本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒，用于分離和鑒定已經(jīng)脫離實體瘤進入體液中的腫瘤細胞，具有這樣的特征，包括：細胞過濾器，用于對體液進行過濾得到體液腫瘤細胞；第一細胞固定液，用于對體液腫瘤細胞進行第一次固定；第二細胞固定液，用于對經(jīng)過第一次固定的體液腫瘤細胞進行第二次固定；第一抗體，用于與體液腫瘤細胞進行結(jié)合；第二抗體，用于與第一抗體進行結(jié)合；以及核酸熒光染色液，其中，第一細胞固定液為瓊脂糖溶液，該瓊脂糖溶液的質(zhì)量體積濃度為0.04％～0.08％，第二細胞固定液為多聚甲醛溶液，該多聚甲醛溶液的體積濃度為3％～5％，第一抗體為PDL1抗體，第二抗體為熒光標記的二抗。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒
本專利技術(shù)涉及生物技術(shù)與生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒。
技術(shù)介紹
細胞程序式死亡配體1(PDL1)，也叫表面抗原分化簇274(CD274)或B7同源體(B7-H1)，它是人類體內(nèi)由CD274基因編碼的一種蛋白質(zhì)。腫瘤通過表達PDL1來誘導(dǎo)形成免疫抑制性的腫瘤微環(huán)境，逃避機體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，使腫瘤細胞免于機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和清除。目前通常使用免疫組織化學(xué)方法來檢測癌癥患者組織標本中的PDL1蛋白表達情況，該方法被認為是PDL1檢測的金標準。但是對于腫瘤組織無法切除、穿刺組織易造成腫瘤擴散以及部分存在手術(shù)禁忌的癌癥患者，PDL1狀態(tài)評估非常困難。另外，對于腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)早期的患者，由于獲得腫瘤組織樣本較為困難，從而無法評估PDL1的狀態(tài)。體液腫瘤細胞通常是指因自發(fā)或診療操作引起的從原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶侵入人體液的腫瘤細胞。體液腫瘤細胞一般以單細胞或者細胞團的形式存在于循環(huán)系統(tǒng)中。大部分侵入循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細胞會在短期內(nèi)死亡，只有極少數(shù)具有高度轉(zhuǎn)移傾向和活力的腫瘤細胞才能存活下來，相互聚集成團，并在一定條件下發(fā)展為轉(zhuǎn)移灶。進入體液循環(huán)是發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的必要條件，因此在體液中檢測到腫瘤細胞預(yù)示著將有可能發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，目前臨床已經(jīng)采用腫瘤細胞作為評估腫瘤預(yù)后的參考指標之一。近年來，腫瘤細胞在臨床應(yīng)用的研究獲得了長足的發(fā)展，越來越的研究表明其可以為多種腫瘤提供重要的預(yù)后信息，如轉(zhuǎn)移性乳腺癌，直腸癌，前列腺癌等。由于腫瘤細胞檢測的對象是血液、尿液、痰液、胸腔積液，腦脊液等標本，取材比傳統(tǒng)意義上的組織活檢更方便，而且可重復(fù)性強，而被稱之為“液態(tài)的活檢”。體液腫瘤細胞的檢測一般分為兩個步驟：腫瘤細胞的分離以及腫瘤細胞的鑒定。腫瘤細胞的分離方法常見為：密度梯度離心法、紅細胞裂解法、陰性選擇富集法、膜濾過法及CellScarch等。腫瘤細胞的鑒定方法多為熒光鑒定法。但是，很難將膜過濾法與免疫熒光鑒定法結(jié)合以綜合評估PDL1的表達狀態(tài)，這是因為體液中的腫瘤細胞的數(shù)目非常少，經(jīng)過膜過濾后，很難將如此數(shù)目稀少的腫瘤細胞進行很好地固定使其經(jīng)過一系列的免疫熒光處理后仍然能夠得以保留從而在熒光顯微鏡下進行檢測。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)是為了解決上述問題而進行的，目的在于提供一種體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒。