一種干細胞培養液的制備方法及應用技術

本發明專利技術公開了一種干細胞培養液的制備方法及應用；人體干細胞培養液在美容護理中的應用，能夠將干細胞培養液制備成美容液或面膜；干細胞培養液的制備方法，包括干細胞的分離培養和干細胞的3D培養。本發明專利技術的人體干細胞培養液能使細胞更新延遲的狀態達到正常化，促進膠原蛋白和玻尿酸的合成，繼而促進形成彈力、潤滑、光澤的皮膚，且具有美白效果，從而應用于美容護理。

Preparation and application of a kind of stem cell culture medium

【技術實現步驟摘要】
一種干細胞培養液的制備方法及應用
本專利技術涉及干細胞應用
，更具體的說是涉及一種干細胞培養液的制備方法及應用。
技術介紹
人體脂肪由來的干細胞屬于間充質干細胞，是成體干細胞，可以方便的從骨髓和臍帶血中提取。對于人體干細胞培養液(ADSC-CM)，主要含有VEGF(血管內皮生長因子)，TGF(轉化生長因子)，FGF(表皮生長因子)，IGF(胰島素樣生長因子)等150多種細胞再生因子，它們的主要作用是發揮機體細胞再生修復的傳達命令。這些再生因子既可以促進機體細胞本身的分裂更新作用，同時又可以激活干細胞的活化，促進干細胞增殖和相應細胞分化，具有延緩機體衰老的作用。干細胞分泌的成分具有更多的生理活性物質，和組織再生所需要的蛋白質。例如生理活性物質細胞因子是細胞和受體間進行反應的關鍵物質。并且可以幫助細胞外的蛋白質膠原蛋白，彈性蛋白，玻尿酸等形成。ADSC-CM直接作用于干細胞和纖維母細胞和表皮干細胞，使細胞活化的同時，促進細胞增值，加強肌膚細胞更新。但是，在體外環境中，很難對干細胞進行大量培養。因此，提供一種干細胞培養液的制備方法，獲得大量人體干細胞培養液，并將其應用于美容護理，是本領域技術人員亟需解決的問題。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術提供了一種干細胞培養液的制備方法，從而獲得大量人體干細胞培養液，該人體干細胞培養液能使細胞更新延遲的狀態達到正常化，促進膠原蛋白和玻尿酸的合成，繼而促進形成彈力、潤滑、光澤的皮膚，且具有美白效果，從而應用于美容護理。為了實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：一種干細胞培養液在美容護理中的應用，將干細胞培養液制備成美容液或面膜。進一步，一種干細胞培養液的制備方法，具體步驟如下：(1)干細胞的分離培養①將脂肪組織均勻平鋪于細胞培養瓶中，加入含體積分數為10％胎牛血清的α-MEM培養基，放置于37℃，5％CO2培養箱中培養；②5-7d后更換培養基，小心去除非貼壁細胞，顯微鏡下觀察細胞形態及生長情況；③長至70％-80％融合時，棄培養基，生理鹽水洗2遍，加入0.25％胰蛋白酶-EDTA，放入培養箱消化1min，加入培養基終止消化，計數，按照5×104/cm2傳代，第3代細胞用于3D培養；(2)干細胞的3D培養①上述分離培養的細胞按照5×104/cm2傳代，接種于細胞培養板，每個孔提前放置3片Cephodex微載體；②每天更換培養基，第5天將Cephodex微載體轉入15mL離心管，加入0.25％胰蛋白酶-EDTA，放入培養箱消化1min，加入培養基終止消化，40μm無菌篩網過濾，1200r/min離心8min，收集細胞。經由上述的技術方案可知，與現有技術相比，本專利技術公開提供了一種干細胞培養液的制備方法，從而獲得大量人體干細胞培養液，該人體干細胞培養液能使細胞更新延遲的狀態達到正常化，促進膠原蛋白和玻尿酸的合成，繼而促進形成彈力、潤滑、光澤的皮膚，且能抑制黑色素和酪氨酸酶活性，具有美白效果，從而應用于美容護理。附圖說明為了更清楚地說明本專利技術實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本專利技術的實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據提供的附圖獲得其他的附圖。