一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒及其制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)屬于生物領(lǐng)域，提供一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒的制備方法，由1)盒體制備、2)檢測試紙制備和3)組裝三個步驟組成。步驟2)檢測試紙制備特別是由步驟2.1NC膜貼膜、2.2包被液的配制、2.3NC膜包被及干燥、2.4熒光標(biāo)記墊的熒光微球標(biāo)記和包被、2.5樣品吸收墊處理和2.6裝配組成。通過本發(fā)明專利技術(shù)的制備方法所得的抗繆勒氏管激素檢測試劑盒，其檢測限≤0.1ng/mL、準(zhǔn)確度測定值與理論值的相對偏差在±10％以內(nèi)、線性相關(guān)系數(shù)r≥0.9500、重復(fù)性變異系數(shù)(CV)不大于5％、200.0IU/L的FSH和200.0IU/L的LH特異性參考品特異性測定結(jié)果均≤0.10ng/mL。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒及其制備方法
本專利技術(shù)屬于生物
，具體涉及一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒及其制備方法。
技術(shù)介紹
抗繆勒管激素(anti-Mullerianhormone，AMH)是轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族成員，是由睪丸未成熟的Sertoli細(xì)胞及卵巢竇前卵泡和小竇卵泡的顆粒細(xì)胞所分泌的一種糖蛋白。卵巢內(nèi)的小竇卵泡數(shù)量越多，AMH的濃度便越高。反之，當(dāng)卵泡隨著年齡及各種因素逐漸消耗，AMH濃度也會隨之降低，接近絕經(jīng)期時(shí)，AMH便漸趨于0。基于抗繆勒管激素的特性，其在臨床上被廣泛開發(fā)應(yīng)用作為多種適應(yīng)癥的診斷或輔助診斷工具。具體的應(yīng)用包括但不限制于：1)卵巢儲備功能的評估：育齡女性的AMH與年齡呈負(fù)相關(guān)，AMH是評估年齡相關(guān)生育能力下降的最佳內(nèi)分泌指標(biāo)。30周歲以上女性：早期判斷卵巢是否衰老。40周歲以上女性：預(yù)測絕經(jīng)年齡。2)卵巢早衰的預(yù)測：卵巢功能減退患者血清AMH降低，卵巢早衰患者的AMH濃度幾乎檢測不到。3)多囊卵巢綜合征(PCOS)的輔助診斷：PCOS患者血清AMH水平高于正常者水平2～3倍；AMH水平的變化從一定程度上說明PCOS的治療效果。4)輔助生殖技術(shù)(ART)中對卵巢反應(yīng)性的預(yù)測：預(yù)測卵巢低反應(yīng)和卵巢過度刺激，制定個體化的刺激方案，一定程度上提高妊娠率，防止并發(fā)癥的發(fā)生。5)絕經(jīng)年齡的預(yù)測：絕經(jīng)前15～5年AMH水平成對數(shù)級下降之后低到不可測；運(yùn)用AMH的年齡模型，可早期預(yù)測絕經(jīng)年齡。6)放、化療對性腺毒性損傷的評估：通過監(jiān)測血清AMH水平來評估治療后卵巢損傷的程度，根據(jù)患者生育要求，調(diào)節(jié)治療方案。7)兒童性別發(fā)育異常(DSD)的輔助診斷：可以為患兒是否存在有功能的睪丸組織提供可靠的依據(jù)。8)卵巢顆粒細(xì)胞瘤(GCT)的診斷和檢測：卵巢顆粒細(xì)胞瘤(GCT)患者的AMH水平顯著升高，用于GCT治療的跟進(jìn)監(jiān)控。基于抗繆勒氏管激素的廣泛應(yīng)用場景，如何能夠提供一種具有快速、準(zhǔn)確、定量、使用方便等效果任一以上的抗繆勒氏管激素檢測試劑盒，以滿足相關(guān)醫(yī)療領(lǐng)域內(nèi)非常迫切的臨床需求是亟待解決的技術(shù)問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本專利技術(shù)目的在于提供一種準(zhǔn)確度高、特異性好、線性好、使用方便的抗繆勒氏管激素檢測試劑盒及其制備方法。