促進基于抗體的交換成像的組合物和方法技術

一種用于樣品中的至少兩個靶標的交換成像的方法包括(a)提供至少兩種或更多種靶標識別抗體，其各自與相對應的MTAB?DM試劑結合，所述試劑能夠單價結合所述靶標識別抗體；(b)將樣品與所述兩種或更多種靶標識別抗體一起孵育，所述抗體各自與相對應的MTAB?DM試劑結合；(c)順序、分批或并行施加對應于所述MTAB?DM的至少兩個成像物部分；以及(d)順序、分批或并行地對所述至少兩個成像物部分成像。

Compositions and methods for promoting antibody-based exchange imaging

A method for exchange imaging of at least two targets in a sample includes (a) providing at least two or more target-specific antibodies, each of which is combined with the corresponding MTAB DM reagent, which can univalently bind the target-specific antibody; (b) incubating the sample with the two or more target-specific antibodies, each of which corresponds to the corresponding MTAB DM test. Agent binding; (c) sequential, batch or parallel application of at least two imaging object portions corresponding to the MTAB DM; and (d) sequential, batch or parallel imaging of at least two imaging object portions.

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】促進基于抗體的交換成像的組合物和方法相關申請的交叉引用本申請要求于2016年6月2日提交的美國臨時申請第62/344,441號的優先權權益，其通過引用整體并入本文以用于任何目的。序列表序列表通過EFS-Web作為ASCII格式的文本文件與本申請同時提交，文件名為“2017-05-11_01168-0006-00PCT_SeqList_ST25.txt”，創建日期為2017年5月11日，并且大小為20,200字節。通過EFS-Web提交的序列表是說明書的一部分并據此通過引用整體并入。說明書
本申請提供了促進基于抗體的交換成像的組合物和方法。
技術介紹
超分辨率成像可用于檢測單個樣品中的多個靶標。以前，針對第一靶標的第一抗體用于標記樣品中的第一靶標，對所述標記成像，并且在移除或破壞該抗體或其標記之后用針對第二靶標的第二抗體標記樣品，以此類推。然而，這種方法非常耗費人力并且需要用每種抗體進行長時間的單獨孵育。交換成像提供了一些改進以實現多任務能力，以使可以在同一樣品上對多個靶標成像。交換成像可包括以下步驟：(1)分別將不同的可解碼信息攜帶分子(稱為對接部分或DM)附接至不同的靶標識別分子，(2)使用一組分子(稱為成像物部分)(其各自特異性地識別對接部分并攜帶可觀察部分)標記對接部分的亞組，并對相對應的靶標亞組成像，(3)移除步驟2中使用的成像物部分組或使所述成像物部分上的可觀察部分失活，以及(4)使用另一組成像物部分(其各自特異性地識別對接部分并攜帶可觀察部分)標記對接部分的另一亞組，并對相對應的靶標亞組成像，以及(5)任選地，可以重復步驟3和4以可視化多個靶標亞組。