肝素結合蛋白檢測試劑盒及其制備方法技術

本發明專利技術屬于生物技術領域，提供一種肝素結合蛋白檢測試劑盒的制備方法，由1)制備盒體，2)制備檢測試紙，3)制備預制液袋，4)整體組裝，四個步驟組成。2)檢測試紙通過以下詳細步驟進一步制備：貼膜、配置包被液、包被及干燥、組裝。根據本發明專利技術所提供的制備方法所得的肝素結合蛋白檢測試劑盒，具有各項優良的參數性能，具體表現在：檢測限≤0.5ng/mL，準確度測定值與理論值的相對偏差在±5％以內，線性相關系數r大于0.995，重復性變異系數(CV)不大于5％，經4～30℃12個月長時間保存后，仍滿足各項參數指標要求。

【技術實現步驟摘要】
肝素結合蛋白檢測試劑盒及其制備方法
本專利技術屬于生物
，具體涉及一種肝素結合蛋白檢測試劑盒及其制備方法。
技術介紹
肝素結合蛋白(heparin-bindingprotein,HBP)是中性粒細胞來源的顆粒蛋白，其結構包含222個氨基酸的單鏈蛋白，含有8個半胱氨酸殘基，在第100、114或145位天冬氨酸殘基上具有糖基化位點，結構類似于中性粒細胞彈性蛋白，與其同源性為45％。HBP主要是由PMN受外界刺激所釋放，所以正常人血中HBP含量很低，一般不超過10ng/ml。臨床上，當有感染發生時，部分細菌侵入到血管內，菌體本身或者細菌釋放的毒素等物質刺激中細粒細包釋放HBP從而導致血中HBP含量升高。HBP在一般感染時能達到20-30ng/ml，ICU中嚴重感染會更高，可能超過100ng/ml?；诖耍琀BP標志指標具有廣泛的臨床應用，包括但不限制于作為局部感染的診斷指標、輔助診斷尿道感染、對感染性休克發生的預測、對敗血癥中循環衰竭的預測等等。HBP標志相比于PCT、CRP具有獨特的臨床優勢，特別是靈敏度高、特異性強、陽性/陰性檢出率高，感染早期即可檢測出。基于HBP的廣泛應用場景，如何能夠提供一種具有快速、準確、定量、使用方便等效果任一以上的肝素結合蛋白檢測試劑盒，是相關醫療領域內非常迫切的臨床需求。
技術實現思路
為了解決現有技術存在的上述問題，本專利技術目的在于提供一種準確度高、線性好、使用方便的肝素結合蛋白檢測試劑盒及其制備方法。本專利技術所采用的技術方案為：本專利技術提供一種肝素結合蛋白檢測試劑盒，其結構組成包括盒體以及位于盒體內的檢測試紙和預制液袋，預制液袋內裝載有提前預制好的含有兔抗人肝素結合蛋白抗體的溶液。檢測試紙由墊板、NC膜、玻璃纖維素膜和吸水墊組成。NC膜設置在墊板上。玻璃纖維素膜和吸水墊分別設置在NC膜的兩端，玻璃纖維素膜和吸水墊之間的NC膜上設置有包被鼠抗人肝素結合蛋白抗體的檢測線和包被羊抗兔抗體的質控線，檢測線T線靠近玻璃纖維素膜設置，質控線C線靠近吸水墊設置。檢測線T線盒之間的NC膜上還設置有微球墊，微球墊上包被有熒光標記的雞抗兔二抗。根據本專利技術的具體實施方式，本專利技術所提供的肝素結合蛋白檢測試劑盒中，檢測線和質控線上分別優選包被0.5μg/cm鼠抗人肝素結合蛋白抗體和1.0μg/cm羊抗兔抗體。玻璃纖維素膜上進一步優選搭設濾膜，以進行初步的血濾。盒體上優選開設觀察窗和進樣孔，進樣孔的位置與玻璃纖維素膜相互對應，觀察窗的位置與檢測線和質控線對應。本專利技術另一方面提供前述肝素結合蛋白檢測試劑盒的制備方法，主要包括步驟：1)制備盒體，2)制備檢測試紙，3)制備預制液袋，4)整體組裝。其中檢測試紙通過以下詳細步驟進一步制備：(1)貼膜：取NC膜和墊板分別裁剪，然后將NC膜粘貼在墊板上，并在NC膜的中部左側設置檢測線標記線，在NC膜的中部右側設置質控線標記線。(2)配置包被液：用磷酸鹽緩沖液分別配制鼠抗人肝素結合蛋白抗體包被液、羊抗兔抗體包被液和熒光標記雞抗兔二抗包被液。(3)包被及干燥：將配制好的鼠抗人肝素結合蛋白抗體包被液包被在檢測線標記線處形成檢測線，將配制好的羊抗兔抗體包被液包被在檢測線標記線處形成質控線，將配制好的熒光標記雞抗兔二抗包被液包被在微球墊上，分別檢干燥。(4)組裝：將干燥好的微球墊粘貼設置在檢測線左側的NC膜上，將玻璃纖維素膜粘貼在微球墊左側的NC膜上，玻璃纖維素膜與微球墊相互搭接，再將吸水墊粘貼在質控線右側的NC膜上，最后將可選的濾膜粘貼設置在玻璃纖維素膜上即組裝完成形成檢測試紙。