抗PD-L1抗體及其用途制造技術(shù)

提供與PD?L1蛋白或CD137蛋白結(jié)合的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，以及即可與PD?L1蛋白相結(jié)合有可與CD137蛋白結(jié)合的雙特異性抗體。所述的雙特異性抗體對PD?L1蛋白和CD137蛋白的特異性識別能力強，可以增強T細(xì)胞活性。還提供了所述抗體或其抗原結(jié)合片段或變體和所述雙特異性抗體在預(yù)防和治療腫瘤中的應(yīng)用。

Anti PD-L1 antibody and its application

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】抗PD-L1抗體及其用途
本申請涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種抗PD-L1抗體，還涉及其與抗CD137抗體聯(lián)合用藥用于治療癌癥的方法，還涉及其與抗CD137抗體形成的雙特異抗體。
技術(shù)介紹
程序性死亡蛋白-1(programmed?death-1，PD-1，又名CD279)與其配體PD-L1(又名B7-H1，CD274)和PD-L2(又名B7-DC，CD273)共同提供負(fù)性共刺激信號調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化。缺乏共刺激信號時，T細(xì)胞難以感受抗原刺激，不能產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答，還可導(dǎo)致對異源抗原的衰竭或耐受。PD-1可在T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷T細(xì)胞、激活的單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(DCs)上表達。PD-1可由被活化的，但未被刺激的人CD4+和CD8+T細(xì)胞、B細(xì)胞和骨髓細(xì)胞表達。PD-L1和PD-L2在表達模式上有所不同。PD-L1可表達于造血細(xì)胞，也可在多種非造血細(xì)胞表達，而PD-L2的表達主要限于樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。B7.1(CD80)也是PD-L1的受體，它表達于激活的B細(xì)胞，T細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。作為PD-1和B7.1的配體，PD-L1還選擇性表達于多種腫瘤細(xì)胞。抑制PD-L1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，包括阻斷PD-L1與PD-1、B7.1任一或兩者的相互作用，從而阻止PD-L1發(fā)送負(fù)性共刺激信號給T細(xì)胞和其它抗原呈遞細(xì)胞，這可能增強對感染(如急性和慢性)應(yīng)答的免疫以及腫瘤免疫。CD137(又名4-1BB，TNFRSF9等)是腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRS)的一種跨膜蛋白質(zhì)。研究表明CD137激動型單克隆抗體在許多模型中增加共刺激分子表達，并且顯著增強細(xì)胞溶解性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，發(fā)揮抗腫瘤作用。CD137靶向療法的抗腫瘤作用通過利用激動型抗小鼠CD137單克隆抗體的小鼠體內(nèi)抗腫瘤療效研究證實。目前已批準(zhǔn)的PD-L1抗體可用于治療部分癌癥，已有的CD137抗體展示出治療多種腫瘤的潛力。已有報道利用荷瘤小鼠動物模型研究了PD-1抗體和CD137抗體的組合抗腫瘤療效，結(jié)果表明兩種抗體聯(lián)合應(yīng)用顯示出比兩者單用顯著增強的抑瘤活性，但從順應(yīng)性和疼痛的角度給患者帶來不便，并且增加了治療費用。研制這兩種單克隆抗體的雙特異抗體(Bispecific?antibody，BsAb)因其含有兩種特異性抗原結(jié)合位點可解決以上問題。因此，亟待開發(fā)新的抗PD-L1抗體使其具有更加的藥效和更低的免疫原性，以及PD-L1/CD137雙特異性抗體以獲得更好的抗腫瘤效果。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本申請?zhí)峁┝艘环NPD-L1抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，其具有下列性質(zhì)中的一種或多種：1)能夠以較高的親和力和特異性結(jié)合PD-L1蛋白；2)能夠抑制PD-1蛋白與PD-L1蛋白的結(jié)合；3)能夠緩解或治療腫瘤。本申請也提供了一種雙特異性抗體具有下列性質(zhì)中的一種或多種：1)能夠以較高的親和力和特異性結(jié)合PD-L1蛋白；2)能夠以較高的親和力和特異性結(jié)合CD137蛋白；3)能夠增強T細(xì)胞功能；4)能夠緩解或治療腫瘤。本申請還提供了所述PD-L1抗體、其抗原結(jié)合片段或變體、雙特異性抗體的制備方法和應(yīng)用。一方面，本申請?zhí)峁┝艘环N抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，其以3×10-9M或更低的KD與PD-L1蛋白相結(jié)合。在某些實施方式中，所述抗體包含抗體輕鏈或其片段，所述抗體輕鏈或其片段包含LCDR1，且所述LCDR1包含SEQ?ID?NO：53所示的氨基酸序列TGTX1SX2VGGYX3X4VS；其中X1是S、R或V；X2是D、E或S；X3是N或R；X4是Y或E，且其中所述LCDR1根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。在某些實施方式中，所述LCDR1包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：54-58。在某些實施方式中，所述抗體輕鏈或其片段包含LCDR2，且所述LCDR2包含SEQ?ID?NO：59所示的氨基酸序列X1NSX2RPS，其中X1是G或E；X2是N或I，且其中所述LCDR2根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。在某些實施方式中，所述LCDR2包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：60-61。在某些實施方式中，所述抗體輕鏈或其片段包含LCDR3，且所述LCDR3包含SEQ?ID?NO：62所示的氨基酸序列：QSYDSSLSGX1V，其中X1是S或T，且其中所述LCDR3根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。在某些實施方式中，所述抗體輕鏈或其片段還包括框架區(qū)L-FR1，L-FR2，L-FR3，和L-FR4。在某些實施方式中，所述框架區(qū)選自以下組：人共有框架序列和人種系序列。在某些實施方式中，所述L-FR1的C末端與所述LCDR1的N末端直接或間接相連，所述L-FR1包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：71。在某些實施方式中，所述L-FR2位于所述LCDR1與所述LCDR2之間，所述L-FR2包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：72。在某些實施方式中，所述L-FR3位于所述LCDR2與所述LCDR3之間，所述L-FR3包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：73-75。在某些實施方式中，所述L-FR4的N末端與所述LCDR3的C末端直接或間接相連，所述L-FR4包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：76。在某些實施方式中，所述抗體輕鏈或其片段包含輕鏈可變區(qū)VL，且所述輕鏈可變區(qū)VL包含選自以下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：11、SEQ?ID?NO：33、SEQ?ID?NO：37、SEQ?ID?NO：39和SEQ?ID?NO：41。在某些實施方式中，所述抗體輕鏈或其片段還包含人恒定區(qū)，且所述人恒定區(qū)包括人Igλ恒定區(qū)。在某些實施方式中，所述抗體輕鏈或其片段包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：15、SEQ?ID?NO：34、SEQ?ID?NO：38、SEQ?ID?NO：40和SEQ?ID?NO：42。在某些實施方式中，所述抗體包含抗體重鏈或其片段，所述抗體重鏈或其片段包含HCDR1，且所述HCDR1包含選自SEQ?ID?NO：45所示的氨基酸序列：X1YAIS，其中X1是S或T，且其中所述HCDR1根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。在某些實施方式中，所述抗體重鏈或其片段包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ?ID?NO：48所示的氨基酸序列，且其中所述HCDR2根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。在某些實施方式中，所述抗體重鏈或其片段包含HCDR3，且所述HCDR3包含選自SEQ?ID?NO：49所示的氨基酸序列：TMX1X2YX3X4GN-X5DY，其中X1是D、E或G，X2是G或E，X3是S或G，X4是Y或F，X5是F或Y，且其中所述HCDR3根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。在某些實施方式中，所述HCDR3包含選自本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，其以3×10

