骨橋蛋白多肽的新應用制造技術

本發明專利技術提供一種骨橋蛋白多肽的新應用，具體涉及OPN多肽在制備用于定量檢測肝癌標志物的試劑盒中的用途。本發明專利技術的發明專利技術人經過長期研究及大量試驗發現，OPN的含量變化對肝癌的狀態具有明顯的相關性，將其作為標志物并用OPN制備檢測OPN含量的試劑盒，能夠準確輔助診斷肝癌的存在、分期和轉移。

【技術實現步驟摘要】
骨橋蛋白多肽的新應用
本專利技術涉及肝癌的診斷領域，并具體涉及一種骨橋蛋白多肽的新應用。
技術介紹
人們談癌色變。21世紀以來，惡性腫瘤對人類健康的威脅已日趨嚴重。其致死率僅次于心腦血管疾病，位居第三。腫瘤患者死亡率高的主要原因是不能早期診斷，早期診斷與早期治療是防治腫瘤與降低死亡率的最有效方法。隨著腫瘤細胞的發生，腫瘤患者體內某些蛋白質會發生變化，或產生新的與腫瘤關聯的異常蛋白。這些能反應腫瘤存在的化學類物質人們總稱為腫瘤標志物。由于腫瘤標志物或不存在于正常成人組織而僅見于腫瘤組織，或在腫瘤組織中的含量大大超過在正常組織里的含量，它們的存在或量變可以提示腫瘤的性質，因此通過對這些異常的蛋白質的檢測不僅可以用來診斷腫瘤的發生也可以用來監控藥物對腫瘤的治療進展，對腫瘤的診治將起到重要作用。用于臨床診斷的腫瘤標志物包括癌胚抗原、酶、激素、糖蛋白、癌基因和細胞表面腫瘤抗原等6大類。美國FDA批準了以下血清腫瘤標志物用于腫瘤的輔助診斷：甲胎蛋白(AFP)，癌胚抗原(CEA)，癌抗原CA125，癌抗原CA19-9，癌抗原CA153，前列腺特異性抗原(fPSA,tPSA)，甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin)，β人絨毛膜促性腺激素(HCGb)，和人附睪分泌蛋白4(HE4)。另外其他常用于臨床診斷的腫瘤標志物還包括神經原特異性烯醇化酶(NSE)，降鈣素(PCT)，鐵結合蛋白(Ferritin)，β2－微球蛋白(beta2-Microglobin)，胃蛋白酶原(Pepsinogen1,2)，和催乳素(Prolactin)等。總體上來講，腫瘤標志物是腫瘤細胞在癌變過程中由于基因的表達水平的變化而生成或減少的抗原和其他生物活性物質，可用于腫瘤的早期診斷、分期、監測腫瘤進程，和評價藥物的治療效果(ASCO，1996)。它會對腫瘤的臨床治療帶來巨大的影響，尤其當它能夠在臨床病癥出現之前被檢測到，或者可以用于治療效果的實時檢測時。目前，為了滿足腫瘤的臨床診斷和治療的需求，腫瘤標志物的研發亟待加速。但是，目前用于早期診斷的腫瘤標志物，大多由于缺乏靈敏度和特異性而不能在體檢中廣泛應用。對于肝癌，甲胎蛋白和超聲波檢查是普遍采用的診斷高危病人的方式，并且確實顯著提高了肝癌病人的生存率，但靈敏度比較低；腫瘤抗原CA125有更高的靈敏度，但卻缺乏特異性。同樣地，用于乳腺癌檢測的血液腫瘤標志物CA153因靈敏度低在早期診斷中幾乎沒用。因此，腫瘤的早期診斷、以及良性和惡性腫瘤的區分仍然是一個臨床難題，需要新的技術和方法來發現新的腫瘤標志物和提高腫瘤標志物檢測的靈敏度和可信度。骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是一種具有多種功能的分泌性磷酸化糖蛋白，可促進細胞的黏附和遷移，被認為是惡性轉化的分泌性蛋白，分布廣泛。其在惡性腫瘤患者的腫瘤組織和血液中的表達水平，與腫瘤患者篩選、病情預測和預后有著重要的聯系。腫瘤轉移是導致病人復發的主要原因，骨橋蛋白在轉移的腫瘤組織中表達很高，體外研究發現同外源性OPN能夠通過整合素受體促進腫瘤細胞的黏附和遷移，并產生抗凋亡信號，促進腫瘤細胞的生長，具有促進腫瘤細胞遷移的能力。體內實驗表明OPN促進了腫瘤組織的生長，此外OPN可以參與調控多種信號通路，并進一步激活轉移相關基因，促進細胞遷移。OPN通過促進腫瘤細胞生長，誘導局部新生血管形成，抑制轉移微環境對腫瘤細胞的凋亡誘導，促進腫瘤的淋巴轉移等方式參與惡性腫瘤的進展和轉移。骨橋蛋白基于其生物學特性，其作為腫瘤標志物的功能已備受關注，例如：現有技術公開了一種用于多項腫瘤骨轉移標志物并行檢測的液相芯片及其制備方法，該技術方案涉及到以OPN作為腫瘤骨轉移標志物。但是，目前市面上還未有采用OPN用于肝癌檢測的產品。
技術實現思路
