一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的維生素B1和維生素C濃度快速檢測(cè)方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的維生素B1和維生素C濃度快速檢測(cè)方法，配制維生素B1和維生素C對(duì)照品溶液及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)溶液；建立維生素B1和維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線；采集血清樣本溶液的色譜圖；血清樣品中維生素B1和維生素C濃度的確定。本發(fā)明專利技術(shù)的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單靈敏、快速準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于血清中維生素B1和維生素C的快速檢測(cè)。

A rapid detection method of vitamin B1 and vitamin C concentration based on liquid chromatography tandem mass spectrometry

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的維生素B1和維生素C濃度快速檢測(cè)方法
本專利技術(shù)涉及一種水溶性維生素的檢測(cè)方法，尤其涉及的是一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的維生素B1和維生素C濃度快速檢測(cè)方法。
技術(shù)介紹
維生素又稱維他命，是維持生命的營(yíng)養(yǎng)素。在人體生長(zhǎng)、發(fā)育、代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，這類物質(zhì)在體內(nèi)無(wú)法合成或合成量不足，必須從外界不斷補(bǔ)充供給。根據(jù)結(jié)構(gòu)與溶解性不同，維生素分為脂溶性維生素和水溶性維生素兩大類。水溶性維生素是指能在水中溶解的維生素，通常作為輔酶或輔基的組成部分，包括B族維生素和維生素C。中國(guó)專利技術(shù)專利：2016105698131，一種快速測(cè)定多維片中維生素B1和維生素C的方法。其對(duì)多維片進(jìn)行檢測(cè)，但是檢測(cè)方法糅合了多種技術(shù)，較為復(fù)雜，同時(shí)檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，從其圖譜中可以看出，至少要20min。現(xiàn)有的一些檢測(cè)維生素B1和維生素C濃度的方法，一般是基礎(chǔ)離子質(zhì)譜儀，檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)，結(jié)果不穩(wěn)定，急需一種能夠快速，簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確高效實(shí)現(xiàn)維生素B1和維生素C濃度的檢測(cè)方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于：如何快速準(zhǔn)確的進(jìn)行多種維生素濃度測(cè)量，提供了一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的維生素B1和維生素C濃度快速檢測(cè)方法。本專利技術(shù)是通過(guò)以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題的，本專利技術(shù)包括以下步驟：(1)配制維生素B1和維生素C對(duì)照品溶液及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)溶液；制備已知濃度的維生素B1和維生素C的對(duì)照品儲(chǔ)備液及已知濃度的維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液；然后稀釋維生素B1和維生素C對(duì)照品儲(chǔ)備液得到已知濃度的維生素B1和維生素C的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)一步稀釋得到具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品工作溶液；將維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液稀釋成已知濃度的維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液；(2)建立維生素B1和維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線；分別吸取一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C混合對(duì)照品工作溶液，分別加入維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液，制得一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液；然后在相同的預(yù)設(shè)的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下，對(duì)不同已知濃度的維生素B1和維生素C的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液進(jìn)行檢測(cè)，得到不同已知濃度的維生素B1和維生素C及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)的色譜圖和峰面積，以一系列混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中維生素B1峰面積與維生素B1同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值及維生素C峰面積與維生素C同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)或橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的維生素B1和維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中維生素B1和維生素C的濃度為橫坐標(biāo)或縱坐標(biāo)，建立維生素B1和維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(3)采集血清樣本溶液的色譜圖；在血清樣本中，加入維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液，得到血清樣本溶液，并在與步驟(2)相同的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下，獲得血清樣本溶液的色譜圖和峰面積；(4)血清樣品中維生素B1和維生素C濃度的確定將血清樣品溶液色譜圖中維生素B1峰面積與維生素B1同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值及維生素C峰面積與維生素C同位素內(nèi)標(biāo)的比值分別帶入已建立的維生素B1和維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出血清樣品中維生素B1和維生素C的濃度。