交換成像的一個非限制性實例是DNA交換免疫熒光，其中使用抗體作為靶標識別分子以對靶蛋白或其他生物分子成像，DNA寡核苷酸作為對接部分，并且與對接部分互補并用可觀察部分諸如熒光團標記的DNA寡核苷酸作為成像物部分。在步驟3中，可使用高溫、變性劑、DNA解旋酶、DNA酶和/或鏈置換劑移除DNA，或可通過化學裂解、酶促裂解、化學漂白、光漂白、和/或光化學漂白移除對接部分上的可觀察部分，諸如熒光團。在進行DNA交換免疫熒光時，一個實際的挑戰是將對接部分附接至靶標識別抗體(有時稱為一抗)。一種常規且便利雖然有限的方法是利用可以區分不同一抗的全長二抗。例如，在2任務DNA交換免疫熒光中，如果兩種一抗屬于兩種宿主物種(例如，一種來自小鼠，另一種來自兔)，那么可以使用附接至兩個不同的對接部分的兩種預制的二抗(一種抗-小鼠且另一種抗-兔)。類似地，如果抗體屬于不同的同種型(例如，IgG1、IgG2a和IgG2b)，那么可以使用同種型特異性二抗。然而，當多種一抗屬于相同的宿主物種和同種型時，不可再使用這種策略。相反，通常在進行染色之前將對接部分直接附接至靶標識別抗體。盡管存在許多抗體綴合方法(例如，參見GregT.Hermanson,BioconjugateTechniques第3版,第2章和第20章,ISBN:978-0-12-382239-0(2013))，但是由于諸如收率低、需要大量昂貴的一抗(其本質上可能是單克隆抗體)、首要需要高純度、耗費人力或昂貴等原因，大多數方法是不理想的。一抗通常也以包括如白蛋白的載體蛋白的制劑形式出售，并且所述載體蛋白可以干擾某些抗體綴合技術。因此，本領域需要用于將對接部分附接至一抗以用于交換成像的改進方法。
技術實現思路
根據描述，在一些實施方案中，一種用于樣品中的至少兩個靶標的交換成像的方法包括(a)提供至少兩種或更多種靶標識別抗體，其各自與相對應的MTAB-DM試劑結合，所述試劑能夠單價結合靶標識別抗體；(b)將樣品與兩種或更多種靶標識別抗體一起孵育，所述抗體各自與相對應的MTAB-DM試劑結合；(c)順序、分批或并行施加對應于MTAB-DM的至少兩個成像物部分；(d)順序、分批或并行地對至少兩個成像物部分成像。在一些實施方案中，MTAB包括蛋白A、蛋白G、蛋白A/G、蛋白L或單價抗體片段。在一些實施方案中，DM(對接部分)和成像物部分包含核酸。在一些實施方案中，將各自與相對應的MTAB-DM試劑結合的所有靶標識別抗體同時與樣品一起孵育。在一些實施方案中，所有成像物部分順序施加并且成像順序發生。在一些實施方案中，所有成像物部分并行施加并且成像并行發生。在一些實施方案中，成像物部分分批施加，其中至少一批具有兩個或更多個成像物部分，并且該方法具有至少兩個批次，并且其中成像發生在至少兩個批次中。在一些實施方案中，每個成像物部分用不同的可觀察部分標記。在一些實施方案中，每個成像物部分用相同的可觀察部分標記。在一些實施方案中，成像物部分中的一些用相同的可觀察部分標記，并且成像物部分中的一些用不同的可觀察部分標記。在一些實施方案中，在將靶標識別抗體與樣品一起孵育之前，使用過量的MTAB-DM以防止過量的游離靶標識別抗體。在一些實施方案中，在將靶標識別抗體與樣品一起孵育之前，使用超濾或凝膠過濾移除游離的MTAB-DM。在一些實施方案中，將非特異性抗體添加至染色、洗滌和/或成像緩沖液中。在一些實施方案中，非特異性抗體是來自與靶標識別抗體相同的宿主物種的抗體。在一些實施方案中，非特異性抗體是存在于正常血清(來自未用任何靶蛋白免疫的動物)中的多克隆抗體。在一些實施方案中，非特異性抗體是針對樣品中不存在的蛋白質的單克隆抗體。在一些實施方案中，成像物部分直接結合對接部分。在一些實施方案中，成像物部分通過中間部分間接結合對接部分。在一些實施方案中，一種組合物包含：(a)MTAB；(b)與MTAB共價結合的對接部分；(c)具有第一結構域和第二結構域的中間部分，其中第一結構域能夠特異性結合對接部分并且其中第二結構域不能特異性結合對接部分。在一些實施方案中，MTAB為蛋白A、蛋白G、蛋白A/G、蛋白L或單價抗體片段。