本發(fā)明專利技術(shù)屬于醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種紫杉醇膠束制劑的制備工藝。其采用mPEG?PLA?賴氨酸三嵌段共聚物為膠束載體，通過薄膜水化法制備得到紫杉醇膠束，所得到的膠束平均粒徑為20～40nm。本發(fā)明專利技術(shù)的有益效果在于：工藝簡單，可無需添加其他輔料，生產(chǎn)成本低。采用此法制備的紫杉醇膠束制劑的體外穩(wěn)定性較高，在室溫下保持穩(wěn)定的時(shí)間超過12小時(shí)，低溫下穩(wěn)性超過168小時(shí)；血液穩(wěn)定性較高，粒徑較小，更易發(fā)揮ERP效應(yīng)。
Preparation technology and product of a paclitaxel micelle preparation
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種紫杉醇膠束制劑制備工藝及產(chǎn)物
本專利技術(shù)屬于醫(yī)藥制劑
，具體涉及一種紫杉醇膠束制劑的制備工藝以及其產(chǎn)物。
技術(shù)介紹
紫杉醇分子式為：C47H51NO14，分子量853.9，熔點(diǎn)213～216℃，具有高度親脂性，不溶于水，是最先從紅豆杉屬植物中分離得到的一種高效、低毒、廣譜的天然抗癌藥物。它是紅豆杉屬植物中的一種復(fù)雜的天然次生代謝物，分子結(jié)構(gòu)見下式。紫杉醇是一種微管特異性的具有較高抗癌活性的藥物，銷量常年名列抗腫瘤新藥的榜首，并以20％的速度遞增。1977年，HorwitZ發(fā)現(xiàn)紫杉醇抗癌機(jī)理在于能夠與微管蛋白結(jié)合，促進(jìn)微管蛋白聚合裝配成微管二聚體，從而抑制細(xì)胞中微管的正常生理解聚，使細(xì)胞有絲分裂停止在G2期及M期，阻止了癌細(xì)胞的快速繁殖。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)紫杉醇能夠激活巨噬細(xì)胞，導(dǎo)致腫瘤壞死因子受體的減少及其釋放，殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞；紫杉醇可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，引起細(xì)胞程序性死亡；紫杉醇還能抑制腫瘤細(xì)胞的遷移。臨床研究表明，紫杉醇具有廣譜而高效的抗癌活性，對于治療卵巢癌、乳腺癌、子宮癌、胃癌等等療效突出，近來的研究發(fā)現(xiàn)它對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、老年癡呆癥等亦有一定療效。由于紫杉醇難溶于水，在目前的臨床應(yīng)用中通常把紫杉醇溶于聚氧乙烯蓖麻油(cremophorEL)與無水乙醇混合溶媒中以增加其水溶性。但乙醇具有一定的細(xì)胞毒性，而聚氧乙烯蓖麻油在體內(nèi)降解時(shí)釋放組胺，導(dǎo)致不同程度的過敏反應(yīng)，亦可引起神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)顆粒釋放及脫髓鞘改變而加重紫杉醇的外周神經(jīng)毒性。為降低紫杉醇制劑的毒性提高其療效，近年來臨床上陸續(xù)開發(fā)了紫杉醇的新劑型。其中不含聚氧乙烯蓖麻油注射紫杉醇白蛋白納米混懸液(ABI-007)已在國內(nèi)外上市。具有不用抗過敏預(yù)處理、療效較好、毒性較低等特點(diǎn)；現(xiàn)正在國內(nèi)進(jìn)行臨床研究我國研發(fā)的紫杉醇脂質(zhì)體已開始在臨床應(yīng)用而紫杉醇的前體藥物(DHA-PTX)和聚合物劑型genexol-PM及xyotax也正在臨床前和臨床Ⅰ-Ⅲ期研究中，顯示了良好的前景。但近期的研究發(fā)現(xiàn)，無論是由高分子量聚合物形成的粒徑較大的聚合物膠束，還是由低分子量聚合物形成的粒徑較小的聚合物膠束，具有血液穩(wěn)定性較差的缺點(diǎn)，膠束在進(jìn)入血液后幾乎馬上解體并釋放攜帶的藥物，最終兩種膠束攜帶的藥物在體內(nèi)的分布幾乎沒有區(qū)別，沒有展示出ERP效應(yīng)。