靶向PD-1、TIM-3及LAG-3的組合療法制造技術

本公開內容涉及在需要提高免疫力的患者中使用對PD?1、TIM?3、及LAG?3中的兩種或全部特異性的抗體靶向這些靶物的組合療法。本公開內容中也包括可用于療法中的組合物。療法可用于治療諸如癌癥的疾病。

Combination therapy targeting PD-1, Tim-3 and LAG-3

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】靶向PD-1、TIM-3及LAG-3的組合療法對相關申請的交叉引用本申請要求于2017年4月5日提交的美國臨時專利申請62/481,973的優先權，其公開內容以其全文以引用方式納入本文中。序列表本申請含有序列表，其已以ASCII格式電子提交且特此以其全文以引用方式納入。此序列表的電子副本(于2018年3月23日創建)命名為022675_WO058_SL.txt且大小為232,360字節。專利技術背景PD-1(也稱為程序性細胞死亡蛋白質1及CD279)是268個氨基酸的細胞表面受體，其屬于免疫球蛋白超家族。PD-1是T細胞調節子的CD28家族成員并且在T細胞、B細胞及巨噬細胞上表達。其結合配體PD-L1(也稱為B7同源物)及PD-L2(也稱為B7-DC)。PD-1是I型膜蛋白，其結構包括胞外IgV域、跨膜區及含有二個磷酸化位點的胞內尾部。以免疫檢查點蛋白為人所知，PD-1起可誘發性免疫調節受體的作用，在(例如)對抗原刺激的T細胞應答的負調節中起作用。PD-L1是PD-1的主導配體。PD-L1與PD-1的結合抑制T細胞活性、降低細胞因子生成及抑制T細胞增殖。表達PD-L1的癌細胞能夠利用此機制以通過PD-L1與PD-1受體的結合使T細胞的抗腫瘤活性失活。鑒于其免疫應答調節特性，已在作為免疫療法(包括癌癥及自體免疫疾病的治療)的潛在目標方面調查PD-1。2種抗PD-1抗體(派姆單抗(pembrolizumab)及納武單抗(nivolumab))已于美國及歐洲被核準用于治療某些癌癥。其他免疫檢查點蛋白包括TIM-3(T細胞免疫球蛋白及含粘蛋白域3)及LAG-3(淋巴細胞活化基因3)。TIM-3(也稱為HAVCR2(A型肝炎病毒細胞受體2)或CD366)是T細胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白家族的成員。TIM-3在人類中由Havcr2基因編碼并且是具有膜遠側IgV域及膜近側粘蛋白域的33kDaI型糖蛋白。其在胞內域中含有五個Tyr殘基的保守區，其在配體結合后隨即被磷酸化。TIM-3由許多源自免疫系統的適應性及先天性部分兩者的不同細胞(包括T細胞、樹突細胞、巨噬細胞、及自然殺傷(NK)細胞)表達。TIM-3表達在初始T細胞上是低的，但在T細胞活化后隨即變得被高度上調。與T細胞相反，先天細胞(諸如樹突細胞、NK細胞及單核細胞)具有高的基礎TIM-3表達。已將TIM-3與數種(大部分為雜亂的)配體(包括半乳凝素(galectin)-9、磷脂酰絲氨酸、CEACAM-1及HMGB-1)聯系在一起，但這些配體的確切作用目前是未知的。雖然TIM-3已被暗示為檢查點抑制劑，僅有相對稀少的證據可支持以下概念：TIM-3以類似于(例如)PD-1的方式直接介導T細胞活化或細胞因子分泌的抑制。此外，且與PD-1相反，TIM-3似乎在先天系統的細胞(且特別是樹突細胞)的調節中起作用。大多數與TIM-3及其在腫瘤免疫學中的作用有關的功能性數據來自使用各種抗體的體內研究。在這些研究的大多數中，由于差的抗體驗證，不清楚TIM-3抗體的效果是由配體結合的抑制還是由對靶標的激動性效果介導。鑒于其免疫應答調節特性，已作為免疫療法(包括癌癥及自體免疫疾病的治療)的潛在目標方面調查TIM-3。單一的抗TIM-3抗體目前正于臨床開發，但目前沒有核準的抗TIM-3抗體。LAG-3(也稱為CD223)是免疫球蛋白超家族蛋白質，其起免疫檢查點受體的功能。成熟蛋白質是具有四個胞外Ig樣域的503個氨基酸的I型跨膜蛋白。其在各種類型的細胞(包括經活化的T細胞、T調節性(Treg)細胞、自然殺傷細胞、B細胞及類漿細胞樹突細胞)上表達。