所述步驟(1)中：用含有抗氧化劑的體積分?jǐn)?shù)為50％的甲醇水溶液分別溶解維生素B1和維生素C對(duì)照品及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)，制成已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品儲(chǔ)備液及已知濃度的維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液；用含有抗氧化劑的體積分?jǐn)?shù)為50％的甲醇水溶液將已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋成已知濃度的維生素B1和維生素C的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)一步，用含有抗氧化劑的體積分?jǐn)?shù)為50％的甲醇水溶液將維生素B1和維生素C的混合對(duì)照品溶液稀釋成一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品工作溶液；用含有抗氧化劑的甲醇將已知濃度的維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液稀釋成已知濃度的維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液。所述抗氧化劑選自亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、二硫蘇糖醇、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、二丁基苯酚中的至少一種。所述步驟(2)中，分別吸取一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C混合對(duì)照品工作溶液，加入體積比為1:1～5的維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混勻，離心，取上清液，加入體積比為1:1～10的純水，渦旋混合，得到一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液；所述離心條件為：2～8℃，10000～14000rpm，離心5～20min。所述維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)為13C或2H標(biāo)記的維生素B1和維生素C。同位素內(nèi)標(biāo)的準(zhǔn)確度和重復(fù)性比非同位素內(nèi)標(biāo)的高，采用同位素內(nèi)標(biāo)，以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。所述超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件如下：超高效液相色譜條件：色譜柱：反相色譜柱；柱溫：30～60℃；流速：0.3～0.8mL/min；流動(dòng)相體系：水-甲醇體系，采用梯度洗脫；質(zhì)譜條件包括：離子源：電噴霧離子源，正離子模式；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM模式。所述反相色譜柱為極性基團(tuán)包埋的C18的色譜柱，填料粒徑為1.7～5.0μm，內(nèi)徑為2.1～4.6mm，柱長(zhǎng)為25～150mm。所述流動(dòng)相體系為A相0.1％甲酸水溶液～B相0.1％甲酸甲醇溶液。所述梯度洗脫條件為：0～0.8min：5～30％B，0.8～1min：30～100％B，1～1.2min：100～5％B，1.2～2min：5％B。所述多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM模式的條件為：維生素B1，m/z265.03>121.98；維生素B1-13C4，m/z269.10>121.99；維生素C，m/z177.03>94.93，維生素C-13C6，m/z183.03>99.96。本專利技術(shù)相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：本專利技術(shù)的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單靈敏、快速準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于血清中維生素B1和維生素C的快速檢測(cè)，本專利技術(shù)采用質(zhì)譜法，可以直接檢測(cè)生物樣本，每個(gè)樣本只需要2min即可檢測(cè)出來(lái)，24h可以運(yùn)行近千個(gè)標(biāo)本，極大提高了檢測(cè)時(shí)間和效果。附圖說(shuō)明圖1是維生素B1和維生素C混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液的典型LC-MS/MS色譜圖；圖2是血清樣本的典型LC-MS/MS色譜圖。具體實(shí)施方式下面對(duì)本專利技術(shù)的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明，本實(shí)施例在以本專利技術(shù)技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本專利技術(shù)的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。本實(shí)施例的具體檢測(cè)過(guò)程如下：一、標(biāo)準(zhǔn)品配制1、標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液配制：精密稱取維生素B1和維生素C標(biāo)準(zhǔn)品適量，分別置于10mL容量瓶中，用10mg/mL二硫蘇糖醇的50％甲醇水溶液溶解并定容至刻度，制成濃度分別為0.787mg/mL、0.945mg/mL的維生素B1和維生素C儲(chǔ)備液。用1本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的維生素B1和維生素C濃度快速檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：/n(1)配制維生素B1和維生素C對(duì)照品溶液及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)溶液；/n制備已知濃度的維生素B1和維生素C的對(duì)照品儲(chǔ)備液及已知濃度的維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液；/n然后稀釋維生素B1和維生素C對(duì)照品儲(chǔ)備液得到已知濃度的維生素B1和維生素C的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)一步稀釋得到具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品工作溶液；/n將維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液稀釋成已知濃度的維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液；/n(2)建立維生素B1和維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線；/n分別吸取一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C混合對(duì)照品工作溶液，分別加入維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液，制得一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液；/n然后在相同的預(yù)設(shè)的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下，對(duì)不同已知濃度的維生素B1和維生素C的