SavicR等人的研究發(fā)現(xiàn)，紫杉醇膠束進(jìn)入血液后通常在5分鐘內(nèi)就有超過90％的藥物釋放并往組織擴(kuò)散(見Langmuir2006,22:3570-8.《Assessmentoftheintegrityofpoly(caprolactone)-b-poly(ethyleneoxide)micellesunderbiologicalconditions:afluorogenic-basedapproach.》)。這一結(jié)果與設(shè)想由膠束粒子攜帶藥物，到達(dá)腫瘤部位再通過EPR效應(yīng)釋放藥物的理想狀態(tài)相去甚遠(yuǎn)，即非成熟釋放(Prematurerelease)。導(dǎo)至非成熟釋放的原因一方面由于膠束經(jīng)過血液稀釋后的濃度低于其臨界膠束濃度(CMC濃度)導(dǎo)致膠束解體，另一方面血液中大量存在的蛋白質(zhì)會和膠束發(fā)生作用導(dǎo)致其團(tuán)聚并釋放藥物。因此，在設(shè)計(jì)靜脈注射腫瘤靶向納米載體時(shí)必須首先考慮其血液穩(wěn)定性，只有在提高血液穩(wěn)定性的前提下才有望利用EPR效應(yīng)提高藥物的靶向性。現(xiàn)有的紫杉醇膠束的另一個(gè)不足之處在于工藝條件較復(fù)雜，給大規(guī)模工業(yè)化增加了難度。例如，蘭州大學(xué)劉偉生等人專利技術(shù)的紫杉醇-聚合物載藥膠束制備工藝(專利申請?zhí)?01110255867.8)需要采用恒溫振蕩的工藝條件；北京大學(xué)呂萬良等人專利技術(shù)的一種紫杉醇納米膠束及其應(yīng)用(申請?zhí)枺?01110044677.1)在制備過程中需要使用緩沖液保持反應(yīng)環(huán)境的PH值穩(wěn)定。還有的紫杉醇膠束中含有一定量的乙醇，依然具有一定的細(xì)胞毒性。例如山東大學(xué)的李凌冰等人專利技術(shù)了一種紫杉醇混合膠束制劑及其制備方法(專利申請?zhí)?01110139712.8)，但是在其混合膠束中依然含有乙醇。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新型的紫杉醇膠束制備工藝，其以mPEG-PLA-賴氨酸為膠束載體，得到的紫杉醇膠束含微量乙醇，其穩(wěn)定性、平均粒徑等主要指標(biāo)全面優(yōu)于現(xiàn)有的紫杉醇膠束。本專利技術(shù)提供的一種紫杉醇膠束制劑制備工藝，采用新型表面活性劑mPEG-PLA-賴氨酸為膠束載體，采用薄膜水化法制備紫杉醇膠束制劑。所述mPEG-PLA-賴氨酸分子結(jié)構(gòu)式如下：其中，a＝11-455，b＝3-300。本專利技術(shù)中，所述mPEG-PLA-賴氨酸中，聚乙二醇甲醚嵌段的分子量優(yōu)選為1000～3000；聚丙交酯嵌段的分子量優(yōu)選為500～5000。本專利技術(shù)另一目的在于提供根據(jù)所述紫杉醇膠束制劑制備工藝得到的產(chǎn)物，即紫杉醇膠束制劑。所述紫杉醇膠束制劑中殘留的乙醇或乙腈含量少于10ppm，且當(dāng)mPEG-PLA-賴氨酸的平均分子量發(fā)生變化時(shí)，所述紫杉醇膠束制劑的平均粒徑在20～40nm之間。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有以下有益效果：1.制備工藝簡單，膠束制劑中無需添加其他輔料亦能保持所制備紫杉醇膠束制劑良好的性能，降低了生產(chǎn)成本。2.采用本工藝制備的紫杉醇膠束制劑的性能優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)，更易發(fā)揮ERP效應(yīng)。包括體外穩(wěn)定性較高，在室溫下保持穩(wěn)定的時(shí)間超過12小時(shí)，低溫下穩(wěn)性超過168小時(shí)；血液穩(wěn)定性較高，粒穩(wěn)定性較好等。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對本專利技術(shù)做詳細(xì)的說明，本實(shí)施例在以本專利技術(shù)技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本專利技術(shù)的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實(shí)施例(1-7)一種紫杉醇膠束制劑的制備工藝，采用薄膜水化法，其包括下列步驟。