在一些實施方案中，對接部分和中間部分包含核酸。在一些實施方案中，對接部分長約5至20個核酸、約8至15個核酸，或長約10至12個核酸。在一些實施方案中，中間部分長約10至40個核酸、約16至30個核酸，或長約20至24個核酸。在一些實施方案中，一種制備用于交換成像的試劑的方法包括：(a)提供MTAB；(b)將MTAB綴合于對接部分以形成MTAB-DM；(c)提供多個中間部分，其各自具有能夠特異性結合對接部分的第一結構域和不能特異性結合對接部分的第二結構域；(d)將多個中間部分與MTAB-DM配混。在一些實施方案中，MTAB為蛋白A、蛋白G、蛋白A/G、蛋白L或單價抗體片段。在一些實施方案中，對接部分和中間部分包含核酸。在一些實施方案中，對接部分長約5至20個核酸、約8至15個核酸，或長約10至12個核酸。在一些實施方案中，中間部分長約10至40個核酸、約16至30個核酸，或長約20至24個核酸。在一些實施方案中，多個中間部分在分批反應中與MTAB-DM配混。在一些實施方案中，多個中間部分與MTAB-DM單獨配混。在一些實施方案中，一種用于樣品中的至少兩個靶標的交換成像的試劑盒包括：(a)至少兩種不同的MTAB-DM試劑，其包括MTAB和能夠特異性結合成像物部分的對接部分；(b)任選地至少兩種不同的靶標識別抗體；(c)至少兩個成像物部分本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種用于樣品中的至少兩個靶標的交換成像的方法，包括：a.提供至少兩種或更多種靶標識別抗體，其各自與相對應的MTAB?DM試劑結合，所述試劑能夠單價結合所述靶標識別抗體b.將樣品與所述兩種或更多種靶標識別抗體一起孵育，所述抗體各自與相對應的MTAB?DM試劑結合，c.順序、分批或并行施加與所述MTAB?DM相對應的至少兩個成像物部分，d.順序、分批或并行地對所述至少兩個成像物部分成像。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2016.06.02 US 62/344,4411.一種用于樣品中的至少兩個靶標的交換成像的方法，包括：a.提供至少兩種或更多種靶標識別抗體，其各自與相對應的MTAB-DM試劑結合，所述試劑能夠單價結合所述靶標識別抗體b.將樣品與所述兩種或更多種靶標識別抗體一起孵育，所述抗體各自與相對應的MTAB-DM試劑結合，c.順序、分批或并行施加與所述MTAB-DM相對應的至少兩個成像物部分，d.順序、分批或并行地對所述至少兩個成像物部分成像。2.根據權利要求1所述的方法，其中所述MTAB包括蛋白A、蛋白G、蛋白A/G、蛋白L或單價抗體片段。3.根據權利要求1所述的方法，其中將各自與相對應的MTAB-DM試劑結合的所有所述靶標識別抗體同時與所述樣品一起孵育。4.根據權利要求1所述的方法，其中所述成像物部分分批施加，其中至少一批具有兩個或更多個成像物部分，并且所述方法具有至少兩個批次，并且其中所述成像發生在至少兩個批次中。5.根據權利要求1所述的方法，其中在將所述靶標識別抗體與所述樣品一起孵育之前，使用過量的MTAB-DM以防止過量的游離靶標識別抗體。6.根據權利要求1所述的方法，其中在將所述靶標識別抗體與所述樣品一起孵育之前，使用超濾或凝膠過濾移除游離的MTAB-DM。7.根據權利要求1所述的方法，其中將非特異性抗體添加至染色、洗滌和/或成像緩沖液中。8.根據權利要求7所述的方法，其中所述非特異性抗體是來自與所述靶標識別抗體相同的宿主物種的抗體。9.根據權利要求8所述的方法，其中所述非特異性抗體是存在于正常血清(來自未用任何靶蛋白免疫的動物)中的多克隆抗體。10.根據權利要求8所述的方法，其中所述非特異性抗體是針對所述樣品中不存在的蛋白質的單...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳曦，
申請(專利權)人：烏爾蒂維尤股份有限公司，
類型：發明
國別省市：美國,US