用于調節腫瘤微環境的TLR-9激動劑制造技術

一種用于治療腫瘤疾病、特別是結腸癌，及用于調節腫瘤微環境的TLR?9激動劑。

TLR-9 agonist for regulating tumor microenvironment

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】用于調節腫瘤微環境的TLR-9激動劑
本專利技術涉及腫瘤療法的領域，特別是涉及治療實體腫瘤的領域，更特別是涉及在人類中治療結腸癌。本專利技術進一步涉及TLR-9激動劑的領域及其于治療所述腫瘤疾病的用途。在本專利技術的又另一方面中，其涉及調節腫瘤(特別是實體腫瘤)的腫瘤微環境，及由此支持腫瘤療法的領域。
技術介紹
腫瘤微環境(TME)為其中存在腫瘤的細胞環境，包括周圍血管、免疫細胞、纖維母細胞、骨髓衍生的炎性細胞、淋巴細胞、信號傳導分子及胞外基質。腫瘤與周圍微環境密切相關且持續地相互作用。腫瘤可通過釋放細胞外信號、促進腫瘤血管生成及誘導周邊免疫耐受性而影響微環境，同時微環境中的免疫細胞可影響癌細胞的生長及演化。歷史上，患者中黑色素瘤特異性T細胞的發現導致過繼性轉移大量體外擴增腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)的策略，其已經證實免疫系統具有控制癌癥能力。然而，利用TIL的過繼性T細胞療法(ACT)尚未具有利用病毒特異性CD8+T細胞的ACT的成效。實體癌癥的TME似乎基本上與白血病的TME不同，在白血病中利用嵌合抗原受體T細胞的臨床ACT試驗已展現效力。腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)為穿透腫瘤(即浸潤至腫瘤中)的淋巴細胞。臨床前小鼠研究指示接近癌細胞的T細胞累積受到限制，克服此限制顯示增強的抗腫瘤效果。T細胞經由循環系統到達腫瘤位點。TME似乎優先自該系統招募其他免疫細胞，而非T細胞。一個此種機制為釋放細胞類型特異性趨化因子。另一個為TME翻譯后改變趨化因子的能力。因此，本領域技術人員已知TIL涉及殺死腫瘤細胞，且腫瘤中淋巴細胞的存在通常與更好的臨床結果相關聯。腫瘤相關巨噬細胞(TAM)主要源自腫瘤周圍組織或骨髓且可分成兩種主要類型：M1及M2。特別地，M1巨噬細胞具有抗腫瘤性質。因此，M2巨噬細胞轉變為M1巨噬細胞或M1巨噬細胞的優先浸潤有利于抗腫瘤免疫反應。因此，進一步需要鑒別調節TME以改良腫瘤療法的手段及方法。特別地，需要刺激TIL(特別是T細胞，諸如CD3+T細胞)及巨噬細胞的浸潤至腫瘤中及由此支持腫瘤療法的進一步改良的方法及措施。
技術實現思路
在一實施方式中，通過提供一種用于在有需要的對象中治療腫瘤疾病、優選結腸癌的TLR-9激動劑來解決此目的，所述TLR-9激動劑包含i.包含至少一個未甲基化CG二核苷酸的寡脫氧核糖核苷酸，其中C為脫氧胞苷及G為脫氧鳥苷，及ii.至少三個、特別是四個連續脫氧鳥苷的至少一個片段，且寡脫氧核糖核苷酸的脫氧核糖部分通過磷酸二酯鍵相連，其中用所述TLR-9激動劑的治療刺激CD3+T細胞浸潤至腫瘤中。在一優選實施方式中，浸潤的CD3+T細胞為CD4+或CD8+T細胞，在一更優選實施方式中為CD8+T細胞。在另一優選實施方式中，用所述TLR-9激動劑的治療導致在腫瘤中的CD8+T細胞群體內的細胞毒性效應T細胞(CD8+CD69+顆粒酶(Granzyme，Grz)B+)的頻率增加。細胞毒性效應T細胞的群體(CD8+CD69+顆粒酶B+)也可稱為具有溶細胞潛力的活化的CD8+T細胞，即此細胞群體優先具有抗腫瘤發生潛力。在另一優選實施方式中，用所述TLR-9激動劑的治療導致CD8+T細胞(優選細胞毒性效應T細胞(CD8+CD69+顆粒酶B+))與調節T細胞的比率增加。調節T細胞具有促腫瘤發生潛力。調節T細胞可抑制T細胞的抗腫瘤效應，例如，通過分泌抑制性細胞因子，除去IL-2或通過于其表面上表達的抑制性分子(例如CTLA-4)。由此，一個目的為用所述TLR-9激動劑的治療是用于刺激CD3+T細胞的浸潤至腫瘤中。在一優選實施方式中，用所述TLR-9激動劑的治療是用于提高腫瘤中的CD8+T細胞群體內的細胞毒性效應T細胞(CD8+CD69+顆粒酶(Grz)B+)的頻率和/或用于提高CD8+T細胞(優選細胞毒性效應T細胞(CD8+CD69+顆粒酶B+))與調節T細胞的比率。