一種水產品中無機砷的測定方法，水產品中的無機砷用（１＋１）的鹽酸溶液提取后，通過陰離子交換色譜柱，由流動相將亞砷酸鹽Ａｓ（Ⅲ）、二甲基砷化合物ＤＭＡ、一甲基砷化合物ＭＭＡ、砷酸鹽Ａｓ（Ⅴ）依次洗脫，由于陰離子交換色譜柱對砷酸鹽Ａｓ（Ⅴ）、亞砷酸鹽Ａｓ（Ⅲ）、一甲基砷化合物ＭＭＡ、二甲基砷化合物ＤＭＡ和砷糖ＡｓＳ的吸附能力不同，洗脫的溶液經過硼氫化鉀還原劑和鹽酸發生氫化反應，生成氫化物進入原子化器，與原子熒光聯用進行分析測定；該實驗條件選擇合理，檢測數據準確可靠，不受浸提時間和溫度影響；本發明專利技術既能準確測無機砷ｉＡｓ，同時也能測定有機砷一甲基砷化合物ＭＭＡ和二甲基砷化合物ＤＭＡ，可以應用于水產品中砷的形態測定。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于水產品檢測技術，是一種利用高效液相色譜-氬化物發生原 子熒光光譜聯用(HPLC-HGAFS)形態分析技術測定水產品中無機砷的方法。
技術介紹
當前，元素分析化學的一項前沿內容是對元素的不同形態進行定性和 定量，而不僅僅是測定元素的總量，這主要是因為同一元素的不同形態可 能具有完全不同的化學和毒理性質，砷是其中的一個典型元素。砷的主要 形態有砷酸鹽As (V)、亞砷酸鹽As (III)、 一曱基砷化合物(醒A)、 二 曱基砷化合物(DMA)、三曱基砷的氧化物(TMAO)、砷甜菜堿(AsB)、砷膽堿 (AsC)和砷糖(AsS)等，其中無機砷(iAs)的毒性 很高；而有機砷中僅有畫A和DMA有較小的毒性，其它有機形態大多無毒， 所以無機砷的含量基本能夠反映有毒砷的含量，這也是測量無機砷的衛生 學基礎。砷在水產品中的主要存在形式有5種iAs(劇毒)、DMA(低毒)、 固A(低毒)、AsB(無毒)、AsC(無毒)、AsS(無毒)?，F行的檢測方法"氫化物發生法"(GB/T5009. 11-2003第一法)和"銀 鹽法"(第二法)，在具體^^測結果方面存在較大缺陷。我們研究發現① 氫化物原子熒光法，在測量砷糖(As S)含量較高的海藻類樣品時會出現誤 報，原因在于在前處理過程中，砷糖(AsS)降解成小分子有機砷一一二曱基 砷(DMA)，在氫化物原子熒光光度計上有響應值，使得測量結果顯著偏高； ②銀鹽法因受裝置配套不完善、環境溫度、鋅粒大小不均勻、手工操作精 密度較差的影響，導致平行樣間誤差較大。無機砷是水產品質量檢驗中主要的安全衛生指標，是產品質量標準中 重要的限制性指標之一，其含量測定在質量檢測中具有重要的意義。2006 年關于海藻食品中現國家衛生標準GB19643-2005《藻類制品衛生標準》中 的限量指標和對國標GB/T5009. 11-2003《食品中總砷和無機砷的檢測方 法》的爭議，已經引起國內各方面廣泛重視；目前國際上ISO和CAC標準中尚無測定水產中無機砷的方法標準。
技術實現思路
本專利技術的目的是借助元素形態分析儀，使用高效液相色語-氬化物發生 原子熒光光譜聯用(HPLC-HGAFS)形態分析技術，對其砷的不同形態進行 定性和定量分析，準確測定水產品中有劇毒的無機砷砷酸鹽As (V)、亞 砷酸鹽As (III),準確測定其有低毒的醒A和DMA，從而給出更為準確可 靠的生物學特性。本專利技術是按照以下操作方法完成的本專利技術為高效液相色譜-氫化物發生原子焚光光語聯用(HPLC-HGAFS ) 形態分析方法，包括1、選用的儀器及設備，2、配置試劑與標準溶液， 3、進行測試步驟，4、實驗所用的儀器條件，5、結果計算lj義器及設備HPLC- HGAFS聯用系統；(1) 、 H P L C部分，使用L C -10ATVP高壓液相泵；配有100iiL定量 環的7725i六通進樣閥；配有相同材質填并+保護柱(25mm x 2. 