10(TC加熱l 20min滅酶。 將酶解產物進行離心分離，取酶解上清液。6(8) 醇沉與分離按照酶解上清液的體積，將其中加入鹽至終質量濃度達到1 8%，加入的鹽可以是氯化鈉、醋酸鈣等，加入乙醇溶液進行醇沉，最終酶解液中的乙醇質量濃度為20 70%，低溫(0 10°C)離心，得到低分子化海參總粗多糖。(9) 制得的海參總粗多糖，可以本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種低分子量海參多糖的制備方法，其特征在于工藝步驟為：　（１）原料處理：將海參剪開洗凈，絞碎，置于密閉容器中；　（２）加熱膠化：７０～１３０℃，加熱１ｍｉｎ～２０ｈ；　（３）冷凍干燥：將膠化后的海參進行冷凍干燥，水分小于１ ０％；　（４）粗粉碎：將冷凍干燥后的海參進行粗粉碎至１０～３００目；　（５）超微粉碎：將粗粉碎的海參粉用氣流粉碎機進行超微粉碎至１００～３０００目；　（６）納米粉碎：將經過氣流粉碎的海參超微粉用高能球磨粉碎機進行納米化粉碎 ，粉碎時間為４～２０ｈ至平均粒徑是１００～２００ｎｍ；　（７）酶解及分離：納米海參粉與水以１∶３～１０質量比加水溶解，按納米海參粉∶蛋白酶為１ｇ∶０．１～１０１０ｍｇ的比例加入蛋白酶在相應的ｐＨ值下于４０～７０℃進行１～５ｈ的酶解，而 后加溫滅酶，０～１０℃高速離心，取上清液；　所述蛋白酶選至菠蘿蛋白酶，木瓜蛋白酶，堿性蛋白酶，中性蛋白酶，風味蛋白酶，胰蛋白酶中１～３種；　（８）醇沉與分離：按照酶解上清液的質量，將其中加入鹽至終質量濃度達到１～８％，加入的鹽是 氯化鈉或醋酸鈣，加入乙醇溶液進行醇沉，最終酶解液中的乙醇質量濃度為２０～７０％，０～１０℃離心，得到低分子化海參總粗多糖。　（９）脫色：將制得的海參低分子粗多糖加水進行溶解，粗多糖與水質量比為：１∶５～２０，用雙氧水進行脫色至黃色或無 色，脫色時溶液ｐＨ為８～１２，溫度４０～６０℃，加入的雙氧水終質量濃度為０．１～５．０％，脫色后將溶液ｐＨ調節到２，離心取上清液，以去除酸性蛋白；　（１０）純化：將脫色后的海參總粗多糖水溶液中加入鹽至終質量濃度為１～８％，加入的鹽可以 是氯化鈉、醋酸鈣等，然后加入乙醇進行醇沉，加入乙醇的終質量濃度為４０～８０％，離心后，對醇沉物進行脫水干燥，即得低分子海參總多糖。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：邵俊杰，焦健，
申請(專利權)人：大連海晏堂生物有限公司，
類型：發明
國別省市：91[中國|大連]