在一實施方式中，腫瘤在其周邊和/或其中心浸潤，優選在其中心浸潤。由此，一個目的為用所述TLR-9激動劑的治療是用于在其周邊和/或其中心(優選在其中心)浸潤腫瘤。在一實施方式中，腫瘤為實體腫瘤，優選結腸癌，及待治療的對象為人類。進一步通過應用用于增加CD3+T細胞(優選CD8+T細胞)至腫瘤(優選結腸癌)中的浸潤的方法來解決本專利技術的目的，其包括向有此需要的患者施用TLR-9激動劑，其中所述TLR-9激動劑包含i.包含至少一個未甲基化CG二核苷酸的寡脫氧核糖核苷酸，其中C為脫氧胞苷及G為脫氧鳥苷，及ii.至少三個、特別是四個連續脫氧鳥苷的至少一個片段，且其中所述寡脫氧核糖核苷酸的脫氧核糖部分通過磷酸二酯鍵相連。在另一實施方式中，所述方法用于提高腫瘤中的CD8+T細胞群體內的細胞毒性效應T細胞(CD8+CD69+顆粒酶B+)的頻率。在另一實施方式中，所述方法用于提高CD8+T細胞(優選細胞毒性效應T細胞(CD8+CD69+顆粒酶B+))與調節T細胞的比率。本專利技術人等已發現所述TLR-9激動劑可導致T細胞轉運至腫瘤的增加。由此，TME和/或腫瘤中的T細胞的局部濃度提高，即T細胞累積于腫瘤附近并浸潤至其中，因此T細胞受TME的限制似乎得到克服。因此，T細胞可展現其抗腫瘤效應。因此，在本專利技術的一特定方面中，使用TLR-9激動劑來提高CD3+T細胞(優選CD8+T細胞)的效力。在另一實施方式中，通過提供一種用于在有此需要的對象中治療腫瘤疾病(優選結腸癌)的TLR-9激動劑來解決本專利技術的目的，所述TLR-9激動劑包含i.包含至少一個未甲基化CG二核苷酸的寡脫氧核糖核苷酸，其中C為脫氧胞苷及G為脫氧鳥苷，及ii.至少三個、特別是四個連續脫氧鳥苷的至少一個片段，且所述寡脫氧核糖核苷酸的脫氧核糖部分通過磷酸二酯鍵相連，其中用所述TLR-9激動劑的治療刺激巨噬細胞(優選M1巨噬細胞)浸潤至腫瘤中和/或用所述TLR-9激動劑的治療導致腫瘤內M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率增加。由此，一個目的為用所述TLR-9激動劑的治療是用于刺激巨噬細胞(優選M1巨噬細胞)浸潤至腫瘤中和/或用所述TLR-9激動劑的治療是用于增加腫瘤內M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率。優選地，腫瘤被CD3+T細胞和/或經巨噬細胞(優選M1巨噬細胞)的浸潤與沒有TLR-9激動劑的治療的浸潤相比受到刺激和/或腫瘤內M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率與沒有TLR-9激動劑的治療的M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率相比增加。在另一實施方式中，通過應用用于增加巨噬細胞(優選M1巨噬細胞)浸潤至腫瘤(優選結腸癌)中、和/或用來增加腫瘤(優選結腸癌)內M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率的方法來解決本專利技術的目的，其包括向有此需要的患者施用TLR-9激動劑，其中所述TLR-9激動劑包含i.包含至少一個未甲基化CG二核苷酸的寡脫氧核糖核苷酸，其中C為脫氧胞苷及G為脫氧鳥苷，且ii.至少三個、特別是四個連續脫氧鳥苷的至少一個片本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種用于在有此需要的對象中治療腫瘤疾病、優選結腸癌的TLR-9激動劑，所述TLR-9激動劑包含/ni.包含至少一個未甲基化CG二核苷酸的寡脫氧核糖核苷酸，其中C為脫氧胞苷及G為脫氧鳥苷，及/nii.至少三個、特別是四個連續脫氧鳥苷的至少一個片段，/n且所述寡脫氧核糖核苷酸的脫氧核糖部分通過磷酸二酯鍵相連，其中用所述TLR-9激動劑的治療刺激CD3+T細胞浸潤至腫瘤中和/或刺激巨噬細胞，優選M1巨噬細胞浸潤至腫瘤中和/或導致腫瘤內M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率增加。/n