關于LAG-3的序列數據、外顯子/內含子組織、及染色體位置的信息指出其與CD4密切相關。與CD4類似，LAG-3結合II型MHC分子，雖然相較于CD4以更高的親和力且在不同的位點結合。LAG-3是被認為以類似于CTLA-4及PD-1的方式調節T細胞增殖、活化及穩態的共抑制性受體。在配體結合胞外域后，LAG-3通過經由細胞質域的隨后信號傳導發揮其效果。充分表征的LAG-3配體是II型MHC(MHCII)，但其他LAG-3配體已被描述，包括LSECtin。LAG-3不具有典型的ITIM或ITSM模體，但具有被認為對于完成其對T細胞活性的抑制效果必需的保守性KIEELE模體(SEQIDNO:397)。對于LAG-3用以影響T細胞活性的確實機制了解很差。LAG-3藉由阻斷經活化的T細胞進入細胞周期的生長期而造成細胞累積于S期來抑制T細胞擴增。LAG-3亦被認為在提高調節性T細胞的抑制活性及調節樹突細胞功能中起作用。癌細胞具有上調MHCII(其結合效應T細胞上的LAG-3)的表達，因此抑制其活性并且誘發腫瘤免疫逃脫的能力。鑒于PD-1、LAG-3、及TIM-3作為免疫調節子的關鍵性作用，對于靶向這些受體以治療癌癥及某些免疫系統病癥的新穎且改善的組合療法存在有需求。專利技術概述本專利技術基于以下發現：當抗PD-1抗體(諸如本文中描述的那些抗體)組合抗TIM-3抗體和/或抗LAG-3抗體使用時，抗體的免疫力提高效力顯著增加。本專利技術人已發現：本專利技術的組合療法在藉由活化人類患者自身的抗癌癥免疫力在患者中治療癌癥中特別有效。相較于目前可得的用于癌癥的治療(包括抗體治療)，設想到本專利技術的組合療法可提供優越的臨床響應。因此，本專利技術提供了在有需要的人類患者(諸如癌癥患者)中提高免疫力的方法，其藉由對所述患者施用：(1)抗PD-1抗體、或其抗原結合部分，其與選自下組的抗體競爭對人類PD-1的結合或與選自下組的抗體結合人類PD-1的相同表位：12819.15384、12748.15381、12748.16124、12865.15377、12892.15378、12796.15376、12777.15382、12760.15375及13112.15380；及(2)抗TIM-3抗體或其抗原結合部分和/或抗LAG-3抗體或其抗原結合部分進行。在某些實施方案中，方法包含施用該抗PD-1抗體或其抗原結合部分、抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、及抗LAG-3抗體或其抗原結合部分。在一些實施方案中，抗PD-1抗體結合包含以下項的人類PD-1的表位：a)SEQIDNO:388的殘基V64、L128、P130、K131、及A132；b)SEQIDNO:388的殘基V44及T145；c)SEQIDNO:388的殘基K131及E136；或d)SEQIDNO:388的殘基V44及T145。在一些實施方案中，抗PD-1抗體結合包含以下項的人類PD-1的表位：a)SEQIDNO:388的殘基56-64、69-90、及122-140；b)SEQIDNO:388的殘基69-90及122-140；c)SEQIDNO:388的殘基69-75；d)SEQIDNO:388的殘基136-140；或e)SEQIDNO:388的殘基69-75及136-140。在一些實施方案中，抗PD-1抗體具本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.在有需要的人類患者中提高免疫力的方法，其包含對所述患者施用/n抗PD-1抗體或其抗原結合部分，其與選自下組的抗體競爭對人類PD-1的結合或與選自下組的抗體結合人類PD-1的相同表位：12819.15384、12748.15381、12748.16124、12865.15377、12892.15378、12796.15376、12777.15382、12760.15375及13112.15380；及/n抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、或抗LAG-3抗體或其抗原結合部分。/n