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】20180409 CN 2018103093025抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，其以3×10
-9M或更低的K
D值與PD-L1蛋白相結(jié)合。



根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體包含抗體輕鏈或其片段，所述抗體輕鏈或其片段包含LCDR1，且所述LCDR1包含SEQ?ID?NO：53所示的氨基酸序列TGTX
1SX
2VGGYX
3X
4VS；其中X
1是S、R或V；X
2是D、E或S；X
3是N或R；X
4是Y或E，且其中所述LCDR1根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。



根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述LCDR1包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：54-58。


根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體輕鏈或其片段包含LCDR2，且所述LCDR2包含SEQ?ID?NO：59所示的氨基酸序列X
1NSX
2RPS，其中X
1是G或E；X
2是N或I，且其中所述LCDR2根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。



根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述LCDR2包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：60-61。


根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體輕鏈或其片段包含LCDR3，且所述LCDR3包含SEQ?ID?NO：62所示的氨基酸序列：QSYDSSLSGX
1V，其中X
1是S或T，且其中所述LCDR3根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。



根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體輕鏈或其片段還包括框架區(qū)L-FR1，L-FR2，L-FR3，和L-FR4。


根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述框架區(qū)選自以下組：人共有框架序列和人種系序列。


根據(jù)權(quán)利要求7-8中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述L-FR1的C末端與所述LCDR1的N末端直接或間接相連，所述L-FR1包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：71。


根據(jù)權(quán)利要求7-9中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述L-FR2位于所述LCDR1與所述LCDR2之間，所述L-FR2包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：72。


