一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置制造方法及圖紙

本實(shí)用新型專利技術(shù)公開了一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置，包括過濾柱、廢液收集管道、廢液收集桶、單細(xì)胞懸浮液釋放管道和負(fù)壓連接管道，所述過濾柱頂端開口、底端與單細(xì)胞懸浮液釋放管道連接，所述過濾柱內(nèi)部裝有細(xì)胞過濾網(wǎng)，所述過濾柱底部一側(cè)設(shè)有廢液過濾出口，所述廢液過濾出口處設(shè)有廢液過濾網(wǎng)，所述廢液過濾出口通過廢液收集管道與所述廢液收集桶的入口連接，所述廢液收集桶的出口連接有負(fù)壓連接管道。該裝置簡便易操作、全自動(dòng)一體化，使單細(xì)胞懸液制備過程操作簡化、得到的單細(xì)胞質(zhì)量較高且穩(wěn)定。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置
本技術(shù)涉及細(xì)胞生物學(xué)
，具體涉及一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置。
技術(shù)介紹
2011年，《自然方法》雜志(NatureMethods)將單細(xì)胞測序列為年度值得期待的技術(shù)之一；2013年，《科學(xué)》雜志(Science)將單細(xì)胞測序列為年度最值得關(guān)注的六大領(lǐng)域榜首。與此同時(shí)，測序巨頭相繼推出新一代測序儀，為單細(xì)胞測序提供利器，越來越多與單細(xì)胞測序有關(guān)的研究也發(fā)表在頂級期刊上，這些都表明，單細(xì)胞測序已逐漸成為科研熱點(diǎn)，有望成為未來最值得關(guān)注的測序技術(shù)。單細(xì)胞測序與傳統(tǒng)的全基因組測序不同在于，傳統(tǒng)的全基因組測序?qū)ο鬄闃颖局卸鄠€(gè)(百萬或以上)細(xì)胞的混合DNA，得到的結(jié)果只是一群細(xì)胞中信號的平均值，或者只代表其中占優(yōu)勢數(shù)量的細(xì)胞信息，單個(gè)細(xì)胞獨(dú)有的特性被忽視。例如，科學(xué)家想找出哪種突變存在于哪種細(xì)胞中幾乎是不可能的，只存在于少數(shù)細(xì)胞(如早期癌細(xì)胞)中的突變也基本上被掩藏。另一方面，有些樣品稀少無法在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，樣品量不足以進(jìn)行全基因組分析，例如腫瘤循環(huán)細(xì)胞、組織微陣列、早期發(fā)育的胚胎細(xì)胞等。單細(xì)胞測序則是針對單個(gè)細(xì)胞的基因組或轉(zhuǎn)錄組(即DNA或RNA)進(jìn)行測序，與傳統(tǒng)的全基因組測序相比，單細(xì)胞測序不僅測量基因表達(dá)水平更加精確，而且還能檢測到微量的基因表達(dá)子或罕見非編碼RNA，其優(yōu)勢是全方位和多層次的。單細(xì)胞樣本的來源主要有：血液、組織液、組織等。目前組織單細(xì)胞懸浮液的獲得最為困難，操作過程要求低溫、快速以保持細(xì)胞活性、減少細(xì)胞損失；制備的懸液要求干凈、無雜質(zhì)或細(xì)胞團(tuán)以免堵塞微流體芯片，進(jìn)而降低細(xì)胞捕獲率和有效reads數(shù)。目前主要以手動(dòng)制備單細(xì)胞懸浮液為主，整個(gè)制備過程操作繁雜，不易控制細(xì)胞質(zhì)量。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對上述技術(shù)問題，本技術(shù)的目的在于提供一種簡便易操作、全自動(dòng)一體化的單細(xì)胞懸浮液制備裝置，使單細(xì)胞懸液制備過程操作簡化、得到的單細(xì)胞質(zhì)量較高且穩(wěn)定。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本技術(shù)采用以下技術(shù)方案：一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置，包括過濾柱、廢液收集管道、廢液收集桶、單細(xì)胞懸浮液釋放管道和負(fù)壓連接管道，所述過濾柱頂端開口、底端與單細(xì)胞懸浮液釋放管道連接，所述過濾柱內(nèi)部裝有細(xì)胞過濾網(wǎng)，所述過濾柱底部一側(cè)設(shè)有廢液過濾出口，所述廢液過濾出口處設(shè)有廢液過濾網(wǎng)，所述廢液過濾出口通過廢液收集管道與所述廢液收集桶的入口連接，所述廢液收集桶的出口連接有負(fù)壓連接管道。