一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法技術(shù)

一種從靈芝中提取靈芝三萜酸和靈芝多糖的方法,包括：（1）原材料預(yù)處理：將粉碎后的靈芝子實體放于氫氧化鈉?水溶液浸提，經(jīng)過超聲處理后過濾，得到過濾物和浸提液；（2）調(diào)節(jié)pH：調(diào)節(jié)所述浸提液的pH為2.0~4.5；（3）動態(tài)回流吸附：將步驟B中得到的提取液進行動態(tài)回流吸附，吸附完成后，收集流出液Ⅰ；（4）分段洗脫：洗脫過程分為四階段，合并收集前三階段洗脫液Ⅱ，收集第四階段洗脫液Ⅲ，洗脫液Ⅲ為靈芝三萜提取液；5.合并流出液Ⅰ、洗脫液Ⅱ，加入乙醇進行醇沉后進行過濾、烘干、粉碎后得到靈芝粗多糖。本發(fā)明專利技術(shù)有效提高了靈芝三萜酸和靈芝多糖的提取率和靈芝三萜的純度，且提取方案易于實施，提取的產(chǎn)品安全有效。

A method for extracting triterpenoids and polysaccharides from Ganoderma lucidum

A method for extracting Ganoderma lucidum triterpenoid acid and Ganoderma lucidum polysaccharide from Ganoderma lucidum includes: (1) raw material pretreatment: extracting the crushed Ganoderma lucidum fruiting body in sodium hydroxide aqueous solution, filtering after ultrasonic treatment, and obtaining filtrate and extract; (2) adjusting pH: adjusting the pH of the extract to 2.0-4.5; (3) dynamic reflux adsorption: adding the extract obtained in step B. After dynamic reflux adsorption, the effluent I was collected; (4) sectional elution: the elution process was divided into four stages, the first three stages of elution II were combined, the fourth stage of elution III was collected, and the third stage of elution III was triterpene extract of Ganoderma lucidum; (5) combined effluent I and eluent II were added to ethanol for alcohol precipitation and then filtered, dried and crushed to obtain Ganoderma lucidum polysaccharide. The invention effectively improves the extraction rate of Ganoderma lucidum triterpene acid and Ganoderma lucidum polysaccharide and the purity of Ganoderma lucidum triterpene, and the extraction scheme is easy to implement, and the extracted product is safe and effective.

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法
本專利技術(shù)屬于植物有效成分提取方法
，具體涉及一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法。
技術(shù)介紹
靈芝為層菌綱非褶菌目靈芝菌科靈芝屬真菌的總稱；習(xí)慣所稱靈芝是指靈芝屬中赤芝的子實體部分，靈芝始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代醫(yī)書將其列為上品，具有補中益血、滋陰強壯、扶正固本、延年益壽等功效，靈芝是《中國藥典》收錄的一種中藥材，是食藥兼用的一種真菌，靈芝中的多糖、三萜、核苷、生物堿、氨基酸多肽、微量元素等成分是其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，其中主要成分之一是三萜類化合物；該類化合物有較高的脂溶性，分子量一般為400~600，化學(xué)結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，目前已知有7種不同的母核結(jié)構(gòu)，在母核上有多個不同的取代基，常見有羧基、羥基、酮基、甲基、乙酰基和甲氧基等。