基于SOD的復(fù)合微生物共生誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)和微生物共生培養(yǎng)菌劑及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及微生物共生培養(yǎng)領(lǐng)域，具體而言，提供了一種基于SOD的復(fù)合微生物共生誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)和微生物共生培養(yǎng)菌劑及其應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)提供的微生物共生培養(yǎng)的誘導(dǎo)方法，根據(jù)目標(biāo)菌株對(duì)氧含量的需求進(jìn)行分類，先將需氧量接近的菌株合并培養(yǎng)得到若干個(gè)菌株組，從需氧量最低的菌株組開始共生培養(yǎng)的誘導(dǎo)，通過(guò)保證體系中生物活性超氧化物歧化酶的量和逐漸提高培養(yǎng)條件中的氧氣含量來(lái)提升體系的適應(yīng)性，當(dāng)氧含量到達(dá)一定濃度時(shí)，加入氧含量需求相近的菌株組，再通過(guò)保證體系中超氧化物歧化酶的量和逐漸提高培養(yǎng)條件中的氧氣含量來(lái)提升體系對(duì)更多氧氣含量的適應(yīng)性，重復(fù)上述的操作，直至所有菌株組共生培養(yǎng)完成，得到微生物共生培養(yǎng)菌劑。

SOD-based symbiotic induction culture technology of composite microorganisms and microbial symbiotic culture agent and its application

The invention relates to the field of microbial symbiosis culture, in particular to a composite microbial symbiosis induction culture technology based on SOD and a microbial symbiosis culture agent and its application. The induction method of microbial symbiotic culture provided by the present invention classifies the target strains according to their demand for oxygen content. Firstly, the strains with similar oxygen demand are combined and cultured to obtain several strain groups. The induction of microbial symbiotic culture begins with the strains with the lowest oxygen demand, by ensuring the amount of bioactive superoxide dismutase in the system and gradually increasing the oxygen content in the culture conditions. Enhance the adaptability of the system. When the oxygen content reaches a certain concentration, the strains with similar oxygen demand are added, and then the adaptability of the system to more oxygen content is improved by ensuring the amount of superoxide dismutase in the system and gradually increasing the oxygen content in the culture conditions. Repeat the above operation until all strains are co-cultured and the microbial symbiotic culture bacteria are obtained. Agent.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
基于SOD的復(fù)合微生物共生誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)和微生物共生培養(yǎng)菌劑及其應(yīng)用
本專利技術(shù)涉及微生物共生培養(yǎng)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種基于SOD的復(fù)合微生物共生誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)和微生物共生培養(yǎng)菌劑及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