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】20170405 US 62/481,9731.在有需要的人類患者中提高免疫力的方法，其包含對所述患者施用
抗PD-1抗體或其抗原結合部分，其與選自下組的抗體競爭對人類PD-1的結合或與選自下組的抗體結合人類PD-1的相同表位：12819.15384、12748.15381、12748.16124、12865.15377、12892.15378、12796.15376、12777.15382、12760.15375及13112.15380；及
抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、或抗LAG-3抗體或其抗原結合部分。


2.權利要求1的方法，其中所述方法包含施用所述抗PD-1抗體或其抗原結合部分、所述抗TIM-3抗體或其抗原結合部分、及所述抗LAG-3抗體或其抗原結合部分。


3.權利要求1或2的方法，其中所述抗PD-1抗體結合包含以下項的人類PD-1的表位：
a)SEQIDNO:388的殘基V64、L128、P130、K131、及A132；
b)SEQIDNO:388的殘基V44及T145；
c)SEQIDNO:388的殘基K131及E136；或
d)SEQIDNO:388的殘基V44及T145。


4.權利要求1或2的方法，其中所述抗PD-1抗體結合包含以下項的人類PD-1的表位：
a)SEQIDNO:388的殘基56-64、69-90、及122-140；
b)SEQIDNO:388的殘基69-90及122-140；
c)SEQIDNO:388的殘基69-75；
d)SEQIDNO:388的殘基136-140；或
e)SEQIDNO:388的殘基69-75及136-140。


5.權利要求1-4中任一項的方法，其中所述抗PD-1抗體具有以下特性中至少一種：
a)以750pM或更低的KD結合人類PD-1；
b)以7nM或更低的KD結合食蟹猴PD-1；
c)以1nM或更低的KD結合小鼠PD-1；
d)不結合大鼠PD-1；
e)在葡萄球菌腸毒素B(SEB)全血測定法中增加IL-2分泌；
f)在單向混合淋巴細胞反應測定法中增加IFN-γ分泌；
g)在流式細胞術競爭測定法中于10μg/mL的濃度抑制PD-1與PD-L1的相互作用達至少60％；
h)以生物薄膜(Bio-Layer)干涉測量法分析測定，于10μg/mL的濃度阻斷PD-L1及PD-L2與PD-1的結合達至少90％；及
i)體內抑制腫瘤生長。


6.權利要求1-5中任一項的方法，其中所述抗PD-1抗體的重鏈互補決定區(H-CDR)1-3及輕鏈互補決定區(L-CDR)1-3包含以下的氨基酸序列：
a)分別為SEQIDNO:228-233；
b)分別為SEQIDNO:238-243；
c)分別為SEQIDNO:248-253；
d)分別為SEQIDNO:258-263；
e)分別為SEQIDNO:268-273；
f)分別為SEQIDNO:278-283；
g)分別為SEQIDNO:288-293；或
h)分別為SEQIDNO:298-303。


7.權利要求6的方法，其中所述抗PD-1抗體的重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)包含以下的氨基酸序列：
a)分別為SEQIDNO:226及227；
b)分別為SEQIDNO:236及237；
c)分別為SEQIDNO:236及392；
d)分別為SEQIDNO:246及247；
e)分別為SEQIDNO:256及257；
f)分別為SEQIDNO:266及267；
g)分別為SEQIDNO:276及277；
h)分別為SEQIDNO:286及287；或
i)分別為SEQIDNO:296及297。


8.權利要求7的方法，其中所述抗PD-1抗體包含：
a)包含SEQIDNO:226的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的重鏈(HC)、及包含SEQIDNO:227的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的輕鏈(LC)；
b)包含SEQIDNO:236的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:237的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的LC；
c)包含SEQIDNO:236的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:392的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的LC；
d)包含SEQIDNO:246的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:247的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的LC；
e)包含SEQIDNO:256的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:257的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的LC；
f)包含SEQIDNO:266的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:267的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的LC；
g)包含SEQIDNO:276的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:277的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的LC；
h)包含SEQIDNO:286的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:287的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的LC；或
i)包含SEQIDNO:296的氨基酸序列及SEQIDNO:375的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:297的氨基酸序列及SEQIDNO:379的氨基酸序列的LC。


9.前述權利要求中任一項的方法，其中所述抗TIM-3抗體與選自下組的抗體競爭對人類TIM-3的結合或與選自下組的抗體結合人類TIM-3的相同表位：15086.17145、15086.15086、15086.16837、15086.17144、20131、20293、15105、15107、15109、15174、15175、15260、15284、15299、15353、15354、17244、17245、19324、19416、19568、20185、20300、20362、及20621。


10.前述權利要求中任一項的方法，其中所述抗TIM-3抗體結合包含以下項的人類TIM-3的表位：
a)SEQIDNO:389的殘基P50、V60、F61、E62、G64、R69、I117、M118、及D120；
b)SEQIDNO:389的殘基F61、R69、及I117；或
c)SEQIDNO:389的殘基P50、F61、E62、I117、M118、及D120。


11.前述權利要求中任一項的方法，其中所述抗TIM-3抗體結合包含以下項的人類TIM-3的表位：
a)SEQIDNO:389的殘基62-67；或
b)SEQIDNO:389的殘基114-117。