本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案為：本專利技術(shù)首先提供一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒，其結(jié)構(gòu)組成包括盒體以及位于盒體內(nèi)的檢測試紙。檢測試紙由PVC墊板、NC膜、樣品吸收墊、熒光標(biāo)記墊和吸水墊組成。NC膜粘貼設(shè)置在PVC墊板上，樣品吸收墊和吸水墊分別粘貼設(shè)置在NC膜的兩端，樣品吸收墊和吸水墊之間的NC膜上設(shè)置有檢測線T線和質(zhì)控線C線，檢測線T線靠近樣品吸收墊設(shè)置，質(zhì)控線C線靠近吸水墊設(shè)置。檢測線T線和樣品吸收墊之間的NC膜上還粘貼設(shè)置有熒光標(biāo)記墊。熒光標(biāo)記墊與樣品吸收墊相互搭接。特別是，所述熒光標(biāo)記墊上包被有熒光標(biāo)記的AMH第一單克隆抗體，所述NC膜的檢測線處包被有AMH第二單克隆抗體，所述NC膜的質(zhì)控線處包被有兔抗鼠IgG抗體。根據(jù)本專利技術(shù)的具體實(shí)施方式，在盒體上優(yōu)選開設(shè)觀察窗和進(jìn)樣孔，進(jìn)樣孔的位置與樣品吸收墊相互對應(yīng)，觀察窗的位置與檢測線和質(zhì)控線構(gòu)成的檢測區(qū)域相互對應(yīng)。為了進(jìn)一步達(dá)成本專利技術(shù)的有益效果，本專利技術(shù)還提供前述抗繆勒氏管激素檢測試劑盒的制備方法，由1)盒體的制備、2)檢測試紙的制備、3)組裝，三個步驟組成。其中2)檢測試紙通過以下詳細(xì)步驟進(jìn)一步制備：2.1NC膜貼膜：取NC膜和墊板分別裁剪，將NC膜粘貼在PVC墊板上，NC膜應(yīng)盡量完全覆蓋PVC墊板，或者至少NC膜四周邊沿與PVC墊板相應(yīng)四周的邊沿的距離差在±1mm內(nèi)，形成4mm±0.5mm寬的條板。為了達(dá)到此效果，也可以采用先大規(guī)格NC膜與大規(guī)格PVC墊板粘貼，然后在完成后續(xù)操作后按照需求裁剪成4mm±0.5mm寬的小塊條板的方式進(jìn)行快速處理。2.2包被液的配制：將普通市售的AMH第二單克隆抗體加入磷酸鹽緩沖液，混勻，靜置12h得到0.5mg/ml的AMH第二單克隆抗體包被液。將普通市售的兔抗鼠IgG抗體加入磷酸鹽緩沖液，混勻，靜置12h得到0.3mg/ml的兔抗鼠IgG抗體包被液。2.3NC膜的包被及干燥：在NC膜的中部左側(cè)設(shè)置檢測線標(biāo)記，在NC膜的中部右側(cè)設(shè)置質(zhì)控線標(biāo)記，檢測線標(biāo)記和質(zhì)控線標(biāo)記之間的間距為4.5mm。將配置好的AMH第二單克隆抗體包被液使用定量噴膜儀包被在檢測線標(biāo)記處形成檢測線，將配置好的兔抗鼠IgG抗體包被液使用定量噴膜儀包被在質(zhì)控線標(biāo)記處形成質(zhì)控線。包被完成后40℃下干燥過夜。2.4熒光標(biāo)記墊的熒光微球標(biāo)記和包被制備化學(xué)偶合物墊：將1wt％的海藻糖、0.2wt％酪蛋白和0.1wt％tween用TE緩沖液定容至所需體積，攪拌均勻，置入玻璃纖維膜浸泡15分鐘，取出45℃干燥得到化學(xué)偶合物墊備用。標(biāo)記：熒光微球加入活化液進(jìn)行稀釋，超聲后離心去上清。加入偶聯(lián)液恢復(fù)至原體積，超聲分散，加入AMH第一單克隆抗體混合振蕩反應(yīng)，離心去上清。加入封閉液至原體積，超聲后繼續(xù)振蕩反應(yīng)，離心去上清。加入儲存液至原體積，超聲分散得到熒光微球溶液，2～8℃條件下冷藏備用。包被：將已標(biāo)記好的熒光微球溶液稀釋，通過定量噴膜儀均勻包被在化學(xué)偶合物墊上，45℃干燥過夜得到熒光標(biāo)記墊。2.5樣品吸收墊的處理：配置分別含有1.5％BSA和0.51％TritonX-100的0.1M磷酸鹽緩沖液，然后將樣品墊置入浸泡處理2h，取出并在40℃下干燥得到樣品吸收墊。