圖1附圖為本專利技術皮膚纖維母細胞的玻尿酸促進合成的效果圖；圖2附圖為本專利技術皮膚纖維母細胞的I型膠原蛋白的促進合成效果；圖3附圖為本專利技術干細胞培養液對黑色素的抑制效果；圖4附圖為本專利技術干細胞培養液對酪氨酸酶的抑制效果。具體實施方式下面將結合本專利技術實施例中的附圖，對本專利技術實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。實施例1一種干細胞培養液的制備方法，具體步驟如下：(1)干細胞的分離培養①將脂肪組織均勻平鋪于細胞培養瓶中，加入含體積分數為10％胎牛血清的α-MEM培養基，放置于37℃，5％CO2培養箱中培養；②5-7d后更換培養基，小心去除非貼壁細胞，顯微鏡下觀察細胞形態及生長情況；③長至70％-80％融合時，棄培養基，生理鹽水洗2遍，加入0.25％胰蛋白酶-EDTA，放入培養箱消化1min，加入培養基終止消化，計數，按照5×104/cm2傳代，第3代細胞用于3D培養；(2)干細胞的3D培養①上述分離培養的細胞按照5×104/cm2傳代，接種于96孔細胞培養板，每個孔提前放置3片Cephodex微載體；②每天更換培養基，第5天將Cephodex微載體轉入15mL離心管，加入0.25％胰蛋白酶-EDTA，放入培養箱消化1min，加入培養基終止消化，40μm無菌篩網過濾，1200r/min離心8min，收集細胞。實施例2干細胞培養液對膠原蛋白和玻尿酸的促進合成效果用ELISA測定50％培養液和5ng/mlTGF-β1的膠原蛋白和玻尿酸的效果時間變化圖。用培養液和TGF-β1對原發性真皮成纖維細胞進行處理，在12小時，24小時，36小時，48小時后進行評價，結果見圖1、圖2。可見在調制培養液作用下，I型膠原蛋白和玻尿酸的生成逐漸增多，表明調制培養液能夠促進膠原蛋白和玻尿酸合成。實施例3美白效果檢測——干細胞培養液對黑色素和酪氨酸酶的抑制效果為證實調制培養液有美白效果，對黑色素內含量和酪氨酸酶活性進行測量。熊果苷(Arbutin)可阻止黑色素合成，對黑色素和酪氨酸酶的活性有明顯的抑制作用，本實驗用其進行參照。在統計學上對試驗進行3次重復操作，對結果進行比較。由圖3、圖4所示，培養液(ADSC-CM)可抑制黑色素和酪氨酸酶活性，在50％濃度時，抑制效果優于熊果苷。對所公開的實施例的上述說明，使本領域專業技術人員能夠實現或使用本專利技術。對這些實施例的多種修改對本領域的專業技術人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本專利技術的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現。因此，本專利技術將不會被限制于本文所示的這些實施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的最寬的范圍。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種干細胞培養液在美容護理中的應用。/n

【技術特征摘要】
1.一種干細胞培養液在美容護理中的應用。


2.根據權利要求1所述的一種干細胞培養液在美容護理中的應用，其特征在于，將干細胞培養液制備成美容液或面膜。


3.一種干細胞培養液的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：
(1)干細胞的分離培養
①將脂肪組織均勻平鋪于細胞培養瓶中，加入含體積分數為10％胎牛血清的α-MEM培養基，放置于37℃，5％CO2培養箱中培養；
②5-7d后更換培養基，小心去除非貼壁細胞，顯微鏡下觀察細胞形態及生長情況；
③長至70％-80％融合...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張伯清，野口活夫，賈正虎，
申請(專利權)人：天津貝羅尼生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：天津;12