由于化學(xué)結(jié)構(gòu)的多樣性，使三萜類化合物又較廣泛的藥理活性，如ganodericacidβ，ganolucidicacidA和lucidumolB等可明顯抑制HIV-1蛋白酶活性；ganodermicacidS可明顯抑制血小板的聚集；lucidenicacidO和lucideniclactone可抑制真核細胞DNA多聚酶活性等，具有保肝、抗腫瘤、抗HIV-I及HIV-I蛋白酶活性、抗組織胺釋放、抑制血管緊張素、抗氧化等作用。人體腫瘤細胞60%為增殖細胞，是腫瘤發(fā)展、長大、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，對人體危害極大，但對化療敏感，易殺滅；40%為GO細胞，又叫休眠期細胞，不分裂，不生長，但對放化療不敏感，難以被化療等藥物殺死。當某些因素使增殖期細胞大量死亡時（如化療時），GO期腫瘤細胞即可進入增殖周期，成為腫瘤復(fù)發(fā)的根源。靈芝三萜最大的特點表現(xiàn)為可激活化療藥物難以殺死的GO期腫瘤細胞，驅(qū)使其進入細胞生長期，然后聯(lián)合化療或單獨毒殺它，防止其結(jié)束休眠期后大量繁殖和轉(zhuǎn)移，靈芝三萜對GO期細胞的獨特作用彌補了傳統(tǒng)腫瘤治療（手術(shù)、放療、化療）的不足，成為腫瘤免疫治療中的主力軍。20世紀80年代，國內(nèi)外研究者開始深入研究靈芝化學(xué)成分，并取得一定的成效，迄今為止，已成功分離出200多種化合物，并進行了分子結(jié)構(gòu)鑒定；但是這些工作都是在實驗室進行的，得到的化合物量非常少，極大影響靈芝三萜的開發(fā)與利用，因此，研究三萜化合物的提取純化的產(chǎn)業(yè)化工藝技術(shù)具有重要的理論意義和實踐意義。目前工業(yè)常用的提取方法有水提法、醇提法、超聲處理法、樹脂吸附法等。傳統(tǒng)的醇提法通常需要消耗大量的提取溶劑，大量的有機溶劑的使用會給人體和環(huán)境帶來不利的影響。專利號為CN1560072A的專利公開了一種從靈芝中制備靈芝三萜和靈芝多糖的方法，將干燥的靈芝實體破碎后采用超臨界CO2提取技術(shù)提取靈芝三萜，然后使用低溫提取和快速濃縮技術(shù)獲得靈芝多糖，但是采用超臨界CO2提取技術(shù)所需的設(shè)備投入較大，操作難度高，生產(chǎn)成本高昂。靈芝子實體區(qū)別于其它菌類相比，實體木質(zhì)化程度高，結(jié)構(gòu)復(fù)雜緊密，而三萜和靈芝多糖分布在細胞內(nèi)側(cè)，通過傳統(tǒng)的提取方法提取率低，大部分活性成分都滯留在殘渣內(nèi)，造成資源浪費。專利號為CN105294875B的專利公開了一種從靈芝子實體中提取靈芝多糖的方法，將靈芝子實體粉碎后通過與亞氯酸鈉-冰醋酸的氧化體系反應(yīng)，將組成細胞壁的纖維素和木質(zhì)素消解斷裂，使更多的活性物質(zhì)釋放出來，大大提高了多糖的提取效率，但是靈芝三萜與多糖多用于醫(yī)藥保健用途，亞氯酸鈉具有強致癌性，用該方法提取產(chǎn)品易產(chǎn)生安全隱患。
技術(shù)實現(xiàn)思路
針對上述存在的問題，本專利技術(shù)的目的是提供一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法，通過采用氫氧化鈉-水溶液進行預(yù)處理，動態(tài)回流吸附的手段，有效提高了靈芝三萜和靈芝多糖的提取率，且提取方案易于實施，提取的產(chǎn)品安全有效。為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下：一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法，主要包括以下步驟：A.原材料預(yù)處理：對靈芝子實體進行干燥、粉碎后，將粉碎后的靈芝子實體放于0.2~1.0wt%的氫氧化鈉-水溶液中于50~75℃條件下浸提，經(jīng)過超聲處理后過濾，得到過濾物和浸提液；B.調(diào)節(jié)pH：用高純鹽酸調(diào)節(jié)所述浸提液的pH為2.0~4.5；C.動態(tài)回流吸附：將步驟B中得到的提取液進行動態(tài)回流吸附，吸附完成后，收集流出液Ⅰ；D.分段洗脫：洗脫過程分為四階段第一階段洗脫液為水，第二階段洗脫液為10~20%乙醇（v/v），第三階段洗脫液為30~40%乙醇（v/v），第四階段洗脫液為90~95%乙醇（v/v），合并收集前三階段洗脫液Ⅱ，收集第四階段洗脫液Ⅲ，洗脫液Ⅲ為靈芝三萜提取液；E.合并流出液Ⅰ、洗脫液Ⅱ，加入95%的乙醇（v/v）進行醇沉后進行過濾、烘干、粉碎后得到靈芝粗多糖。在原料預(yù)處理步驟中，靈芝子實體木質(zhì)化程度高，結(jié)構(gòu)復(fù)雜緊密，而三萜和靈芝多糖分布在細胞內(nèi)側(cè)，活性成分難以提取出來，采用氫氧化鈉-水溶液體系對靈芝子實體進行堿處理，可以削弱纖維素和半纖維素間的氫鍵及皂化半纖維素和木質(zhì)素間的酯鍵，使木質(zhì)素和纖維素具有更多更大的孔性，使活性成分易于提取；三萜酸類易溶于熱水，加熱利于提取；超聲處理也可進一步加強提取效果；因此，采用該方法可大大提高靈芝三萜和靈芝多糖的提取量。