2.6裝配：將樣品吸收墊粘貼在NC膜的左端，將吸水墊粘貼在NC膜的右端，將已包被并干燥的熒光標(biāo)記墊粘貼在檢測線和樣品吸收墊之間，并且樣品吸收墊和熒光標(biāo)記墊相互搭接。根據(jù)本專利技術(shù)所提供的制備方法制備所得的抗繆勒氏管激素檢測試劑盒，各項(xiàng)優(yōu)良的參數(shù)性能，具體表現(xiàn)在：1)檢測限：≤0.1ng/mL，檢出情況良好；2)準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確度測定值與理論值的相對偏差在±10％以內(nèi)，檢測準(zhǔn)確度較高；3)線性：線性相關(guān)系數(shù)r≥0.9500；4)重復(fù)性：重復(fù)性變異系數(shù)(CV)不大于5％，重復(fù)穩(wěn)定性強(qiáng)；5)特異性：200.0IU/L的FSH和200.0IU/L的LH特異性參考品，在本試劑盒上的測定結(jié)果均≤0.10ng/mL，特異性良好。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本專利技術(shù)做進(jìn)一步闡釋。實(shí)施例本實(shí)施例首先提供一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒，其結(jié)構(gòu)組成包括盒體以及位于盒體內(nèi)的檢測試紙。檢測試紙由PVC墊板、NC膜、樣品吸收墊、熒光標(biāo)記墊和吸水墊組成。NC膜粘貼設(shè)置在PVC墊板上，樣品吸收墊和吸水墊分別粘貼設(shè)置在NC膜的兩端，樣品吸收墊和吸水墊之間的NC膜上設(shè)置有檢測線T線和質(zhì)控線C線，檢測線T線靠近樣品吸收墊設(shè)置，質(zhì)控線C線靠近吸水墊設(shè)置。檢測線T線和樣品吸收墊之間的NC膜上還粘貼設(shè)置有熒光標(biāo)記墊。熒光標(biāo)記墊與樣品吸收墊相互搭接。所述熒光標(biāo)記墊上包被有熒光本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒的制備方法，由1)盒體的制備、2)檢測試紙的制備和3)組裝三個步驟組成；/n其中2)檢測試紙通過以下詳細(xì)步驟進(jìn)一步制備：/n2.1 NC膜貼膜：取NC膜和墊板分別裁剪，將NC膜粘貼在PVC墊板上，NC膜應(yīng)盡量完全覆蓋PVC墊板，或者至少NC膜四周邊沿與PVC墊板相應(yīng)四周的邊沿的距離差在±1mm內(nèi)，形成4mm±0.5mm寬的條板；為了達(dá)到此效果，也可以采用先大規(guī)格NC膜與大規(guī)格PVC墊板粘貼，然后在完成后續(xù)操作后按照需求裁剪成4mm±0.5mm寬的小塊條板的方式進(jìn)行快速處理；/n2.2 包被液的配制：將普通市售的AMH第二單克隆抗體加入磷酸鹽緩沖液，混勻，靜置12h得到0.5mg/ml的AMH第二單克隆抗體包被液；將普通市售的兔抗鼠IgG抗體加入磷酸鹽緩沖液，混勻，靜置12h得到0.3mg/ml的兔抗鼠IgG抗體包被液；/n2.3 NC膜的包被及干燥：在NC膜的中部左側(cè)設(shè)置檢測線標(biāo)記，在NC膜的中部右側(cè)設(shè)置質(zhì)控線標(biāo)記，檢測線標(biāo)記和質(zhì)控線標(biāo)記之間的間距為4.5mm；將配置好的AMH第二單克隆抗體包被液使用定量噴膜儀包被在檢測線標(biāo)記處形成檢測線，將配置好的兔抗鼠IgG抗體包被液使用定量噴膜儀包被在質(zhì)控線標(biāo)記處形成質(zhì)控線；包被完成后40℃下干燥過夜；/n2.4 