人們對(duì)微生物的利用經(jīng)歷了天然混合培養(yǎng)、純培養(yǎng)到有目的的混合培養(yǎng)(共培養(yǎng))階段。近幾十年來(lái)，人們逐漸發(fā)現(xiàn)有一些生化過(guò)程需要兩種以上的微生物才能進(jìn)行，有一些物質(zhì)需要多種微生物共同培養(yǎng)才能產(chǎn)生，因此微生物共培養(yǎng)成為工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、食品及環(huán)保等領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題，而且已經(jīng)成為提高產(chǎn)量或者發(fā)現(xiàn)新物質(zhì)的重要方法。現(xiàn)有微生物的復(fù)合利用大多為幾種菌種的直接混合，這種方式得到菌株并不能穩(wěn)定存在，易導(dǎo)致菌群失衡和菌種單一化，這種復(fù)合菌劑的產(chǎn)品質(zhì)量有待商榷。此外，目前的共生復(fù)合菌種發(fā)酵技術(shù)操作復(fù)雜，成本較高，同時(shí)菌種復(fù)配過(guò)程較為繁瑣，由于各菌株對(duì)營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境的要求不同，難于人工干擾控制，特別是對(duì)于氧氣需求量和耐受程度不同的菌株，現(xiàn)有技術(shù)的共生培養(yǎng)只局限于同類型不同種屬微生物共同生長(zhǎng)，目前，對(duì)氧環(huán)境要求不同的好氧菌、厭氧菌和兼性厭氧菌的人工誘導(dǎo)和共生培養(yǎng)技術(shù)沒(méi)有得到突破。同時(shí)，現(xiàn)有復(fù)合菌種穩(wěn)定性差，要求相對(duì)穩(wěn)定的繁殖條件；環(huán)境適應(yīng)性差，僅可用于菌種誘導(dǎo)篩選環(huán)境條件，實(shí)際應(yīng)用范圍小，環(huán)境的微小改變很有可能導(dǎo)致菌群失衡，菌種單一化。實(shí)際應(yīng)用中，單獨(dú)需氧菌或單獨(dú)厭氧菌的處理效果差，現(xiàn)有技術(shù)多為需氧菌、厭氧菌依次適用，進(jìn)行多次處理，該工藝流程長(zhǎng)，工程造價(jià)大?，F(xiàn)有復(fù)合微生物菌劑實(shí)際應(yīng)用效果不顯著，需要的菌種用量過(guò)大。因此，開發(fā)一種對(duì)于氧含量需求和耐受程度不同的菌株共生培養(yǎng)的技術(shù)方法具有重要的意義。有鑒于此，特提出本專利技術(shù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的第一目的在于提供一種微生物共生培養(yǎng)的誘導(dǎo)方法，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中缺少一種可以將對(duì)氧含量需求和耐受程度不同的菌株共生培養(yǎng)的方法。本專利技術(shù)的第二目的在于提供一種微生物共生培養(yǎng)菌劑，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中缺少一種對(duì)氧含量需求和耐受程度不同的菌株共生的復(fù)合菌劑。本專利技術(shù)的第三目的在于提供上述微生物共生培養(yǎng)菌劑的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：一種微生物共生培養(yǎng)的誘導(dǎo)方法，包括以下步驟：將第一類菌與經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)處理的第二類菌混合培養(yǎng)，以第一預(yù)設(shè)間隔時(shí)間加入超氧化物歧化酶，和，以預(yù)設(shè)增加量提高培養(yǎng)時(shí)的O2量到20％-22％，得到微生物共生培養(yǎng)菌劑；所述誘導(dǎo)處理包括：在第二類菌培養(yǎng)過(guò)程中，以第一預(yù)設(shè)間隔時(shí)間加入超氧化物歧化酶，和，以第二預(yù)設(shè)間隔時(shí)間增加預(yù)設(shè)量提高培養(yǎng)時(shí)的O2量到5％-20％；所述第一類菌為好氧菌或兼性厭氧菌；所述第二類菌為兼性厭氧菌或厭氧菌中的至少一種；其中，所述第一類菌和第二類菌互不相同。進(jìn)一步地，好氧菌、兼性厭氧菌或混合培養(yǎng)的培養(yǎng)基均獨(dú)立地包括：5-10g/L紅糖，5-15g/L蛋白胨，1-5g/L牛肉粉和3-7g/L氯化鈉，pH7.2-7.4；優(yōu)選地，所述厭氧菌的培養(yǎng)基包括：15-25g/L胰酪蛋白胨，3-7g/LNaCl，1-3g/L硫代乙醇酸鈉，0.5-2g/L甲醛合次硫酸氫鈉，0.001-0.005g/L美藍(lán)和5-10g/L紅糖，pH7.4-7.6。