一種PCT濃度檢測試劑盒及其制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種PCT濃度檢測試劑盒及其制備方法，所述PCT濃度檢測試劑盒包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀。本發(fā)明專利技術(shù)通過所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，同時，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀，解決了現(xiàn)有PCT試劑盒在檢測新鮮樣本時抗干擾能力差的問題。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種PCT濃度檢測試劑盒及其制備方法
本專利技術(shù)涉及降鈣素原(PCT)濃度檢測
，具體涉及一種PCT濃度檢測試劑盒及其制備方法。
技術(shù)介紹
降鈣素原(procalcitionin，檢測PCT)是一種由116個氨基酸組成、分子量為13kDa的糖蛋白，是血清降鈣素(CT)的前體物，在人體內(nèi)半衰期約為20-24小時，穩(wěn)定性好。正常條件下，PCT在甲狀腺C細胞中生成并裂解成降鈣素，人血清PCT含量極低，約2.5pg/ml。當嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時，PCT在血漿中的水平升高。自身免疫、過敏和病毒感染時PCT不會升高。局部有限的細菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會導致PCT升高。PCT檢測試劑盒主要包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品。現(xiàn)有的PCT檢測試劑盒具有以下缺陷：1、配套使用的校準品試劑一般為凍干粉使用不便，穩(wěn)定性略差，稀釋時可能存在誤差或?qū)е挛廴尽?、新鮮樣本不同程度干擾導致檢測結(jié)果存在較大的差異，現(xiàn)有PCT免疫檢測試劑檢測新鮮樣本的抗干擾能力有所欠缺。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種PCT濃度檢測試劑盒及其制備方法，解決現(xiàn)有PCT試劑盒在檢測新鮮樣本時抗干擾能力差的問題。此外，本專利技術(shù)還提供上述檢測試劑盒的制備方法。一種PCT濃度檢測試劑盒，包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀。本專利技術(shù)采用全自動磁微粒化學發(fā)光檢測方法，按照夾心法原理進行免疫檢測。磁微粒上包被生物素抗體，抗體為鼠的單克隆抗體。本專利技術(shù)所述磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品為現(xiàn)有PCT濃度檢測試劑盒(沃文特公司生產(chǎn)的試劑盒)中試劑。本專利技術(shù)通過試驗證明：向酶結(jié)合物中添加氯化鈉能夠消除臨床新鮮樣本的檢測干擾，向分析緩沖液中添加鐵氰化鉀能夠消除臨床新鮮樣本的檢測干擾，向酶結(jié)合物中添加氯化鈉，同時向分析緩沖液中添加鐵氰化鉀，能夠有效消除臨床新鮮樣本的檢測干擾。本專利技術(shù)通過所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，同時，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀，解決了現(xiàn)有PCT試劑盒在檢測新鮮樣本時抗干擾能力差的問題。進一步地，酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.03-0.05g/ml。申請人通過長期試驗發(fā)現(xiàn)：酶結(jié)合物中氯化鈉的最佳濃度為0.03-0.05g/ml。其中，優(yōu)選為0.03g/ml，防止鹽離子濃度過高抑制抗原抗體免疫反應(yīng)及利于節(jié)約氯化鈉。進一步地，分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L。申請人通過長期試驗發(fā)現(xiàn)：分析緩沖液中鐵氰化鉀的最佳濃度為0.1g/L。進一步地，酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.03-0.05g/ml，所述分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L。進一步地，校準品中添加酪蛋白或牛血清白蛋白。本專利技術(shù)通過向10ml校準品中添加0.10g酪蛋白或牛血清白蛋白，能夠明顯提高校準品穩(wěn)定性。其中，添加酪蛋白的效果最佳。進一步地，校準品中酪蛋白或牛血清白蛋白的濃度為10mg/ml。一種PCT濃度檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：1)、確定酶結(jié)合物中氯化鈉的最適宜濃度，并向酶結(jié)合物中添加氯化鈉；2)、確定分析緩沖液中鐵氰化鉀的最適宜濃度，并向分析緩沖液中添加鐵氰化鉀；3)、向校準品中添加酪蛋白或牛血清白蛋白。進一步地，確定酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度的具體步驟為：a1)、分別稱取以下質(zhì)量的氯化鈉：0.10g、0.20g、0.30g、0.40g、0.50g，并將其分別加入到10mlPCT試劑的酶結(jié)合物組分中，氯化鈉終濃度分別為0.01g/ml、0.02g/ml、0.03g/ml、0.04g/ml、0.05g/ml，與分析緩沖液、磁珠標記抗體組合成PCT檢測試劑，分別設(shè)置為實驗組B，C，D，E，F(xiàn)組，酶結(jié)合物組分中未添加氯化鈉的PCT檢測試劑設(shè)置為對照組A組；b1)、使用A對照組以及B、C、D、E、F實驗組試劑在貝克曼全自動化學發(fā)光免疫分析儀上檢測150例PCT臨床新鮮樣本；c1)、將A、B、C、D、E、F組試劑檢測臨床新鮮樣本的結(jié)果與羅氏e411臨床檢驗報告結(jié)果進行對比分析，獲得酶結(jié)合物中氯化鈉的最適宜濃度為0.03-0.05g/ml。進一步地，確定分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度的具體步驟為：a1)、稱量0.10g鐵氰化鉀，將其加入到1000ml的PCT試劑分析緩沖液組分中，最終濃度為0.1g/L，然后與步驟1)獲得的酶結(jié)合物、磁珠標記抗體組合成PCT檢測試劑，設(shè)置為實驗組Ⅱ組，同時設(shè)置分析緩沖液組分中未添加鐵氰化鉀的對照組為Ⅰ組；b1)、將兩組試劑在貝克曼全自動化學發(fā)光免疫分析儀上檢測398例臨床新鮮樣本；c1)、將Ⅰ、Ⅱ組的臨床新鮮樣本檢測結(jié)果與羅氏e411臨床檢驗報告結(jié)果進行對比分析獲得分析緩沖液中鐵氰化鉀的最適宜濃度為0.1g/L。