熒光標(biāo)記墊的熒光微球標(biāo)記和包被/n制備化學(xué)偶合物墊：將1wt％的海藻糖、0.2wt％酪蛋白和0.1wt％tween用TE緩沖液定容至所需體積，攪拌均勻，置入玻璃纖維膜浸泡15分鐘，取出45℃干燥得到化學(xué)偶合物墊備用；/n標(biāo)記：熒光微球加入活化液進(jìn)行稀釋，超聲后離心去上清；加入偶聯(lián)液恢復(fù)至原體積，超聲分散，加入AMH第一單克隆抗體混合振蕩反應(yīng)，離心去上清；加入封閉液至原體積，超聲后繼續(xù)振蕩反應(yīng)，離心去上清；加入儲存液至原體積，超聲分散得到熒光微球溶液，2～8℃條件下冷藏備用；/n包被：將已標(biāo)記好的熒光微球溶液稀釋，通過定量噴膜儀均勻包被在化學(xué)偶合物墊上，45℃干燥過夜得到熒光標(biāo)記墊；/n2.5 樣品吸收墊的處理：/n配置分別含有1.5％BSA和0.51％Triton X-100的0.1M磷酸鹽緩沖液，然后將樣品墊置入浸泡處理2h，取出并在40℃下干燥得到樣品吸收墊；/n2.6 裝配：將樣品吸收墊粘貼在NC膜的左端，將吸水墊粘貼在NC膜的右端，將已包被并干燥的熒光標(biāo)記墊粘貼在檢測線和樣品吸收墊之間，并且樣品吸收墊和熒光標(biāo)記墊相互搭接。/n...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒的制備方法，由1)盒體的制備、2)檢測試紙的制備和3)組裝三個步驟組成；
其中2)檢測試紙通過以下詳細(xì)步驟進(jìn)一步制備：
2.1NC膜貼膜：取NC膜和墊板分別裁剪，將NC膜粘貼在PVC墊板上，NC膜應(yīng)盡量完全覆蓋PVC墊板，或者至少NC膜四周邊沿與PVC墊板相應(yīng)四周的邊沿的距離差在±1mm內(nèi)，形成4mm±0.5mm寬的條板；為了達(dá)到此效果，也可以采用先大規(guī)格NC膜與大規(guī)格PVC墊板粘貼，然后在完成后續(xù)操作后按照需求裁剪成4mm±0.5mm寬的小塊條板的方式進(jìn)行快速處理；
2.2包被液的配制：將普通市售的AMH第二單克隆抗體加入磷酸鹽緩沖液，混勻，靜置12h得到0.5mg/ml的AMH第二單克隆抗體包被液；將普通市售的兔抗鼠IgG抗體加入磷酸鹽緩沖液，混勻，靜置12h得到0.3mg/ml的兔抗鼠IgG抗體包被液；
2.3NC膜的包被及干燥：在NC膜的中部左側(cè)設(shè)置檢測線標(biāo)記，在NC膜的中部右側(cè)設(shè)置質(zhì)控線標(biāo)記，檢測線標(biāo)記和質(zhì)控線標(biāo)記之間的間距為4.5mm；將配置好的AMH第二單克隆抗體包被液使用定量噴膜儀包被在檢測線標(biāo)記處形成檢測線，將配置好的兔抗鼠IgG抗體包被液使用定量噴膜儀包被在質(zhì)控線標(biāo)記處形成質(zhì)控線；包被完成后40℃下干燥過夜；
2.4熒光標(biāo)記墊的熒光微球標(biāo)記和包被
制備化學(xué)偶合物墊：將1wt％的海藻糖、0.2wt％酪蛋白和0.1wt％tween用TE緩沖液定容至所需體積，攪拌均勻，置入玻璃纖維膜浸泡15分鐘，取出45℃干燥得到化學(xué)偶合物墊備用；
標(biāo)記：熒光微球加入活化液進(jìn)行稀釋，超聲后離心去上清；加入偶聯(lián)液恢復(fù)至原體積，超聲分散，加入AMH第一單克隆抗體混合振蕩反應(yīng)，離心去上清；加入封閉液至原體積，超聲后繼續(xù)振蕩反應(yīng)，離心去上清；加入儲存液至原體積，超聲分散得到熒光微球溶液，2～8℃條件下冷藏備用；
包被：將已標(biāo)記好的熒光微球溶液稀釋，通過定量噴膜儀均勻包被在化學(xué)偶合物墊上，45℃干燥過夜得到熒光標(biāo)記墊；
2.5樣品吸收墊的處理：
配置分別含有1.5％BSA和0.51％TritonX-100的0.1M磷酸鹽緩沖液，然后將樣品墊置入浸泡處理2h，取出并在40℃下干燥得到樣品吸收墊；
2.6裝配：將樣品吸收墊粘貼在NC膜的左端，將吸水墊粘貼在NC膜的右端，將已包被并干燥的熒光標(biāo)記墊粘貼在檢測線和樣品吸收墊之間，并且樣品吸收墊和熒光標(biāo)記墊相互搭接。


2.一種抗繆勒氏管激素檢測試劑盒，其特征在于：通過權(quán)利要求1所述的制備方...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊軼軒，
申請(專利權(quán))人：山西康健恩生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：山西;14