一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法技術

本發(fā)明專利技術公開了一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法，包括以下步驟：a)將山茱萸干料粉碎成山茱萸超細粉料；b)山茱萸超細粉料在培養(yǎng)罐內(nèi)超聲、酶解，加蒸餾水，得到山茱萸多糖提取液；c)山茱萸多糖提取液的滅酶處理；d)超聲、過濾、加乙醇靜置、抽濾、干燥得山茱萸多糖粗品；e)對山茱萸多糖粗品進行分級脫蛋白；f)溶于蒸餾水，離心分離，取上清液過DEAE?cellulose柱及層析柱；g)洗脫液進行真空低溫升華，得到白色山茱萸多糖。本發(fā)明專利技術提出的分離提取與純化方法，在復合酶霧汽的環(huán)境中進行酶解、分級脫蛋白以及蒸餾水層析，提取時間短，提取效率高，山茱萸多糖的產(chǎn)品純度高，滿足工業(yè)和實驗要求。

Isolation, extraction and purification of Polysaccharide from Cornus officinalis

The invention discloses a method of extraction and purification, separation of a cornel polysaccharide, which comprises the following steps: a) the dogwood dogwood powder dry grinding Chengshan; b) dogwood ultrafine powder in the culture tank, ultrasonic enzymolysis, add distilled water to obtain extract polysaccharides from Cornus officinalis; c) cornel polysaccharide extract enzyme inactivation; D) ultrasound, filtration, ethanol and static, filtration and drying of cornel polysaccharide; E) of Fructus Corni polysaccharides were graded removal of protein; F) dissolved in distilled water and centrifugation, the supernatant was DEAE column cellulose and the column; g) for low temperature vacuum sublimation eluent to obtain white dogwood polysaccharides. The separation and extraction method proposed by the invention is enzymolysis, fractionation, deproteinized and distilled water chromatography in the environment of mixed enzyme and mist. The extraction time is short and the extraction efficiency is high. The purity of Fructus Corni polysaccharide is high, which meets the requirements of industry and experiment.