進(jìn)一步地，所述第一預(yù)設(shè)間隔時(shí)間為1-5h；優(yōu)選地，所述超氧化物歧化酶的加入量為0.005％-0.5％(w/v，20000IU/g)，優(yōu)選為0.005％-0.1％(w/v，20000IU/g)，進(jìn)一步優(yōu)選為0.005％-0.05％(w/v，20000IU/g)；優(yōu)選地，所述預(yù)設(shè)增加量為1％-8％/天，優(yōu)選為1％-5％；優(yōu)選地，所述第二預(yù)設(shè)間隔時(shí)間為2-3天；優(yōu)選地，所述預(yù)設(shè)量為1％-5％；優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)方法中還包括將CO2含量從9％-11％降低到0.02％-0.5％的步驟。優(yōu)選地，好氧菌、厭氧菌或兼性厭氧菌均獨(dú)立地包括兩種以上菌株時(shí)，將所述菌株共培養(yǎng)2-3天，得到好氧菌、厭氧菌或兼性厭氧菌。優(yōu)選地，第一類菌或第二類菌加入共培養(yǎng)體系的菌濃度均獨(dú)立地為106-108cfu/ml，接種量為2-5％。進(jìn)一步地，所述好氧菌包括木醋桿菌、枯草芽孢桿菌、硝化細(xì)菌、醋酸桿菌或固氮菌中的至少一種。進(jìn)一步地，所述厭氧菌包括丁酸梭菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌、產(chǎn)甲烷菌或反硝化細(xì)菌中的至少一種。進(jìn)一步地，所述兼性厭氧菌包括腸膜明串珠菌、酵母菌、解淀粉芽孢桿菌、貝萊斯芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、植物乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、地衣芽孢桿菌或黃褐假單胞菌中的至少一種。上述誘導(dǎo)方法得到的微生物共生培養(yǎng)菌劑。上述誘導(dǎo)方法或微生物共生培養(yǎng)菌劑在如下A)-D)任意一項(xiàng)中的應(yīng)用：A)對(duì)動(dòng)物或植物的有效成分進(jìn)行提??；B)制備微生物菌肥；C)降解有毒物質(zhì)；D)降解大分子有機(jī)物質(zhì)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的有益效果為：本專利技術(shù)提供的微生物共生培養(yǎng)的誘導(dǎo)方法，克服對(duì)氧含量需求和耐受程度不同的菌株，甚至是專性好氧菌與專性厭氧菌，不能共生培養(yǎng)得到復(fù)合菌劑的技術(shù)問(wèn)題。根據(jù)目標(biāo)菌株對(duì)氧含量的需求進(jìn)行分類，先將需氧量接近的菌株合并培養(yǎng)得到若干個(gè)菌株組，從需氧量最低的菌株組開始共生培養(yǎng)的誘導(dǎo)，通過(guò)保證體系中生物活性超氧化物歧化酶的量和逐漸提高培養(yǎng)條件中的氧氣含量來(lái)提升體系的適應(yīng)性，當(dāng)氧含量到達(dá)一定濃度時(shí)，加入氧含量需求相近的菌株組，再通過(guò)保證體系中超氧化物歧化酶的量和逐漸提高培養(yǎng)條件中的氧氣含量來(lái)提升體系對(duì)更多氧氣含量的適應(yīng)性，重復(fù)上述的操作，直至所有菌株組，即目標(biāo)菌株全部共生培養(yǎng)完成，在自然條件下可以正常穩(wěn)定的共生生長(zhǎng)，得到微生物共生培養(yǎng)菌劑。該方法簡(jiǎn)便易操作，生產(chǎn)成本低，普適性廣，可以滿足各種不同的共生培養(yǎng)需求。該方法中各菌株在培養(yǎng)過(guò)程中通過(guò)不斷的調(diào)整可以達(dá)到穩(wěn)定的平衡共生狀態(tài)，復(fù)合菌群的穩(wěn)定性好，適應(yīng)性強(qiáng)，不會(huì)出現(xiàn)菌群失衡和單一化的現(xiàn)象，得到的微生物共生培養(yǎng)菌劑可以作為產(chǎn)品或保種直接使用。本專利技術(shù)提供的微生物共生培養(yǎng)菌劑具有穩(wěn)定好，適應(yīng)強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，不會(huì)出現(xiàn)菌群失衡和單一化的現(xiàn)象，成本低，可以通過(guò)發(fā)酵大量的生產(chǎn)，制備成本低，應(yīng)用范圍廣，適合各行業(yè)實(shí)際生產(chǎn)使用。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)施例1中枯草芽孢桿菌16SrRNA的檢測(cè)結(jié)果；圖2為實(shí)施例1中產(chǎn)甲烷菌16SrRNA的檢測(cè)結(jié)果；圖3為實(shí)施例2中短小芽孢桿菌的鑒定結(jié)果；圖4為實(shí)施例2中反硝化細(xì)菌基于16SrDNA檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹分析結(jié)果；圖5為實(shí)施例3中醋酸桿菌的鑒定結(jié)果；圖6為實(shí)施例4中植物乳桿菌的鑒定結(jié)果；圖7為實(shí)施例4中枯草芽孢桿菌的鑒定結(jié)果。