柯薩奇病毒A10型空心病毒的單克隆抗體及其應用制造技術

本發明專利技術公開了一種能與柯薩奇病毒A10型空心病毒反應的單克隆抗體及檢測試劑盒。本發明專利技術采用純化的CA10病毒液免疫小鼠制備單克隆抗體。本發明專利技術還公開了所述單克隆抗體在檢測CA10病毒或診斷手足口病中的應用。所述單克隆抗體對于快速檢測試劑盒的制備和疫苗的開發研究，具有廣泛的應用。

Monoclonal antibodies against Coxsackie virus A10 and their application

【技術實現步驟摘要】
柯薩奇病毒A10型空心病毒的單克隆抗體及其應用
本專利技術涉及免疫學
，具體涉及柯薩奇病毒A10型空心病毒的單克隆抗體及其應用。
技術介紹
手足口病是由多種腸道病毒感染引起的急性傳染病，夏季流行，學齡前兒童高發，成人可為間接傳染源。手足口病臨床主要表現為口腔、手、足部位皮疹，可并發腦膜炎、腦炎、肺水腫、循環衰竭等導致死亡的重癥。目前腸道病毒71型(enterovirus71，EV71)和柯薩奇病毒A16(coxsackievirus，CA16)是中國大陸地區引起手足口病最常見的病原體。但隨著檢測技術及病毒分型手段的進步，近年來發現腸道病毒中的柯薩奇病毒A6(coxsackievirus，CA6)和柯薩奇病毒A10(coxsackievirus，CA10)的流行率呈現逐年增高的趨勢，并成為部分地區的主要流行血清型。針對近幾年病毒血清型的流行趨勢，國內外眾多研究機構及企業均在著力開發能夠有效預防由CA6或CA10引起的手足口疾病發生的疫苗或藥物。臨床治療方面為能提供最快速的方案，通常需要一種快速的檢測方法，ELISA快速檢測試劑盒是最常用的方法，能夠在最短的時間內檢測出患者所感染的病毒血清型。篩選一株型別特異性的單克隆抗體是建立檢測試劑盒的前提。此外，在疫苗的研究過程中，疫苗中抗原含量是指導工藝研究和評價體外有效性的關鍵指標。建立抗原評價方法最關鍵的技術也在于篩選到合適的單克隆抗體，繼而可利用該單克隆抗體建立一套有效的ELISA評價系統。柯薩奇病毒A6(coxsackievirus，CA6)和柯薩奇病毒A10(coxsackievirus，CA10)均為腸道病毒，腸道病毒在體外培養時容易形成兩種不同的結構狀態，一種為包含核酸的完整實心病毒顆粒，一種為不含核酸的空心病毒顆粒，通常這兩種狀態的病毒顆粒是共同存在的。經文獻資料記載及多次的實驗研究表明，實心病毒顆粒和空心病毒顆粒均有免疫原性，但實心病毒顆粒明顯強于空心病毒顆粒。病毒原液中若含有一定比例的空心病毒顆粒，可有效提高原液總蛋白含量，對病毒原液及成品疫苗的穩定性具有重要的意義。因此，在疫苗的工藝研究和制劑研究中，能夠確定產品中實心病毒顆粒和空心病毒顆粒的比例對產品的質量評價具有重要意義。分別建立能夠檢測實心病毒顆粒的抗原評價系統及檢測空心病毒顆粒的抗原評價系統將對病毒原液的監測及成品疫苗的質量控制具有重要意義。抗原評價系統(含ELISA快速檢測試劑盒)通常采用雙抗夾心法，例如多克隆抗體(簡稱：多抗)—多抗、多抗—單克隆抗體(簡稱：單抗)、單抗—多抗、單抗—單抗的形式，多抗的使用，通常容易引起不同型別腸道病毒之間的交叉結合，對病毒的檢測特異性不強；單抗的使用容易出現抗原表位結合能力不足，不能夠客觀反映抗原真實含量。目前沒有文獻報道一種能夠主要檢測CA10空心病毒顆粒的抗原評價系統。現有的工藝研究中確定病毒液中空心和實心病毒的比例主要是依靠電鏡觀察的方式，電鏡觀察的方法對樣品的濃度和緩沖體系的成分要求比較高，試驗耗時長，對實驗室的儀器設備要求比較高，具有一定的局限性。
技術實現思路
為了解決上述技術問題，本專利技術提供如下技術方案：第一方面，本專利技術提供一種針對CA10病毒的單克隆抗體，所述單克隆抗體具有SEQIDNO:5所示的重鏈互補決定區CDR1、SEQIDNO:6所示的重鏈互補決定區CDR2、SEQIDNO:7所示的重鏈互補決定區CDR3，以及SEQIDNO:13所示的輕鏈互補決定區CDR1、SEQIDNO:14所示的輕鏈互補決定區CDR2、SEQIDNO:15所示的輕鏈互補決定區CDR3；優選地，所述單克隆抗體具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的重鏈；和/或，優選地，所述單克隆抗體具有SEQIDNO:16所示的氨基酸序列的輕鏈；優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。第二方面，本專利技術提供一種編碼所述針對CA10病毒的單克隆抗體的多核苷酸序列，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:1所示的重鏈互補決定區CDR1、SEQIDNO:2所示的重鏈互補決定區CDR2、SEQIDNO:3所示的重鏈互補決定區CDR3，以及SEQIDNO:9所示的輕鏈互補決定區CDR1、SEQIDNO:10所示的輕鏈互補決定區CDR2、SEQIDNO:11所示的輕鏈互補決定區CDR3；優選地，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:4所示的核苷酸序列的重鏈；和/或，優選地，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:12所示的核苷酸序列的輕鏈；優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。第三方面，本專利技術提供一種用于檢測CA10病毒的試劑盒，所述試劑盒包括所述的單克隆抗體或所述的多核苷酸序列編碼的單克隆抗體；優選地，所述試劑盒還包括多抗；更優選地，所述多抗為CA10兔多抗；優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。第四方面，本專利技術提供一種用于診斷手足口病的試劑盒，所述試劑盒包括所述的單克隆抗體或所述的多核苷酸序列編碼的單克隆抗體；優選地，所述試劑盒還包括多抗；更優選地，所述多抗為CA10兔多抗；優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。第五方面，本專利技術提供一種所述的針對CA10病毒的單克隆抗體或所述的多核苷酸序列編碼的單克隆抗體在制備用于檢測CA10病毒或診斷手足口病的試劑盒中的應用；優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。第六方面，本專利技術提供一種所述的針對CA10病毒的單克隆抗體或所述的多核苷酸序列編碼的單克隆抗體在對含CA10病毒的疫苗的生產進行質量控制中的應用；優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。第七方面，本專利技術提供一種對含CA10病毒的疫苗的生產進行質量控制的方法，所述方法包括用所述的針對CA10病毒的單克隆抗體或所述的多核苷酸序列編碼的單克隆抗體檢測CA10病毒的步驟；優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。第八方面，本專利技術提供一種用于治療或預防由CA10病毒感染引起的疾病的藥物，所述藥物含有所述的針對CA10病毒的單克隆抗體或所述的多核苷酸序列編碼的單克隆抗體；優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。第九方面，本專利技術提供一種所述的針對CA10病毒的單克隆抗體或所述的多核苷酸序列編碼的單克隆抗體用于檢測手足口疫苗制備過程中或疫苗成品中CA10病毒的含量的應用。優選地，所述應用為用于檢測手足口疫苗制備過程中或疫苗成品中CA10空心病毒的含量。本專利技術的有益效果在于：本專利技術提供了一種主要檢測CA10空心病毒顆粒的抗原評價系統。采用本專利技術提供的由單克隆抗體制備的抗原評價系統，能夠快速檢測空心病毒，其對實心病毒的結合能力較弱。實心病毒顆粒的比例是疫苗研究工藝中重點關注的指標，與產品的有效性成正相關，空心病毒顆粒的免疫原性不及實心病毒顆粒，但原液或成品中含有一定比例的空心病毒顆粒不僅可以增強其穩定性還可以增強其免疫原性。在病毒原液的生產階段和純化階段，實時監控每一步產品中的空實心病毒比例，為病毒發酵的收獲時間選本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.針對CA10病毒的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體具有SEQ ID NO:5所示的重鏈互補決定區CDR1、SEQ ID NO:6所示的重鏈互補決定區CDR2、SEQ ID NO:7所示的重鏈互補決定區CDR3，以及SEQ ID NO:13所示的輕鏈互補決定區CDR1、SEQ ID NO:14所示的輕鏈互補決定區CDR2、SEQ ID NO:15所示的輕鏈互補決定區CDR3；優選地，所述單克隆抗體具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重鏈；和/或，優選地，所述單克隆抗體具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的輕鏈；/n優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。/n