本專利技術(shù)提供了一種體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒，用于分離和鑒定已經(jīng)脫離實體瘤進入體液中的腫瘤細胞，具有這樣的特征，包括：細胞過濾器，用于對體液進行過濾得到體液腫瘤細胞；第一細胞固定液，用于對體液腫瘤細胞進行第一次固定；第二細胞固定液，用于對經(jīng)過第一次固定的體液腫瘤細胞進行第二次固定；第一抗體，用于與體液腫瘤細胞進行結(jié)合；第二抗體，用于與第一抗體進行結(jié)合；以及核酸熒光染色液，用于對體液腫瘤細胞的細胞核進行染色，其中，第一細胞固定液為瓊脂糖溶液，該瓊脂糖溶液的質(zhì)量體積濃度為0.04％～0.08％，第二細胞固定液為多聚甲醛溶液，該多聚甲醛溶液的體積濃度為3％～5％，第一抗體為PDL1抗體，第二抗體為熒光標記的二抗。在本專利技術(shù)提供的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒中，還可以具有這樣的特征：其中，瓊脂糖溶液的質(zhì)量體積濃度為0.05％。在本專利技術(shù)提供的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒中，還可以具有這樣的特征：其中，第二抗體為熒光標記山羊抗小鼠的二抗。在本專利技術(shù)提供的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒中，還可以具有這樣的特征：其中，細胞過濾器包括裝樣管和設(shè)置在裝樣管內(nèi)的微孔濾膜，裝樣管為容量為50mL的塑料管，微孔濾膜的微孔孔徑為2μm～5μm。在本專利技術(shù)提供的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒中，還可以具有這樣的特征：其中，核酸熒光染色液為DAPI。在本專利技術(shù)提供的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒中，還可以具有這樣的特征，還包括：其中，破膜液，為含聚乙二醇辛基苯基醚和PBS的質(zhì)量與體積比為64.2mg:1mL的溶液，pH為7.4。在本專利技術(shù)提供的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒中，還可以具有這樣的特征，還包括：其中，封閉液，為含牛血清白蛋白和DMEM培養(yǎng)基溶液的質(zhì)量與體積比為3.0g:100mL的無菌溶解，pH為7.4。在本專利技術(shù)提供的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒中，還可以具有這樣的特征，還包括：其中，封片液，為抗熒光淬滅封片液。在本專利技術(shù)提供的體液腫瘤細胞PDL1檢測方法中，還可以具有這樣的特征：其中，體液包括血液、尿液、唾液、胸腔積液、痰液以及腦脊液。專利技術(shù)的作用與效果根據(jù)本專利技術(shù)所涉及的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒，因為包括細胞過濾器、第一細胞固定液、第二細胞固定液、第一抗體、第二抗體以及核酸熒光染色液，其中，第一細胞固定液為質(zhì)量體積濃度為0.04％～0.08％的瓊脂糖溶液，第二細胞固定液為3％～5％的多聚甲醛溶液，因此，通過細胞過濾器能夠?qū)w液進行過濾從而將體液腫瘤細胞從體液中分離出來，然后將分離的體液腫瘤細胞從濾膜上洗脫下來后涂于載玻片，晾干后用瓊脂糖溶液進行固定，晾干后再用多聚甲醛溶液進行固定，從而能夠?qū)?shù)量較少的體液腫瘤細胞進行很好地固定，然后再用破膜液、封閉液、第一抗體、第二抗體、核酸熒光染色液以及封片液進行免疫熒光處理后就能夠在熒光顯微鏡下直接觀察體液腫瘤細胞PDL1的表達情況。既解決了現(xiàn)有技術(shù)中獲取腫瘤組織樣本所帶來的問題，又解決了體液腫瘤細胞的固定問題，因此通過將膜過濾法與免疫熒光鑒定法進行結(jié)合能夠快速、高效地綜合評估PDL1的表達狀態(tài)。