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本專利技術(shù)，而不應(yīng)視為限制本專利技術(shù)的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。本專利技術(shù)中，如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，本文所提到的所有實(shí)施方式以及優(yōu)選實(shí)施方法可以相互組合形成新的技術(shù)方案。本專利技術(shù)中，如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，本文所提到的所有技術(shù)特征以及優(yōu)選特征可以相互組合形成新的技術(shù)方案。本專利技術(shù)中，如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，所涉及的各組分或其優(yōu)選組分可以相互組合形成新的技術(shù)方案。本專利技術(shù)中，除非有其他說(shuō)明，數(shù)值范圍“a～b”表示a到b之間的任意實(shí)數(shù)組合的縮略表示，其中a和b都是實(shí)數(shù)。例如數(shù)值范圍“6～22”表示本文中已經(jīng)全部列出了“6～22”之間的全部實(shí)數(shù)，“6～22”只是這些數(shù)值組合的縮略表示。本專利技術(shù)所本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種微生物共生培養(yǎng)的誘導(dǎo)方法，其特征在于，包括以下步驟：將第一類菌與經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)處理的第二類菌混合培養(yǎng)，以第一預(yù)設(shè)間隔時(shí)間加入超氧化物歧化酶，和，以預(yù)設(shè)增加量提高培養(yǎng)時(shí)的O2量到20％?22％，得到微生物共生培養(yǎng)菌劑；所述誘導(dǎo)處理包括：在第二類菌培養(yǎng)過(guò)程中，以第一預(yù)設(shè)間隔時(shí)間加入超氧化物歧化酶，和，以第二預(yù)設(shè)間隔時(shí)間增加預(yù)設(shè)量提高培養(yǎng)時(shí)的O2量到5％?20％；所述第一類菌為好氧菌或兼性厭氧菌；所述第二類菌為兼性厭氧菌或厭氧菌中的至少一種；其中，所述第一類菌和第二類菌互不相同。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種微生物共生培養(yǎng)的誘導(dǎo)方法，其特征在于，包括以下步驟：將第一類菌與經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)處理的第二類菌混合培養(yǎng)，以第一預(yù)設(shè)間隔時(shí)間加入超氧化物歧化酶，和，以預(yù)設(shè)增加量提高培養(yǎng)時(shí)的O2量到20％-22％，得到微生物共生培養(yǎng)菌劑；所述誘導(dǎo)處理包括：在第二類菌培養(yǎng)過(guò)程中，以第一預(yù)設(shè)間隔時(shí)間加入超氧化物歧化酶，和，以第二預(yù)設(shè)間隔時(shí)間增加預(yù)設(shè)量提高培養(yǎng)時(shí)的O2量到5％-20％；所述第一類菌為好氧菌或兼性厭氧菌；所述第二類菌為兼性厭氧菌或厭氧菌中的至少一種；其中，所述第一類菌和第二類菌互不相同。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，好氧菌、兼性厭氧菌或混合培養(yǎng)的培養(yǎng)基均獨(dú)立地包括：5-10g/L紅糖，5-15g/L蛋白胨，1-5g/L牛肉粉和3-7g/L氯化鈉，pH7.2-7.4；優(yōu)選地，所述厭氧菌的培養(yǎng)基包括：15-25g/L胰酪蛋白胨，3-7g/LNaCl，1-3g/L硫代乙醇酸鈉，0.5-2g/L甲醛合次硫酸氫鈉，0.001-0.005g/L美藍(lán)和5-10g/L紅糖，pH7.4-7.6。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述第一預(yù)設(shè)間隔時(shí)間為1-5h；優(yōu)選地，所述超氧化物歧化酶的加入量為0.005％-0.5％(w/v，20000IU/g)，優(yōu)選為0.005％-0.1％(w/v，20000IU/g)，進(jìn)一步優(yōu)選為0.005％-0.05％(w/v，20000IU/g)；優(yōu)選地，所述預(yù)設(shè)增加量為1％-8％/天，優(yōu)選...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王代軍，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：浙江黛君生物醫(yī)藥科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：浙江,33