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液進(jìn)行檢測(cè)，得到不同已知濃度的維生素B1和維生素C及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)的色譜圖和峰面積，/n以一系列混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中維生素B1峰面積與維生素B1同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值及維生素C峰面積與維生素C同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)或橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的維生素B1和維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中維生素B1和維生素C的濃度為橫坐標(biāo)或縱坐標(biāo)，建立維生素B1和維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線；/n(3)采集血清樣本溶液的色譜圖；/n在血清樣本中，加入維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液，得到血清樣本溶液，并在與步驟(2)相同的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下，獲得血清樣本溶液的色譜圖和峰面積；/n(4)血清樣品中維生素B1和維生素C濃度的確定/n將血清樣品溶液色譜圖中維生素B1峰面積與維生素B1同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值及維生素C峰面積與維生素C同位素內(nèi)標(biāo)的比值分別帶入已建立的維生素B1和維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出血清樣品中維生素B1和維生素C的濃度。/n...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的維生素B1和維生素C濃度快速檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)配制維生素B1和維生素C對(duì)照品溶液及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)溶液；
制備已知濃度的維生素B1和維生素C的對(duì)照品儲(chǔ)備液及已知濃度的維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液；
然后稀釋維生素B1和維生素C對(duì)照品儲(chǔ)備液得到已知濃度的維生素B1和維生素C的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)一步稀釋得到具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品工作溶液；
將維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液稀釋成已知濃度的維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液；
(2)建立維生素B1和維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
分別吸取一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C混合對(duì)照品工作溶液，分別加入維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液，制得一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液；
然后在相同的預(yù)設(shè)的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下，對(duì)不同已知濃度的維生素B1和維生素C的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液進(jìn)行檢測(cè)，得到不同已知濃度的維生素B1和維生素C及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)的色譜圖和峰面積，
以一系列混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中維生素B1峰面積與維生素B1同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值及維生素C峰面積與維生素C同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)或橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的維生素B1和維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中維生素B1和維生素C的濃度為橫坐標(biāo)或縱坐標(biāo)，建立維生素B1和維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(3)采集血清樣本溶液的色譜圖；
在血清樣本中，加入維生素B1和維生素C的混合內(nèi)標(biāo)溶液，得到血清樣本溶液，并在與步驟(2)相同的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下，獲得血清樣本溶液的色譜圖和峰面積；
(4)血清樣品中維生素B1和維生素C濃度的確定
將血清樣品溶液色譜圖中維生素B1峰面積與維生素B1同位素內(nèi)標(biāo)峰面積的比值及維生素C峰面積與維生素C同位素內(nèi)標(biāo)的比值分別帶入已建立的維生素B1和維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出血清樣品中維生素B1和維生素C的濃度。


2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的維生素B1和維生素C濃度快速檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(1)中：
用含有抗氧化劑的體積分?jǐn)?shù)為50％的甲醇水溶液分別溶解維生素B1和維生素C對(duì)照品及維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)，制成已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品儲(chǔ)備液及已知濃度的維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液；
用含有抗氧化劑的體積分?jǐn)?shù)為50％的甲醇水溶液將已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋成已知濃度的維生素B1和維生素C的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)一步，用含有抗氧化劑的體積分?jǐn)?shù)為50％的甲醇水溶液將維生素B1和維生素C的混合對(duì)照品溶液稀釋成一系列具有不同已知濃度的維生素B1和維生素C對(duì)照品工作溶液；
用含有抗氧化劑的甲醇將已知濃度的維生素B1和維生素C同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：江振作，李青，丁娜，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：合肥譜佳醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：安徽;34