本發明專利技術涉及一種結合乙肝表面抗原的單克隆抗體及產生該抗體的保藏編號為CCTCC?No:C2016210的雜交瘤細胞株，以及抗體的制備方法和抗體在乙肝表面抗原檢測試劑盒中的應用。本發明專利技術提供了能夠與乙肝表面抗原結合的抗體，能夠與野生型乙肝表面抗原或突變型的乙肝表面抗原結合，具有廣泛的結合能力，可以有效降低假陰性檢測結果，提高對乙肝肝炎病毒檢測的準確性。
Preparation and screening of monoclonal antibody against hepatitis B surface antigen
The invention relates to a monoclonal antibody combined with hepatitis B surface antigen and a hybridoma cell line with the preservation number CCTCC No:C2016210 producing the antibody, and the preparation method of the antibody and the application of the antibody in the detection kit for hepatitis B surface antigen. The present invention provides an antibody that can bind to hepatitis B surface antigen, can bind to wild-type hepatitis B surface antigen or mutant hepatitis B surface antigen, has extensive binding ability, can effectively reduce false negative detection results, and can improve the accuracy of hepatitis B virus detection.
【技術實現步驟摘要】
一種抗乙肝表面抗原的單抗隆抗體制備和篩選
本專利技術涉及單克隆抗體的制備以及篩選,特別是涉及能夠與乙肝病毒表面抗原結合的單克隆抗體。
技術介紹
乙型肝炎病毒(HBV)是一種雙鏈DNA病毒，屬于嗜肝DNA病毒科，是直徑約42nm的球形顆粒。具有外殼和核衣殼兩部分，外殼厚7-8nm，具有S蛋白，M蛋白和L蛋白，S蛋白表面具有與病毒感染有關的乙肝表面抗原(HBsAg)。乙型肝炎病毒是引起病毒性肝炎的最常見病原，其可以通過血液、母嬰、密切接觸和性接觸傳染，人體感染乙肝病毒后，易引起慢性乙型肝炎，進而導致肝硬化和/或肝癌。目前，全世界有約4億慢性乙肝病毒(HBV)感染者，而中國大約有1億攜帶者，高居世界第一。據統計，每年有100萬～150萬人死于急性或慢性HBV感染導致的肝功能衰竭、肝硬化和/或肝癌。因而預防HBV感染成為世界公共健康問題。利用免疫學反應原理來檢測樣本中是否存在被分析物質的這一技術被廣泛應用在各個領域。可以用該原理來檢測各種生物樣本(唾液、血液、尿液、血清、汗液等)中的被分析物質，以達到來檢測疾病和人類的健康狀況(早孕、腫瘤、傳染病、毒品等)的目的。這種檢測技術的根本原理是建立在免疫分子之間具有特異性結合的性能，例如抗體與抗原、半抗原/抗體，生物素與抗生素等。另外，很多這樣的檢測都可以在固體介質上完成，例如常用的層析試劑條、玻璃或塑料多孔盤中，免疫層析裝置等。通常，在免疫特異結合分子上可以在結合一些固體顆粒或者化學物質，這樣可以通過肉眼或其它儀器設備來定性、半定量或定量的得出檢測結果。這種固體顆粒可以是帶顏色的膠體顆粒(乳膠或金顆粒)，這種化學物質可以是帶有發色基團的物質，這些物質在其它合適的條件下可以發出特定波長來顯示檢測結果。由于HBV病毒變異較快，可導致HBsAg氨基酸序列和結構變異。當HBsAg結構變化后，檢測突變前的抗原的抗體的免疫結合可能會出現障礙，因此，建立在抗原抗體免疫結合基礎上的HBV檢測容易出現假陰性結果。如果HBV未被及時檢測出來，不僅乙肝攜帶者自身受影響，并且會導致乙肝病毒隨血液、母嬰、父嬰、密切接觸、性行為等傳播。因此，應使用對野生型和突變型病毒具有較寬適應性的乙肝抗體作為原料。單克隆抗體，是指僅由一種類型的細胞制作出來的抗體。單克隆抗體由可以制造相應抗體的免疫細胞和癌細胞融合后的細胞產生，這種融合細胞既具有癌細胞不斷分裂的能力，又具有免疫細胞可以產生抗體的能力。利用抗原抗體特異性結合的免疫學方法檢測乙肝表面抗原(HBsAg)，通常會使用雙抗體夾心法進行檢測。其中一個抗體固定在固相介質上作為包被抗體，另一個抗體上結合固相顆粒或者化學物質作為檢測抗體。目前，已有關于能夠同時與野生型或突變型HBsAg相結合的一對單克隆抗體的報道。例如US2004/0219154A1能夠同時與野生型的和6種突變型乙肝表面抗原結合。然而，目前仍有很多突變型HBsAg未能被識別，因此，對具有同時結合野生型和突變型HBsAg的單克隆抗體具有很大的需求。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是尋求能夠結合乙肝表面抗原的單克隆抗體，特別是同時結合野生型和突變型HBsAg的單克隆抗體。因此，本專利技術中，通過制備雜交瘤細胞株和單克隆抗體，篩選夠與野生型或突變型乙肝表面抗原結合的單克隆抗體。