①按照紫杉醇與mPEG-PLA-賴氨酸不同的投料比(見表1)稱取原料。其中，原料紫杉醇(CAS33069-62-4)由西安瑞林生物科技有限公司生產(chǎn)，純度大于95％，mPEG-PLA-賴氨酸，由專利技術(shù)人按照專利號PCT-CN-2013000453所述的工藝自行制備；②將上述原料投入容器中，加入乙醇或乙腈等有機(jī)溶劑至完全溶解。30-50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2h至有機(jī)溶劑蒸干為止，10-60℃下真空干燥＞12h去除殘留的有機(jī)溶劑，得到含紫杉醇的聚合物混合膜。③所述混合膜于40-60℃水浴至透明狀，加入相同溫度預(yù)熱的超純水或生理鹽水、磷酸鹽緩沖液，充分振搖水化，得透明的載藥膠束溶液。④將所述載藥膠束溶液用0.45μm微孔濾膜過濾，即得到紫杉醇膠束制劑。實(shí)施例1-7分別選擇不同的投料比，以及分別選用不同嵌段分子量的mPEG-PLA-賴氨酸，按照上述步驟制得紫杉醇膠束制劑。用高效液相色譜法測定載藥量。用動(dòng)態(tài)光散射測定粒徑，測得粒徑分布在10-100nm之間，平均粒徑在20-40nm之間(見表1)。表1：不同實(shí)施例的載藥量以及粒徑載體＝mPEG-PLA-賴氨酸膠束溶液穩(wěn)定性的測定方法是，將載藥膠束溶液用無菌水稀釋，得到紫杉醇濃度約為3mg/ml的溶液，在無菌環(huán)境下轉(zhuǎn)移到安瓿瓶內(nèi)并密封。分別于4℃、15℃、25℃，正常室內(nèi)光照條件下，每隔2h肉眼觀察安瓿瓶內(nèi)的溶液是否有沉淀或渾濁產(chǎn)生。如果有沉淀或者渾濁產(chǎn)生，則說明溶液結(jié)束了穩(wěn)定狀態(tài)。結(jié)果見表2。紫杉醇注射液極不本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種紫杉醇膠束制劑制備工藝，其特征在于，包含以下步驟：①按照紫杉醇與mPEG?PLA?賴氨酸不同的投料比稱取原料；②將上述原料投入容器中，加入有機(jī)溶劑至完全溶解。30?50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2h至有機(jī)溶劑蒸干為止，10?60℃下真空干燥＞12h去除殘留的有機(jī)溶劑，得到含紫杉醇的聚合物混合膜；③所述混合膜于40?60℃水浴至透明狀，加入相同溫度預(yù)熱的超純水或生理鹽水、磷酸鹽緩沖液，充分振搖水化，得透明的載藥膠束溶液；④所述載藥膠束溶液用0.45μm微孔濾膜過濾，得到紫杉醇膠束制劑。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種紫杉醇膠束制劑制備工藝，其特征在于，包含以下步驟：①按照紫杉醇與mPEG-PLA-賴氨酸不同的投料比稱取原料；②將上述原料投入容器中，加入有機(jī)溶劑至完全溶解。30-50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2h至有機(jī)溶劑蒸干為止，10-60℃下真空干燥＞12h去除殘留的有機(jī)溶劑，得到含紫杉醇的聚合物混合膜；③所述混合膜于40-60℃水浴至透明狀，加入相同溫度預(yù)熱的超純水或生理鹽水、磷酸鹽緩沖液，充分振搖水化，得透明的載藥膠束溶液；④所述載藥膠束溶液用0.45μm微孔濾膜過濾，得到紫杉醇膠束制劑。2.如權(quán)利要求1所述的紫杉醇膠束制劑制備工藝，其特征在于：所述的mPEG-PLA-賴氨酸分子...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：顧曉軍，滕鑫，
申請(專利權(quán))人：上海珀理玫化學(xué)科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：上海,31
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