12.前述權利要求中任一項的方法，其中所述抗TIM-3具有以下特性中至少一種：
a)以表面等離振子共振測量，以23nM或更低的KD結合人類TIM-3；
b)以表面等離振子共振測量，以22nM或更低的KD結合食蟹猴TIM-3；
c)以ELISA測量，以1.2nM或更低的EC50結合人類TIM-3；
d)以ELISA測量，以46nM或更低的EC50結合食蟹猴TIM-3；
e)在單向混合淋巴細胞反應測定法中增加IFN-γ分泌；
f)在雙向混合淋巴細胞反應測定法中增加IFN-γ分泌；
g)在單向混合淋巴細胞反應測定法中增加TNF-α分泌；
h)增加來自樹突細胞的TNF-α分泌；及
i)抑制TIM-3與磷脂酰絲氨酸的相互作用。


13.前述權利要求中任一項的方法，其中所述抗TIM-3抗體的H-CDR1-3及L-CDR1-3包含以下的氨基酸序列：
a)分別為SEQIDNO:8-13；
b)分別為SEQIDNO:18-23；
c)分別為SEQIDNO:28-33；
d)分別為SEQIDNO:38-43；
e)分別為SEQIDNO:48-53；
f)分別為SEQIDNO:58-63；
g)分別為SEQIDNO:68-73；
h)分別為SEQIDNO:78-83；
i)分別為SEQIDNO:88-93；
j)分別為SEQIDNO:98-103；
k)分別為SEQIDNO:108-113；
l)分別為SEQIDNO:118-123；
m)分別為SEQIDNO:128-133；
n)分別為SEQIDNO:138-143；
o)分別為SEQIDNO:148-153；
p)分別為SEQIDNO:158-163；
q)分別為SEQIDNO:168-173；
r)分別為SEQIDNO:178-183；
s)分別為SEQIDNO:188-193；
t)分別為SEQIDNO:198-203；
u)分別為SEQIDNO:208-213；或
v)分別為SEQIDNO:218-223。


14.權利要求13的方法，其中所述抗TIM-3抗體的VH及VL包含以下的氨基酸序列：
a)分別為SEQIDNO:7及4；
b)分別為SEQIDNO:3及4；
c)分別為SEQIDNO:16及17；
d)分別為SEQIDNO:26及27；
e)分別為SEQIDNO:36及37；
f)分別為SEQIDNO:46及47；
g)分別為SEQIDNO:56及57；
h)分別為SEQIDNO:66及67；
i)分別為SEQIDNO:76及77；
j)分別為SEQIDNO:86及87；
k)分別為SEQIDNO:96及97；
l)分別為SEQIDNO:106及107；
m)分別為SEQIDNO:116及117；
n)分別為SEQIDNO:126及127；
o)分別為SEQIDNO:136及137；
p)分別為SEQIDNO:146及147；
q)分別為SEQIDNO:156及157；
r)分別為SEQIDNO:166及167；
s)分別為SEQIDNO:176及177；
t)分別為SEQIDNO:186及187；
u)分別為SEQIDNO:196及197；
v)分別為SEQIDNO:206及207；或
w)分別為SEQIDNO:216及217。


15.權利要求14的方法，其中所述抗TIM-3抗體包含：
a)包含SEQIDNO:7的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:4的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
b)包含SEQIDNO:3的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:4的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
c)包含SEQIDNO:16的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:17的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
d)包含SEQIDNO:26的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:27的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
e)包含SEQIDNO:36的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:37的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
f)包含SEQIDNO:46的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:47的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
g)包含SEQIDNO:56的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:57的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
h)包含SEQIDNO:66的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:67的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
i)包含SEQIDNO:76的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:77的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
j)包含SEQIDNO:86的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:87的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
k)包含SEQIDNO:96的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:97的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
l)包含SEQIDNO:106的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:107的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
m)包含SEQIDNO:116的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:117的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
n)包含SEQIDNO:126的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:127的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
o)包含SEQIDNO:136的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:137的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
p)包含SEQIDNO:146的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:147的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
q)包含SEQIDNO:156的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:157的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
r)包含SEQIDNO:166的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:167的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
s)包含SEQIDNO:176的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:177的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
t)包含SEQIDNO:186的氨基酸序列及SEQIDNO:374、375、376、或377的氨基酸序列的HC、及包含SEQIDNO:187的氨基酸序列及SEQIDNO:378的氨基酸序列的LC；
u)包含SEQIDNO:196的氨基...

【專利技術屬性】
技術研發人員：T林德施泰特，MM葛蘭達爾，EMC梅蘭德，C佛利克，MW彼得森，M葛雷，J藍吐，M歌德，ID胡拉克，
申請(專利權)人：西福根有限公司，
類型：發明
國別省市：丹麥;DK