具體的方法是采用HBsAg作為抗原，采用通用方法免疫動物，然后把免疫好的動物的免疫細胞與骨髓瘤細胞進行融合制備雜交瘤細胞；雜交瘤細胞分泌出的單克隆抗體。首先，本專利技術提供一種能夠生產結合乙肝表面抗原(HBsAg)的單克隆抗體的雜交瘤細胞株，保藏于中國典型培養物中心(CCTCC)，其保藏編號為CCTCCNo:C2016210，分類命名為:雜交瘤細胞株5C7，保藏日期是:2016年12月28日，保藏地址是：湖北省武漢市武昌區武漢大學內。優選的，本專利技術還提供一種結合乙肝表面抗原(HBsAg)的單克隆抗體,該單克隆抗體由保藏編號為CCTCCNo:C2016210的雜交瘤細胞株分泌產生，該抗體不僅能夠特異性的結合野生型HBsAg，還能夠與多種突變型抗原結合，該單克隆抗體屬于IgG1亞型，輕鏈是kappa鏈。優選的,一種通過保藏編號為CCTCCNo:C2016210的雜交瘤細胞株產生單克隆抗體的方法，包括以下步驟:(1)篩選獲得穩定雜交瘤細胞株:用外購抗原免疫動物，采血測定血清效價后，取免疫動物脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合，并用HAT篩選得到穩定的雜交瘤細胞株；(2)用ELISA法篩選陽性細胞株，克隆得穩定雜交瘤細胞株CCTCCNo:C2016210；(3)將雜交瘤細胞株注射到液體石蠟預處理的F1小鼠腹腔，培育，區腹水，ProtainA親和層析獲得單克隆抗體。優選的，該單克隆抗體還包括該抗體的片段和衍生物。優選的，本專利技術還提供由保藏編號為CCTCCNo:C2016210的雜交瘤細胞株分泌產生的單克隆抗體在制備乙型病毒性肝炎或乙肝相關疾病的病情評估的試劑或試劑盒中的應用。另一方面，本專利技術還提供一種能夠生產結合乙肝表面抗原(HBsAg)的單克隆抗體的雜交瘤細胞株，保藏于中國典型培養物中心(CCTCC)，其保藏編號為CCTCCNo:C2016198，分類命名為:雜交瘤細胞株15G6E1，保藏日期是:2016年12月28日，保藏地址是：湖北省武漢市武昌區武漢大學內。優選的，本專利技術還提供一種結合乙肝表面抗原(HBsAg)的單克隆抗體,該單克隆抗體由保藏編號為CCTCCNo:C2016198的雜交瘤細胞株分泌產生，該抗體不僅能夠特異性的結合野生型HBsAg，還能夠與多種突變型抗原結合，該單克隆抗體屬于IgG1亞型，輕鏈是kappa鏈。優選的,本專利技術還提供一種通過保藏編號為CCTCCNo:C2016198的雜交瘤細胞株產生單克隆抗體的方法，包括以下步驟:(1)篩選獲得穩定雜交瘤細胞株:用外購抗原免疫動物，采血測定血清效價后，取免疫動物脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合，并用HAT篩選得到穩定的雜交瘤細胞株；(2)用ELISA法篩選陽性細胞株，克隆得穩定雜交瘤細胞株CCTCCNo:C2016198：(3)將雜交瘤細胞株注射到液體石蠟預處理的Balb/c小鼠腹腔，培育，區腹水，ProtainA親和層析獲得單克隆抗體。優選的，該單克隆抗體還包括該抗體的片段和衍生物。優選的，本專利技術還提供由保藏編號為CCTCCNo:C2016198的雜交瘤細胞株分泌產生的單克隆抗體在制備乙型病毒性肝炎或乙肝相關疾病的病情評估的試劑或試劑盒中的應用。此外，本專利技術還提供由保藏編號分別為CCTCCNo:C2016198和CCTCCNo:C2016210的雜交瘤細胞株在制備乙型病毒性肝炎或乙肝相關疾病的病情評估的試劑或試劑盒中的應用。本專利技術還提供由保藏編號分別為CCTCCNo:C2016198和CCTCCNo:C2016210的雜交瘤細胞株分別產生的單克隆抗體在制備乙型病毒性肝炎或乙肝相關疾病的病情評估的試劑或試劑盒中的應用。優選的，由保藏編號分別為CCTCCNo:C2016198和CCTCCNo:C2016210的雜交瘤細胞株分別產生的單克隆抗體能夠結合野生型和突變型HBsAg；其中，所述突變型HBsAg在同野生型比較中，不僅僅指氨基酸序列的變化，同時還包括氨基酸變化引起的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種能夠生產結合乙肝表面抗原的單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其保藏編號為CCTCC?No:C2016210。
【技術特征摘要】
1.一種能夠生產結合乙肝表面抗原的單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其保藏編號為CCTCCNo:C2016210。2.一種結合乙肝表面抗原的單克隆抗體,該單克隆抗體由保藏編號為CCTCCNo:C2016210的雜交瘤細胞株產生。3.一種通過保藏編號為CCTCCNo:C2016210的雜交瘤細胞株產生單克隆抗體的方法，包括以下步驟:(1)篩選獲得穩定雜交瘤細胞株:用外購抗原免疫動物，采血測定血清效價后，取免疫動物脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合，并用HAT篩選得到...
【專利技術屬性】
技術研發人員：杜付彬，戈東平，陸啟明，
申請(專利權)人：艾博生物醫藥杭州有限公司，
類型：發明
國別省市：浙江,33
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