根據本專利技術所提供的制備方法制備所得的肝素結合蛋白檢測試劑盒，具有各項優良的參數性能，具體表現在：檢測限≤0.5ng/mL，準確度測定值與理論值的相對偏差在±5％以內，線性相關系數r大于0.995，重復性變異系數(CV)不大于5％，經4～30℃12個月長時間保存后，仍滿足各項參數指標要求。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術做進一步闡釋。實施例本實施例首先提供一種肝素結合蛋白檢測試劑盒，其結構組成包括盒體以及位于盒體內的檢測試紙和預制液袋，預制液袋內裝載有提前預制好的含有兔抗人肝素結合蛋白抗體的溶液。檢測試紙由墊板、NC膜、玻璃纖維素膜和吸水墊組成。NC膜設置在墊板上。玻璃纖維素膜和吸水墊分別設置在NC膜的兩端，玻璃纖維素膜和吸水墊之間的NC膜上設置有包被鼠抗人肝素結合蛋白抗體的檢測線和包被羊抗兔抗體的質控線，檢測線T線靠近玻璃纖維素膜設置，質控線C線靠近吸水墊設置。檢測線T線盒之間的NC膜上還設置有微球墊，微球墊上包被有熒光標記的雞抗兔二抗?？蛇M一步改進增加的限制是檢測線和質控線上分別包被0.5μg/cm鼠抗人肝素結合蛋白抗體和1.0μg/cm羊抗兔抗體?？蛇M一步改進增加的限制是在玻璃纖維素膜上進一步搭設濾膜?？蛇M一步改進增加的限制是可在盒體上開設觀察窗和進樣孔，進樣孔的位置與玻璃纖維素膜相互對應，觀察窗的位置與檢測線和質控線對應。本實施例所提供的肝素結合蛋白檢測試劑盒可通過如下方法制備：1.盒體的制備盒體通體材質宜選擇為有一定堅硬度的醫用材料，比如醫用塑料PVC，其可由預制鑄模成型或拉伸成型或由多塊PVC板拼接而成。盒體內部應設置有固定檢測試紙的機構，以保證在其上開設的觀察窗和進樣孔能夠分別與檢測試紙上的檢測區域和玻璃纖維素膜分別對應，檢測區域即為檢測試紙上包含檢測線和質控線的區域。一般可在盒體的內部相對的兩個側壁上設置容納固定檢測試紙兩端的固定槽，以達到所需效果。盒體應盡量為不透明的，遮光的，以利于熒光檢測信息的順利讀取。盒體內也可以設置單獨容納預制液袋的隔離空腔，預制液袋應當是能夠從盒體內取出以方便使用的，例如可以在隔離空腔的盒體側壁上開設取物孔，并在取物孔上黏貼設置封膜，具體使用時，直接撕開封膜即可。當然，預制液袋也可以是與盒體相互獨立的，其也可以不設置在盒體內，此時，預制液袋與盒體適合使用一個更大的盒子或者袋子進行統一包裝包裹。2.檢測試紙的制備(1)貼膜：取NC膜和墊板分別裁剪，然后將NC膜粘貼在墊板上，并在NC膜的中部左側設置檢測線標記線，在NC膜的中部右側設置質控線標記線。(2)配置包被液：用磷酸鹽緩沖液分別配制鼠抗人肝素結合蛋白抗體包被液、羊抗兔抗體包被液和熒光標記雞抗兔二抗包被液。(3)包被及干燥：將配制好的鼠抗人肝素結合蛋白抗體包被液包被在檢測線標記線處形成檢測線，將配制好的羊抗兔抗體包被液包被在檢測線標記線處形成質控線，將配制好的熒光標記雞抗兔二抗包被液包被在微球墊上，分別檢干燥。(4)組裝：將干燥好的微球墊粘貼設置在檢測線左側的NC膜上，將玻璃纖維素膜粘貼在微球墊左側的NC膜上，玻璃纖維素膜與微球墊相互搭接，再將吸水墊粘貼在質控線右側的NC膜上，最后將可選的濾膜粘貼設置在玻璃纖維素膜上即組裝完成形成檢測試紙本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種肝素結合蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，由以下步驟組成：1)制備盒體，2)制備檢測試紙，3)制備預制液袋，4)整體組裝；/n其中2)檢測試紙通過以下詳細步驟進一步制備：/n(1)貼膜：取NC膜和墊板分別裁剪，然后將NC膜粘貼在墊板上，并在NC膜的中部左側設置檢測線標記線，在NC膜的中部右側設置質控線標記線。/n(2)配置包被液：用磷酸鹽緩沖液分別配制鼠抗人肝素結合蛋白抗體包被液、羊抗兔抗體包被液和熒光標記雞抗兔二抗包被液；/n(3)包被及干燥：將配制好的鼠抗人肝素結合蛋白抗體包被液包被在檢測線標記線處形成檢測線，將配制好的羊抗兔抗體包被液包被在質控線標記線處形成質控線，將配制好的熒光標記雞抗兔二抗包被液包被在微球墊上，分別檢干燥；/n(4)組裝：將干燥好的微球墊粘貼設置在檢測線左側的NC膜上，將玻璃纖維素膜粘貼在微球墊左側的NC膜上，玻璃纖維素膜與微球墊相互搭接，再將吸水墊粘貼在質控線右側的NC膜上，最后將可選的濾膜粘貼設置在玻璃纖維素膜上即組裝完成形成檢測試紙。/n