【技術特征摘要】
1.針對CA10病毒的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體具有SEQIDNO:5所示的重鏈互補決定區CDR1、SEQIDNO:6所示的重鏈互補決定區CDR2、SEQIDNO:7所示的重鏈互補決定區CDR3，以及SEQIDNO:13所示的輕鏈互補決定區CDR1、SEQIDNO:14所示的輕鏈互補決定區CDR2、SEQIDNO:15所示的輕鏈互補決定區CDR3；優選地，所述單克隆抗體具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的重鏈；和/或，優選地，所述單克隆抗體具有SEQIDNO:16所示的氨基酸序列的輕鏈；
優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。


2.編碼權利要求1所述的針對CA10病毒的單克隆抗體的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:1所示的重鏈互補決定區CDR1、SEQIDNO:2所示的重鏈互補決定區CDR2、SEQIDNO:3所示的重鏈互補決定區CDR3，以及SEQIDNO:9所示的輕鏈互補決定區CDR1、SEQIDNO:10所示的輕鏈互補決定區CDR2、SEQIDNO:11所示的輕鏈互補決定區CDR3；優選地，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:4所示的核苷酸序列的重鏈；和/或，優選地，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:12所示的核苷酸序列的輕鏈；
優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。


3.用于檢測CA10病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的單克隆抗體或權利要求2所述的多核苷酸序列編碼的單克隆抗體；優選地，所述試劑盒還包括多抗；更優選地，所述多抗為CA10兔多抗；
優選地，所述CA10病毒為CA10空心病毒。


4.用于診斷手足口病的試劑盒...

【專利技術屬性】
技術研發人員：戈小琴，武瑞霞，安燕秋，蔡芳，李雅靜，高強，尹衛東，
申請(專利權)人：北京科興生物制品有限公司，
類型：發明
國別省市：北京;11