【技術實現(xiàn)步驟摘要】
一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法
本專利技術涉及植物多糖提取
，具體涉及一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法。
技術介紹
山茱萸為山茱萸科植物山茱萸的干熟果肉，又名藥棗或蜀棗，具有增強免疫系統(tǒng)功能，抗癌，利尿降壓抗氧化的藥理功效，是一種滋補類名貴藥材。除此之外其在食品工業(yè)也有廣泛應用。山茱萸含有山茱萸多糖、有機酸、鞣質(zhì)等有效成分，其中山茱萸多糖尤其具有免疫調(diào)節(jié)、抗刷老等功效，其對于人體其他疾病的預防與治療也同樣隨著人們對其認識的加深而得到越來越多的重視。而山茱萸多糖的提取，分離和純化的技術方法也成為研究的一大方向。現(xiàn)有的山茱萸多糖提取方法普遍通過醇沉過濾后經(jīng)單次脫蛋白及過層析柱等方式進行，但是這種方式存在提取效率低，提取時間周期長且多糖的獲取純度較低，難以滿足工業(yè)或?qū)嶒炓蟮热秉c。本專利技術針對上述現(xiàn)有技術中的缺點提供一種高效率高純的山茱萸多糖的分離提取與純化方法。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種高效高純度山茱萸多糖的提取、分離及純化方法，縮短了提取時間，提高了提取效率及山茱萸多糖產(chǎn)品純度。一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法，包括以下步驟：a)將山茱萸干料以液氮為冷源，經(jīng)冷凍粉碎機粉碎成山茱萸超細粉料；b)將所述山茱萸超細粉料噴灑于35℃環(huán)境的復合酶霧汽培養(yǎng)罐內(nèi)，并輔以超聲處理，酶解15min，加入35℃蒸餾水，得到山茱萸多糖提取液；c)將山茱萸多糖提取液加熱至90℃，保持15分鐘，冷卻至35℃，進行滅酶處理；d)滅酶處理后進行超聲處理，超聲功率600w，提取3次后過濾，加入等體積的工業(yè)純乙醇靜置3h，然后進行抽濾以及低溫升華干燥，得到山茱萸多糖粗品；e)對山茱萸多糖粗品進行分級脫蛋白；f)分級脫蛋白后將之溶于三次蒸餾水中，進行離心分離，取上清液過DEAE-cellulose柱及層析柱；g)洗脫液進行真空低溫升華，得到白色山茱萸多糖。優(yōu)選的，步驟b)中所述復合酶霧汽來自pH6.5含有果膠酶、纖維素酶和中性蛋白酶的酶溶液，其中超聲頻率為1.7MHz，以能夠?qū)崿F(xiàn)超聲懸浮及加速酶解過程。優(yōu)選的，步驟e)中的分級脫蛋白的過程為：將山茱萸多糖粗品制成0.5mg/ml的溶液，定容100ml，按比例逐次加入濃度遞增的Sevag試劑，萃取3次，每次取上清液；其中，三次萃取過程中Sevag試劑的添加量分別為10ml、15ml和25ml。優(yōu)選的，步驟f)中的過柱過程具體為：將分級脫蛋白后溶于三次蒸餾水的山茱萸多糖溶液過DEAE-cellulose柱兩次，用NaCl溶液洗脫，洗脫液進行層析分離過凝膠柱，將SephacrylS-300柱與SephacrylS-300HR柱進行上下連接，其中，SephacrylS-300柱規(guī)格為120mm×300mm，SephacrylS-300HR柱規(guī)格為30mm×300mm；后用三次蒸餾水4MPa壓力下洗脫。本專利技術的有益效果：1)將山茱萸首先進行低溫粉碎霧化酶解，充分利用超聲振動及超聲懸浮的效果，在維持復合酶霧汽環(huán)境的基礎上大大提高的酶解速率，其酶解過程的前置也更好地保護了山茱萸多糖結構的完整性，同時，充分的酶解過程也將現(xiàn)有技術中重復醇沉過濾的過程簡化為一次醇沉，并進一步縮短了后續(xù)醇沉步驟的沉降時間；2)對山茱萸多糖粗品分級脫蛋白，在Sevag脫蛋白技術的基礎上，通過精確控制Sevag試劑的用量逐級增加Sevag試劑濃度，最終保證了在不破壞山茱萸多糖結構的基礎上，獲得了更高純度的山茱萸多糖產(chǎn)品；3)在層析過程中在將SephacrylS-300柱與SephacrylS-300HR柱連接使用的基礎上，將山茱萸多糖粗品溶于三次蒸餾水中，減小了SephacrylS-300HR柱外徑尺寸，并統(tǒng)一加壓洗脫，在縮短了層析過程的同時，進一步大幅提高了山茱萸多糖產(chǎn)品的純度，更好地滿足了工業(yè)或?qū)嶒炓螅瑫r，三次蒸餾水的使用也尤為關鍵，其是連接兩種層析柱進行層析過柱提高純度的前提基礎。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術作進一步解說。實施例，本專利技術提出的一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法，包括以下步驟：a)將山茱萸干料以液氮為冷源，經(jīng)冷凍粉碎機粉碎成山茱萸超細粉料；b)將山茱萸超細粉料噴灑于35℃環(huán)境的復合酶霧汽培養(yǎng)罐內(nèi)，并輔以超聲處理，酶解15min，加入35℃蒸餾水，得到山茱萸多糖提取液；其中，復合酶霧汽來自pH6.5含有果膠酶、纖維素酶和中性蛋白酶的酶溶液，其中超聲頻率為1.7MHz；c)將山茱萸多糖提取液加熱至90℃，保持15分鐘，冷卻至35℃，進行滅酶處理；d)滅酶處理后進行超聲處理，超聲功率600w，提取3次后過濾，加入等體積的工業(yè)純乙醇靜置3h，然后進行抽濾以及低溫升華干燥，得到山茱萸多糖粗品；e)對山茱萸多糖粗品進行分級脫蛋白：將山茱萸多糖粗品制成0.5mg/ml的溶液，定容100ml，按比例逐次加入濃度遞增的Sevag試劑，萃取3次，每次取上清液；其中，三次萃取過程中Sevag試劑的添加量分別為10ml、15ml和25ml；f)分級脫蛋白后將之溶于三次蒸餾水中，進行離心分離，取上清液過DEAE-cellulose柱兩次，用NaCl溶液洗脫，洗脫液進行層析分離過凝膠柱，將SephacrylS-300柱與SephacrylS-300HR柱進行上下連接，其中，SephacrylS-300柱規(guī)格為120mm×300mm，SephacrylS-300HR柱規(guī)格為30mm×300mm；后用三次蒸餾水4MPa壓力下洗脫；g)洗脫液進行真空低溫升華，得到白色山茱萸多糖。以上所述，僅為本專利技術較佳的具體實施方式，但本專利技術的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本
的技術人員在本專利技術揭露的技術范圍內(nèi)，根據(jù)本專利技術的技術方案及其專利技術構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本專利技術的保護范圍之內(nèi)。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：a)將山茱萸干料以液氮為冷源，經(jīng)冷凍粉碎機粉碎成山茱萸超細粉料；b)將所述山茱萸超細粉料噴灑于35℃環(huán)境的復合酶霧汽培養(yǎng)罐內(nèi)，并輔以超聲處理，酶解15min，加入35℃蒸餾水，得到山茱萸多糖提取液；c)將山茱萸多糖提取液加熱至90℃，保持15分鐘，冷卻至35℃，進行滅酶處理；d)滅酶處理后進行超聲處理，超聲功率600w，提取3次后過濾，加入等體積的工業(yè)純乙醇靜置3h，然后進行抽濾以及低溫升華干燥，得到山茱萸多糖粗品；e)對山茱萸多糖粗品進行分級脫蛋白；f)分級脫蛋白后將之溶于三次蒸餾水中，進行離心分離，取上清液過DEAE?cellulose柱及層析柱；g)洗脫液進行真空低溫升華，得到白色山茱萸多糖。

【技術特征摘要】
1.一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：a)將山茱萸干料以液氮為冷源，經(jīng)冷凍粉碎機粉碎成山茱萸超細粉料；b)將所述山茱萸超細粉料噴灑于35℃環(huán)境的復合酶霧汽培養(yǎng)罐內(nèi)，并輔以超聲處理，酶解15min，加入35℃蒸餾水，得到山茱萸多糖提取液；c)將山茱萸多糖提取液加熱至90℃，保持15分鐘，冷卻至35℃，進行滅酶處理；d)滅酶處理后進行超聲處理，超聲功率600w，提取3次后過濾，加入等體積的工業(yè)純乙醇靜置3h，然后進行抽濾以及低溫升華干燥，得到山茱萸多糖粗品；e)對山茱萸多糖粗品進行分級脫蛋白；f)分級脫蛋白后將之溶于三次蒸餾水中，進行離心分離，取上清液過DEAE-cellulose柱及層析柱；g)洗脫液進行真空低溫升華，得到白色山茱萸多糖。2.根據(jù)權利要求1所述的一種山茱萸多糖的分離提取與純化方法，其特征在于：步驟b)中所述復合酶霧汽來自pH6.5含有果膠酶、纖維素酶和中性蛋白酶的酶溶液，其中...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：李展，
申請(專利權)人：李展，
類型：發(fā)明
國別省市：陜西,61