【技術特征摘要】
1.一種肝素結合蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，由以下步驟組成：1)制備盒體，2)制備檢測試紙，3)制備預制液袋，4)整體組裝；
其中2)檢測試紙通過以下詳細步驟進一步制備：
(1)貼膜：取NC膜和墊板分別裁剪，然后將NC膜粘貼在墊板上，并在NC膜的中部左側設置檢測線標記線，在NC膜的中部右側設置質控線標記線。
(2)配置包被液：用磷酸鹽緩沖液分別配制鼠抗人肝素結合蛋白抗體包被液、羊抗兔抗體包被液和熒光標記雞抗兔二抗包被液；
(3)包被及干燥：將配制好的鼠抗人肝素結合蛋白抗體包被液包被在檢測線標記線處形成檢測線，將配制好的羊抗兔抗體包被液包被在質控線標記線處形成質控線，將配制好的熒光標記雞抗兔二抗包被液包被在微球墊上，分別檢干燥；
(4)組裝：將干燥好的微球墊粘貼設置在檢測線左側的NC膜上，將玻璃纖維素膜粘貼在微球墊左側的NC膜上，玻璃纖維素膜與微球墊相互搭接，再將吸水墊粘貼在質控線右側的NC膜上，最后將可選的濾膜粘貼設置在玻璃纖維素膜上即組裝完成形成檢測試紙。


2.根據權利要求1所述的肝素結合蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：檢測線和質控線上分別包被0.5μg/cm鼠抗人肝素結合蛋白抗體和1.0μg/cm羊抗兔抗體。


3.根據權利要求1所述的肝素結合蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：在玻璃纖維素膜上進一步搭設濾膜。


4.根據權利要求1所述的肝素結合蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，其中3)預制液袋通過以下詳細步驟進一步制備：取100μL30mm...

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊軼軒，
申請(專利權)人：山西康健恩生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：山西;14