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】20170831 EP 17001465.8;20180115 EP 18151734.31.一種用于在有此需要的對象中治療腫瘤疾病、優選結腸癌的TLR-9激動劑，所述TLR-9激動劑包含
i.包含至少一個未甲基化CG二核苷酸的寡脫氧核糖核苷酸，其中C為脫氧胞苷及G為脫氧鳥苷，及
ii.至少三個、特別是四個連續脫氧鳥苷的至少一個片段，
且所述寡脫氧核糖核苷酸的脫氧核糖部分通過磷酸二酯鍵相連，其中用所述TLR-9激動劑的治療刺激CD3+T細胞浸潤至腫瘤中和/或刺激巨噬細胞，優選M1巨噬細胞浸潤至腫瘤中和/或導致腫瘤內M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率增加。


2.根據權利要求1的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中腫瘤被CD3+T細胞和/或被巨噬細胞，優選M1巨噬細胞的浸潤與沒有用TLR-9激動劑的治療的浸潤相比受到刺激和/或腫瘤內M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率與沒有用TLR-9激動劑的治療的M1巨噬細胞與M2巨噬細胞的比率相比增加。


3.根據權利要求1或2的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述CD3+T細胞為CD4+或CD8+T細胞，優選CD8+T細胞。


4.根據權利要求3的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中用所述TLR-9激動劑的治療導致在腫瘤中的CD8+T細胞群體內的細胞毒性效應T細胞(CD8+CD69+顆粒酶B+)的頻率增加和/或導致CD8+T細胞，優選細胞毒性效應T細胞(CD8+CD69+顆粒酶B+)與調節T細胞的比率增加。


5.根據先前權利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述腫瘤在其周邊和/或其中心被浸潤，優選在其中心被浸潤。


6.根據先前權利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述腫瘤為實體腫瘤，優選結腸癌，及待治療的所述對象為人類。


7.根據先前權利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述TLR-9激動劑被腫瘤內施用或皮下施用。


8.根據先前權利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述至少一個CG二核苷酸為序列N1N2CGN3N4的部分，其中N1N2為AA、TT、GG、GT、GA或AT及N3N4為CT、TT、TG或GG及C為脫氧胞苷，G為脫氧鳥苷，A為脫氧腺苷，及T為脫氧胸苷。


9.根據先前權利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述寡脫氧核糖核苷酸包含至少一個呈L-構型的核苷酸，優選地，所述至少一個呈L-構型的核苷酸包含在所述寡脫氧核糖核苷酸的至少一端的末端五個核苷酸內，優選在所述寡脫氧核糖核苷酸的3’端的末端五個核苷酸內。


10.根據先前權利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述寡脫氧核糖核苷酸包含至少三個CG二核苷酸。


11.根據先前權利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述寡脫氧核糖核苷酸為單鏈的和/或部分或完全雙鏈的。


12.根據先前權利要求中任一者的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所述寡脫氧核糖核苷酸包含兩個單鏈的環且形成啞鈴形狀。


13.根據權利要求12的用于所述用途的TLR-9激動劑，其中所有核苷酸呈D-構型。


14.根據權利要求12或13的用于所述用途的TLR-9激動劑，其具有SEQIDNO：3的序列。


15.根據權利要求9的用于所述用途的TLR-9激動劑，其具有SEQIDNO：5至SEQIDNO：14的任意的序列，優選具有SEQIDNO：5的序列。
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【專利技術屬性】
技術研發人員：K·卡普，M·施密特，
申請(專利權)人：莫洛根股份公司，
類型：發明
國別省市：德國;DE