基于此，本專利技術的主要目的是提供一種OPN多肽的新應用，具體涉及OPN多肽作為標準品在制備用于定量檢測肝癌標志物的試劑盒中的用途。本專利技術的目的是通過以下技術方案實現的：一種骨橋蛋白多肽作為標準品在制備用于定量檢測肝癌標志物的試劑盒中的用途，所述骨橋蛋白多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。本專利技術的另一目的是提供一種用于骨橋蛋白檢測的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。本專利技術的再一目的是提供上述多肽作為標準品在檢測待測樣本所含骨橋蛋白中的應用。在其中一個實施例中，所述的待測樣本為血液樣本。在其中一個實施例中，所述的檢測采用酶聯免疫法檢測。在其中一個實施例中，所述的檢測采用免疫印跡法檢測。本專利技術的又一目的是提供一種骨橋蛋白ELISA檢測試劑盒，所述的試劑盒包含有上述的多肽作的標準品。本專利技術的還一目的是提供一種骨橋蛋白的ELISA檢測方法，所述檢測方法包括包被、封閉、加抗原、加酶標二抗、加底物顯色和終止的步驟；其中：所述的加抗原步驟包括：將待測樣本、骨橋蛋白標準品溶液分別加入酶標板孔，所述的標準品包括上述的多肽。與現有技術相比，本專利技術具備如下有益效果：本專利技術的專利技術人經過長期研究及大量試驗發現，OPN的含量變化對肝癌的狀態具有明顯的相關性，將其作為標志物并用OPN制備檢測OPN含量的試劑盒，能夠準確輔助診斷肝癌的存在、分期和轉移。專利技術人發現傳統的技術方案通常以OPN原核重組蛋白作為標準品，該標準品不易與特異性抗體結合，導致檢測的可信度受到負面影響。為克服該缺陷，專利技術人進一步提供一種SEQIDNo.2所示的多肽，該多肽是獲取SEQIDNo.1的第56位氨基酸至第76位氨基酸的序列并將第60位脯氨酸(Pro)突變為賴氨酸(Lys)制備而成。以該SEQIDNo.2所示的多肽作為標準品用于OPN檢測時，很容易與OPN的抗體發生特異性免疫結合，確保檢測結果的準確度，提升檢測可信度。并且，該SEQIDNo.2所示的多肽的肽鏈結構非常穩定，不易被降解，確保標準品質量，為獲得可信度高的檢測結果進一步提供了保障；并且該多肽的親水性也比較好，克服了國內生產商研發的重組蛋白溶解性低導致不利于試劑盒的制備的缺陷。附圖說明圖1為實施例1中肝癌標志物的篩選流程圖；圖2為實施例1中訓練組的17種因子的ROC曲線圖；圖3為實施例1中17種因子的交叉驗證示意圖；圖4為實施例1中訓練組的6種因子的ROC曲線圖；圖5為實施例1中6種因子的交叉驗證示意圖；圖6為實施例2中反向蛋白芯片分別檢測β2微球蛋白、IGFBP3蛋白、GP73蛋白、GDF15蛋白、OPN蛋白和AFP蛋白的結果掃描圖；圖7為實施例2的肝癌樣品和健康樣品中的OPN含量對比圖；圖8為不同OPN標準品檢測樣本中的OPN的效果圖。具體實施方式為了便于理解本專利技術，下面將對本專利技術進行更全面的描述。但是，本專利技術可以以許多不同的形式來實現，并不限于本文所描述的實施例。相反地，提供這些實施例的目的是使對本專利技術的公開內容的理解更加透徹全面。除非另有定義，本文所使用的所有的技術和科學術語與屬于本專利技術的技術本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種骨橋蛋白多肽作為標準品在制備用于定量檢測肝癌標志物的試劑盒中的用途，所述骨橋蛋白多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。/n

【技術特征摘要】
1.一種骨橋蛋白多肽作為標準品在制備用于定量檢測肝癌標志物的試劑盒中的用途，所述骨橋蛋白多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。


2.一種用于骨橋蛋白檢測的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。


3.權利要求2所述的多肽作為標準品在檢測待測樣本所含骨橋蛋白中的應用。


4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的待測樣本為血液樣本。


5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：黃若磐，匡治州，黃偉，毛應清，
申請(專利權)人：廣州瑞博奧生物科技有限公司，廣州瀚普創展醫學檢驗實驗室有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44