優(yōu)選地，所述單細(xì)胞懸浮液釋放管道上安裝有閉合開關(guān)。優(yōu)選地，所述過濾柱的底端呈倒錐形。更優(yōu)選地，所述廢液過濾出口下沿至過濾柱底端之間的體積為400μL-500μL。優(yōu)選地，所述細(xì)胞過濾網(wǎng)的孔徑大小根據(jù)待過濾細(xì)胞的大小選擇。優(yōu)選地，所述廢液過濾網(wǎng)的孔徑不大于2μm。優(yōu)選地，所述負(fù)壓連接管道的另一端連接有負(fù)壓設(shè)備。與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，本技術(shù)具有的有益效果是：1.本技術(shù)提供的裝置，與現(xiàn)有的手動(dòng)單細(xì)胞懸浮液制備裝置(方法)相比，操作簡便、穩(wěn)定、全自動(dòng)一體化。2.本技術(shù)提供的裝置，實(shí)現(xiàn)了集單細(xì)胞清洗與富集為一體的單細(xì)胞懸浮液制備流程，同時(shí)減少過多操作步驟對樣本的損失，提高單細(xì)胞得率，節(jié)約實(shí)驗(yàn)樣本材料。3.本技術(shù)提供的裝置，操作穩(wěn)定，相比于手工操作，大大降低了批次間的差異；同時(shí)，減少過多的操作對細(xì)胞產(chǎn)生的損傷，確保制備的單細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞活性大于80％。附圖說明圖1為本技術(shù)一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置的整體結(jié)構(gòu)示意圖。其中：1—過濾柱，11—開口，12—廢液過濾出口，13—細(xì)胞過濾網(wǎng)，2—廢液過濾網(wǎng)，3—廢液收集管道，4—廢液收集桶，41—廢液收集桶入口，42—廢液收集桶出口，5—負(fù)壓連接管道，6—單細(xì)胞懸浮液釋放管道，7—閉合開關(guān)。具體實(shí)施方式為了使公眾能充分了解本技術(shù)的技術(shù)實(shí)質(zhì)和有益效果，申請人將在下面結(jié)合附圖對本技術(shù)的具體實(shí)施方式詳細(xì)描述，但申請人對實(shí)施例的描述不是對技術(shù)方案的限制，任何依據(jù)本技術(shù)構(gòu)思作形式而非實(shí)質(zhì)的變化都應(yīng)當(dāng)視為本技術(shù)的保護(hù)范圍。實(shí)施例本技術(shù)提供的一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置，如圖1所示，主要包括：過濾柱1，其頂端具有開口11，開口11通常設(shè)為敞口狀態(tài)，可直接添加液體試劑、樣品；底端呈倒錐形，錐體傾斜坡度可設(shè)為30°，底部一側(cè)設(shè)有廢液過濾出口12，廢液過濾出口12下沿與過濾柱1底端間的體積可設(shè)為500μL，用于收集及富集單細(xì)胞懸浮液；過濾柱1內(nèi)部裝有細(xì)胞過濾網(wǎng)13，細(xì)胞過濾網(wǎng)13的孔徑大小可以根據(jù)細(xì)胞大小選擇合適的濾網(wǎng)孔徑，主要設(shè)置為常用的40μm、70μm、100μm；廢液過濾出口12處設(shè)有廢液過濾網(wǎng)2，可選用2μm孔徑的濾網(wǎng)，以在排除廢液的同時(shí)，阻隔細(xì)胞流出；廢液收集管道3，在廢液過濾出口12處與過濾柱1連接為一體，另一端與廢液收集桶入口41連接；廢液收集桶4，收集單細(xì)胞懸浮液制備過程中產(chǎn)生的廢液，可循環(huán)使用；負(fù)壓連接管道5，一端連接廢液收集桶出口42，另一端連接負(fù)壓設(shè)備(可以采用新為誠-無刷抽打兩用微型氣泵F50觸控型)；單細(xì)胞懸浮液釋放管道6，在過濾柱1的底端與過濾柱1連接為一體，用于將單細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到合適的收集管中，該管道上安裝有閉合開關(guān)7，細(xì)胞過濾完成后，打開該裝置，可將單細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到合適的收集管中。