調(diào)節(jié)pH采用的是高純鹽酸，高純鹽酸是一種經(jīng)過提純后，酸度大于95%的液體，可用于精細度高的食品、醫(yī)藥加工方面來調(diào)節(jié)水流pH，本專利技術(shù)中酸性條件有利于吸附過程中弱酸性的靈芝三萜的吸附，提高靈芝三萜的吸附率；另一方面，高純鹽酸也可中和預(yù)處理過程中多余的氫氧化鈉，使得到的產(chǎn)品雜質(zhì)更少，減少提取中所用試劑對產(chǎn)品的影響。動態(tài)回流吸附可增大提取液與吸附柱的接觸面積，提高吸附柱對有效成分的吸附率，從而提高提取效率。優(yōu)選地，步驟A中，對靈芝子實體進行超微粉碎，本專利技術(shù)中對靈芝子實體進行超微粉碎，更有利于其與氫氧化鈉-水溶液體系反應(yīng)，進而更有效地使靈芝子實體中的纖維素和木質(zhì)素產(chǎn)生更多的通孔，使更多的活性成分釋放出來，最大化地提高提取效率。優(yōu)選地，步驟A中，所述靈芝子實體與氫氧化鈉-水溶液的重量比為1:20~30。優(yōu)選地，步驟A中，所述超聲處理條件為：功率100~250w，時間20~30min。優(yōu)選地，步驟C中，所述動態(tài)回流吸附中所用吸附柱為大孔樹脂AB-8吸附柱；大孔樹脂具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高，吸附選擇性強，富集效果好，解吸條件溫和，再生簡便，使用周期長等優(yōu)點，采用大孔樹脂吸附植物有效成分的技術(shù)已有報道；而AB-8為弱極性吸附樹脂，對弱極性的靈芝三萜吸附能力強，且AB-8針對靈芝子提取液具有合適的比表面積，比表面積過大會吸附雜質(zhì)，使雜質(zhì)占據(jù)了較多的吸附位點，不利于有效成分的吸附，比表面積過小使得有效成分易被解吸，有效成分易流失。采用分段洗脫的方法可有效提高靈芝三萜的提取純度，對于本專利技術(shù)中使用的AB-8樹脂，前三階段用水和較低體積分數(shù)10~20%、30~40%的乙醇溶液洗脫后，可以先將雜質(zhì)洗脫下來，而靈芝三萜不會被解吸，第四階段采用高濃度90~95%的乙醇可將靈芝三萜全部解吸下來，以此可大大提高洗脫液中靈芝三萜的純度。進一步地，大孔樹脂吸附柱在使用前需進行預(yù)處理，所述預(yù)處理步驟為：（1）將大孔樹脂用乙醇浸泡24~36h后，用水洗滌至無醇味；（2）用5%HCl溶液浸泡2~4h后用水洗滌至中性；（3）用2%NaOH溶液浸泡2~4h后用水洗滌至中性備用。優(yōu)選地本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
1.一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法，主要包括以下步驟：原材料預(yù)處理：對靈芝子實體進行干燥、粉碎后，將粉碎后的靈芝子實體放于0.2~1.0wt%的氫氧化鈉?水溶液中于50~75℃條件下浸提，經(jīng)過超聲處理后過濾，得到過濾物和浸提液；調(diào)節(jié)pH：用高純鹽酸調(diào)節(jié)所述浸提液的pH為2.0~4.5；動態(tài)回流吸附：將步驟B中得到的提取液進行動態(tài)回流吸附，吸附完成后，收集流出液Ⅰ；分段洗脫：洗脫過程分為四階段，第一階段洗脫液為水，第二階段洗脫液為10~20%乙醇（v/v），第三階段洗脫液為30~40%乙醇（v/v），第四階段洗脫液為90~95%乙醇（v/v），合并收集前三階段洗脫液Ⅱ，收集第四階段洗脫液Ⅲ，洗脫液Ⅲ為靈芝三萜提取液；合并流出液Ⅰ、洗脫液Ⅱ，加入95%的乙醇（v/v）的乙醇進行醇沉后進行過濾、烘干、粉碎后得到靈芝粗多糖。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法，主要包括以下步驟：原材料預(yù)處理：對靈芝子實體進行干燥、粉碎后，將粉碎后的靈芝子實體放于0.2~1.0wt%的氫氧化鈉-水溶液中于50~75℃條件下浸提，經(jīng)過超聲處理后過濾，得到過濾物和浸提液；調(diào)節(jié)pH：用高純鹽酸調(diào)節(jié)所述浸提液的pH為2.0~4.5；動態(tài)回流吸附：將步驟B中得到的提取液進行動態(tài)回流吸附，吸附完成后，收集流出液Ⅰ；分段洗脫：洗脫過程分為四階段，第一階段洗脫液為水，第二階段洗脫液為10~20%乙醇（v/v），第三階段洗脫液為30~40%乙醇（v/v），第四階段洗脫液為90~95%乙醇（v/v），合并收集前三階段洗脫液Ⅱ，收集第四階段洗脫液Ⅲ，洗脫液Ⅲ為靈芝三萜提取液；合并流出液Ⅰ、洗脫液Ⅱ，加入95%的乙醇（v/v）的乙醇進行醇沉后進行過濾、烘干、粉碎后得到靈芝粗多糖。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法，其特征在于，步驟A中，對靈芝子實體進行超微粉碎。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從靈芝中提取靈芝三萜和靈芝多糖的方法，其特征在于，步驟A中，所述靈芝子實體與氫氧化鈉-水溶液的重量比為1:20~30。4...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：柳秦橋，
申請(專利權(quán))人：湖州柳蔭生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江,33