附圖說明圖1是本專利技術(shù)的實施例二中體液腫瘤細胞PDL1檢測方法的流程圖；圖2是本專利技術(shù)的實施例三中體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒用于乳腺癌細胞檢測鏡下觀察圖；圖3是本專利技術(shù)的實施例四中體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒用于乳腺癌患者血液樣本的檢測鏡下觀察圖；圖4是本專利技術(shù)的實施例五中體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒用于前列腺癌患者尿液樣本的檢測鏡下觀察圖；圖5是本專利技術(shù)的實施例六中體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒用于腦膠質(zhì)瘤患者腦脊液樣本的檢測鏡下觀察圖；圖6是本專利技術(shù)的實施例七中體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒用于胃癌患者胸腔積液樣本的檢測鏡下觀察圖；以及圖7是本專利技術(shù)的實施例八中體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒用于肺癌患者痰液樣本的檢測鏡下觀察圖。具體實施方式為了使本專利技術(shù)實現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，以下實施例結(jié)合附圖對本專利技術(shù)體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒作具體闡述。<實施例一>本實施例提供了一種體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒，用于分離和鑒定已經(jīng)脫離實體瘤進入體液中的腫瘤細胞，包括：細胞過濾器、第一細胞固定液、第二細胞固定液、破膜液、封閉液、第一抗體、第二抗體、核酸熒光染色液以及封片液。細胞過濾器包括裝樣管和設(shè)置在裝樣管內(nèi)的微孔濾膜。裝樣管內(nèi)設(shè)置有支撐件，微孔濾膜固定在支撐件上從而將裝樣管內(nèi)分隔成上、下兩個容納空間，其中上容納空間用于盛放體液樣品，下容納空間用于盛裝濾本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒，用于分離和鑒定已經(jīng)脫離實體瘤進入體液中的腫瘤細胞，其特征在于，包括：/n細胞過濾器，用于對體液進行過濾得到體液腫瘤細胞；/n第一細胞固定液，用于對所述體液腫瘤細胞進行第一次固定；/n第二細胞固定液，用于對經(jīng)過第一次固定的所述體液腫瘤細胞進行第二次固定；/n第一抗體，用于與所述體液腫瘤細胞進行結(jié)合；/n第二抗體，用于與所述第一抗體進行結(jié)合；以及/n核酸熒光染色液，用于對所述體液腫瘤細胞的細胞核進行染色，/n其中，所述第一細胞固定液為瓊脂糖溶液，該瓊脂糖溶液的質(zhì)量體積濃度為0.04％～0.08％，/n所述第二細胞固定液為多聚甲醛溶液，該多聚甲醛溶液的體積濃度為3％～5％，/n所述第一抗體為PDL1抗體，/n所述第二抗體為熒光標記的二抗。/n
【技術(shù)特征摘要】
1.一種體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒，用于分離和鑒定已經(jīng)脫離實體瘤進入體液中的腫瘤細胞，其特征在于，包括：
細胞過濾器，用于對體液進行過濾得到體液腫瘤細胞；
第一細胞固定液，用于對所述體液腫瘤細胞進行第一次固定；
第二細胞固定液，用于對經(jīng)過第一次固定的所述體液腫瘤細胞進行第二次固定；
第一抗體，用于與所述體液腫瘤細胞進行結(jié)合；
第二抗體，用于與所述第一抗體進行結(jié)合；以及
核酸熒光染色液，用于對所述體液腫瘤細胞的細胞核進行染色，
其中，所述第一細胞固定液為瓊脂糖溶液，該瓊脂糖溶液的質(zhì)量體積濃度為0.04％～0.08％，
所述第二細胞固定液為多聚甲醛溶液，該多聚甲醛溶液的體積濃度為3％～5％，
所述第一抗體為PDL1抗體，
所述第二抗體為熒光標記的二抗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒，其特征在于：
其中，所述瓊脂糖溶液的質(zhì)量體積濃度為0.05％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的體液腫瘤細胞PDL1檢測試劑盒，其特征在于：
其中，所述第二抗體為熒光標記山羊抗小鼠的二抗。
4.根據(jù)權(quán)利要...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：梁曉飛，宋萍，
申請(專利權(quán))人：湖州獵源醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江;33
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