根據(jù)權(quán)利要求7-10中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述L-FR3位于所述LCDR2與所述LCDR3之間，所述L-FR3包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：73-75。


根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述L-FR4的N末端與所述LCDR3的C末端直接或間接相連，所述L-FR4包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：76。


根據(jù)權(quán)利要求2-12中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體輕鏈或其片段包含輕鏈可變區(qū)VL，且所述輕鏈可變區(qū)VL包含選自以下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：11、SEQ?ID?NO：33、SEQ?ID?NO：37、SEQ?ID?NO：39和SEQ?ID?NO：41。


根據(jù)權(quán)利要求2-13中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體輕鏈或其片段還包含人恒定區(qū)，且所述人恒定區(qū)包括人Igλ恒定區(qū)。


根據(jù)權(quán)利要求2-14中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體輕鏈或其片段包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：15、SEQ?ID?NO：34、SEQ?ID?NO：38、SEQ?ID?NO：40和SEQ?ID?NO：42。


根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體包含抗體重鏈或其片段，所述抗體重鏈或其片段包含HCDR1，且所述HCDR1包含選自SEQ?ID?NO：45所示的氨基酸序列：X
1YAIS，其中X
1是S或T，且其中所述HCDR1根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。



根據(jù)權(quán)利要求16所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體重鏈或其片段包含HCDR2，所述HCDR2包含SEQ?ID?NO：48所示的氨基酸序列，且其中所述HCDR2根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。


根據(jù)權(quán)利要求16-17中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體重鏈或其片段包含HCDR3，且所述HCDR3包含選自SEQ?ID?NO：49所示的氨基酸序列：TMX
1X
2YX
3X
4GNX
5DY，其中X
1是D、E或G，X
2是G或E，X
3是S或G，X
4是Y或F，X
5是F或Y，且其中所述HCDR3根據(jù)抗體Kabat編號的索引確定。



根據(jù)權(quán)利要求18所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述HCDR3包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：50-52。


根據(jù)權(quán)利要求16-19中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體重鏈或其片段還包括框架區(qū)H-FR1，H-FR2，H-FR3，和H-FR4。


根據(jù)權(quán)利要求20所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述框架區(qū)選自以下組：人共有框架序列和人種系序列。


根據(jù)權(quán)利要求20-21中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述H-FR1的C末端與所述HCDR1的N末端直接或間接相連，所述H-FR1包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：65-67。


根據(jù)權(quán)利要求20-22中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述H-FR2位于所述HCDR1與所述HCDR2之間，所述H-FR2包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：68。


根據(jù)權(quán)利要求20-23中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述H-FR3位于所述HCDR2與所述HCDR3之間，所述H-FR3包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：69。


根據(jù)權(quán)利要求20-24中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述H-FR4的N末端與所述HCDR3的C末端直接或間接相連，所述H-FR4包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：70。


根據(jù)權(quán)利要求16-25中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體重鏈或其片段包含重鏈可變區(qū)VH，且所述重鏈可變區(qū)VH包含選自以下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：9、SEQ?ID?NO：31和SEQ?ID?NO：35。


根據(jù)權(quán)利要求16-26中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體重鏈或其片段還包含人恒定區(qū)，且所述人恒定區(qū)包括人IgG1恒定區(qū)。


根據(jù)權(quán)利要求16-27中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體重鏈或其片段包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：13、SEQ?ID?NO：32和SEQ?ID?NO：36。


根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述PD-L1蛋白選自下組：人PD-L1蛋白和鼠PD-L1蛋白。


抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，其以5×10
-9M或更低的K
D與CD137蛋白相結(jié)合。



根據(jù)權(quán)利要求30所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，其以3×10
-9M或更低的K
D與CD137蛋白相結(jié)合。



根據(jù)權(quán)利要求30-31中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，其可緩解或治療腫瘤。


根據(jù)權(quán)利要求32所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述腫瘤包括結(jié)腸癌。


根據(jù)權(quán)利要求30-33中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體包含抗體輕鏈或其片段。


根據(jù)權(quán)利要求34所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述輕鏈或其片段包含LCDR1-3，所述LCDR1-3的氨基酸序列依次如SEQ?ID?NO：80-82所示。


根據(jù)權(quán)利要求34-35中任一項所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述抗體輕鏈或其片段還包括框架區(qū)L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4。


根據(jù)權(quán)利要求36所述的抗體、其抗原結(jié)合片段或變體，所述框架區(qū)選自以下組：人共有框架序列和人...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李博華，王華菁，何曉文，
申請(專利權(quán))人：上海原能細(xì)胞醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，李博華，
類型：發(fā)明
國別省市：上海;31