利用上述裝置制備單細(xì)胞懸浮液的工作流程如下(如未特殊說明，所用試劑均為市售實(shí)驗(yàn)室常規(guī)試劑)：1.取0.2g樣本小鼠腦組織(樣本來源于蘇州繪真醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司)，加入3mL組織消化液進(jìn)行消化處理；2.將3mL消化好的組織細(xì)胞液(每次3-5mL為宜，量大可分次加入)，直接轉(zhuǎn)移到該裝置的過濾柱1中(此處選擇細(xì)胞過濾膜孔徑為70μm的單細(xì)胞懸浮液制備裝置)，打開負(fù)壓設(shè)備，開始制備單細(xì)胞懸浮液；3.向該裝置開口11中加入5mL單細(xì)胞懸浮緩沖液PBS(100μM，含0.02％BSA)，用于洗脫組織單細(xì)胞；4.待單細(xì)胞懸浮緩沖液PBS(100μM，含0.02％BSA)液面低于裝置廢液過濾出口12時(shí)，再向該裝置中加入5mL單細(xì)胞懸浮緩沖液PBS(100μM，含0.02％BSA)，用于清洗單細(xì)胞懸浮液中殘余組織消化液；5.待單細(xì)胞懸浮緩沖液PBS(100μM，含0.02％BSA))液面低于裝置廢液過濾出口12時(shí)，關(guān)掉負(fù)壓設(shè)備；注：步驟2-5中，單細(xì)胞懸浮液釋放管道6上的閉合開關(guān)7均呈關(guān)閉狀態(tài)；6.將單細(xì)胞懸浮液收集管放置在單細(xì)胞懸浮液釋放管道6下方，打開閉合開關(guān)7，收集單細(xì)胞懸浮液制備裝置錐形管底的單細(xì)胞懸浮液；7.鏡檢，采用BestBio貝博AO/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒進(jìn)行細(xì)胞活性檢測。采用CountStar智能細(xì)胞分析儀檢測細(xì)胞活性，活細(xì)胞呈綠色或黃綠色，死細(xì)胞呈紅色，輸出的分析結(jié)果如下：實(shí)驗(yàn)名稱：未命名樣品ID：Chamber3稀釋比例：1：1細(xì)胞本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置，其特征在于，包括過濾柱、廢液收集管道、廢液收集桶、單細(xì)胞懸浮液釋放管道和負(fù)壓連接管道，所述過濾柱頂端開口、底端與單細(xì)胞懸浮液釋放管道連接，所述過濾柱內(nèi)部裝有細(xì)胞過濾網(wǎng)，所述過濾柱底部一側(cè)設(shè)有廢液過濾出口，所述廢液過濾出口處設(shè)有廢液過濾網(wǎng)，所述廢液過濾出口通過廢液收集管道與所述廢液收集桶的入口連接，所述廢液收集桶的出口連接有負(fù)壓連接管道。/n

【技術(shù)特征摘要】
1.一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置，其特征在于，包括過濾柱、廢液收集管道、廢液收集桶、單細(xì)胞懸浮液釋放管道和負(fù)壓連接管道，所述過濾柱頂端開口、底端與單細(xì)胞懸浮液釋放管道連接，所述過濾柱內(nèi)部裝有細(xì)胞過濾網(wǎng)，所述過濾柱底部一側(cè)設(shè)有廢液過濾出口，所述廢液過濾出口處設(shè)有廢液過濾網(wǎng)，所述廢液過濾出口通過廢液收集管道與所述廢液收集桶的入口連接，所述廢液收集桶的出口連接有負(fù)壓連接管道。


2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置，其特征在于，所述單細(xì)胞懸浮液釋放管道上安裝有閉合開關(guān)。


3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單細(xì)胞懸浮液制備裝置，其特征在...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張惠丹，戴敬，孫培亞，趙洪玉，
申請(專利權(quán))人：蘇州繪真醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司，
類型：新型
國別省市：江蘇;32