進一步地，步驟3)中向10ml校準品中添加0.10g酪蛋白或牛血清白蛋白。本專利技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下的優(yōu)點和有益效果：1、本專利技術(shù)通過所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，同時，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀，解決了現(xiàn)有PCT試劑盒在檢測新鮮樣本時抗干擾能力差的問題。2、本專利技術(shù)通過向10ml校準品中添加0.10g酪蛋白或牛血清白蛋白，能夠明顯提高校準品穩(wěn)定性。具體實施方式為使本專利技術(shù)的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚明白，下面結(jié)合實施例，對本專利技術(shù)作進一步的詳細說明，本專利技術(shù)的示意性實施方式及其說明僅用于解釋本專利技術(shù)，并不作為對本專利技術(shù)的限定。實施例1：一種PCT濃度檢測試劑盒，包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀；所述酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.03g/ml，所述分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L。實施例2：一種PCT濃度檢測試劑盒，包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀；所述酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.04g/ml，所述分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L。實施例3：一種PCT濃度檢測試劑盒，包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀；所述酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.05g/ml，所述分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L。實施例4：一種PCT濃度檢測試劑盒，包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀；所述酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.05g/ml，所述分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L；所述校準品中添加酪蛋白，所述校準品中酪蛋白的濃度為10mg/ml。實施例5：一種PCT濃度檢測試劑盒，包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀；所述酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.05g/ml，所述分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L；所述校準品中添加牛血清白蛋白，所述校準品中牛血清白蛋白的濃度為10mg/ml。一種實施例4或?qū)嵤├?所述PCT濃度檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：1)、確定酶結(jié)合物中氯化鈉的最適宜濃度，并向酶結(jié)合物中添加氯化鈉，確定酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度的具體步驟為：a1)、分別稱取以下質(zhì)量的氯化鈉：0.10g、0.本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
1.一種PCT濃度檢測試劑盒，包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，其特征在于，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種PCT濃度檢測試劑盒，包括磁珠標記抗體、分析緩沖液、酶結(jié)合物和校準品，其特征在于，所述酶結(jié)合物中添加氯化鈉，所述分析緩沖液中添加鐵氰化鉀。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種PCT濃度檢測試劑盒，其特征在于，所述酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.03-0.05g/ml。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種PCT濃度檢測試劑盒，其特征在于，所述分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種PCT濃度檢測試劑盒，其特征在于，所述酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度為0.03-0.05g/ml，所述分析緩沖液中鐵氰化鉀的濃度為0.1g/L。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種PCT濃度檢測試劑盒，其特征在于，所述校準品中添加酪蛋白或牛血清白蛋白。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種PCT濃度檢測試劑盒，其特征在于，所述校準品中酪蛋白或牛血清白蛋白的濃度為10mg/ml。7.一種如權(quán)利要求6所述PCT濃度檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1)、確定酶結(jié)合物中氯化鈉的最適宜濃度，并向酶結(jié)合物中添加氯化鈉；2)、確定分析緩沖液中鐵氰化鉀的最適宜濃度，并向分析緩沖液中添加鐵氰化鉀；3)、向校準品中添加酪蛋白或牛血清白蛋白。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述PCT濃度檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，確定酶結(jié)合物中氯化鈉的濃度的具體步驟為：a1)、分別稱取以下質(zhì)量的氯化鈉：0.10g、0.20g、0.30g、0.40g、0.50g，并將其分別加入到10mlPCT試...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：段元安，李玲，楊春蘭，
申請(專利權(quán))人：四川沃文特生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：四川,51