3mm i.d， 12-20 ju m)的PRP-X100 (250mmx4. lmm i. d, 10 ju m)陰離子交換柱(2) 、原子熒光光譜j義；配有激發光源高性能砷空心陰極燈；形態分 析測量軟件；(型號HGAFS-9130);(3 )、水浴恒溫振蕩器(型號SHA-C );(4) 、砂芯過濾器(型號SH/T0093 );(5) 、循環式真空泵(型號SHZ-D);(6) 、酸度計(型號DELTA320 );(7) 、數控超聲清洗器(型號KQ-600DE);(8) 、水系微孔濾膜(O. 45jum);(9) 、氬氣(純度> 99.99%): 2、配置試劑與標準溶液；(1)、試劑；a、 ①鹽酸溶液(50W:量取250mL濃鹽酸，慢慢加入250mL水中， 混勻；②鹽酸溶液(7W:量取280mL鹽酸，慢慢加入3720mL水中，混勻b、 氫氧化鉀溶液(5g/L):稱取氫氧化鉀5g溶于水中，并稀釋至l糊mL:c 、硼氫化鉀溶液(15g/L);稱取硼氫化鉀15g溶于1000mL氬氧化 鉀溶液(5g/ L)中d、 HPLC流動相為15mmol/L(NH4) 2^04溶液，pH用10%甲酸調節至 6，使用之前需經過0.45 jum濾膜過濾并超聲脫氣所有的試劑均是分析純或是優級純，整個實驗都使用超純水;玻璃儀器使 用前需經15%硝酸浸泡24h; (2)、砷的混合標準溶液CH3AsO(ONa )2 6H20 (MMA)和Na2HAs04 7H2OAs (v)從Sigma—Aldrich 購得，(CH3)2As02H(DMA)從Acros購得，1000 ju g/mL的As (III )標準儲備溶 液/人國家標準物質中心購得；a、 通過溶解相應量的畫A、 DMA、 As (V)得到100卯b/mL的各單標溶液； 將As (III)也稀釋至100ppb/mL(四種標液可在4。C水箱存放備用)；b、 混合砷標準溶液稀釋配制(臨用時現配)將以上四種標液逐級稀釋至100ng/mL混合標準溶液，再才艮據下表1配制 表l<table>table see original document page 7</column></row><table>3、進行測試步驟取經粉碎過40目篩的水產品干樣0. 300g-3. OOOg于50mL具塞刻度試 管中，加鹽酸(50% )的溶液20mL混勻，或稱取鮮樣(需搗碎勻 槳)2. 000g-5. OOOg于50mL具塞刻度試管中，并用鹽酸(50%)溶液定容至25mL，混勻；至70。C水浴搖床lh，使試樣充分浸提；取出冷卻定容至25ml, 脫脂棉過濾；取0. 2mL上清液加入10ml管中；加入3. 4mLH20; 0. 4mLHA混 勻后在70。C度水浴放置20min,使As(ni)氧化成As(V);取出后用0.45微 米的水系微孔濾膜過濾，上機測定無機砷值4、 實驗所用的儀器條件(1)、液相色語條件(HPLC):流動相15mmol/L (NH4)2HP04(pH 6.0), 流速lmL/min;進才羊體積100 p L;輔陰+及46mA;蠕動泵轉速65rpm;(2 )、氳化物發生條件(HG ): 還原劑成分1. 5% KBH4 + 0. 5% KOH， 流速6. 0 mL/min;載流成分7% HC1，流速6. 0 mL/min;(3)、原子熒光光譜條件(AFS):燈高性能砷空心陰極燈，193. 7nm; 負高壓285V;燈電流100mA;載氣氬氣，400mL/min;屏蔽氣氬氣，600mL/min;5、 結果計算(1) 、定性開機后按上述條件進行設置，待穩定后，先做標準曲線， 然后測定處理好的樣品溶液；在上述液相色譜和原子焚光條件下用進樣針 吸取O. 3-0. 5mL,采用手動進樣器進行測定，用峰高或峰面積外標法定量； 在上述色語條件下亞砷酸鹽As (III) 、 二曱基砷化合物(DMA)、 一曱基砷 化合物(醒A)、砷酸鹽As ( V)依次保留時間約為2. 599min、 3. 221min、 5. 075min 、 8. 994min;(2) 、定量待測樣品中亞砷酸鹽As (III)、 二曱基砷化合物(本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種水產品中無機砷的測定方法，其特征在于它的方法為高效液相色譜－氫化物發生原子熒光光譜ＨＰＬＣ－ＨＧＡＦＳ聯用形態分析方法，包括：（１）、選用的儀器及設備，（２）、配置試劑與標準溶液，（３）、進行測試步驟，（４）、實驗所用的儀器條件，（５）、結果計算； ?。ǎ保?、儀器及設備：ＨＰＬＣ－ＨＧＡＦＳ聯用系統； ?。保?、ＨＰＬＣ部分，使用ＬＣ－１０ＡＴＶＰ高壓液相泵；配有１００μＬ定量環的７７２５ｉ六通進樣閥；配有相同材質填料保護柱２５ｍｍ×２．３ｍｍｉ．ｄ，１２－２０μｍ的ＰＲＰ－Ｘ１００ ?。玻担埃恚怼粒矗保恚怼 。椋洌保唉蹋黻庪x子交換柱： ?。玻?、ＨＧＡＦＳ－９１３０原子熒光光譜儀；配有激發光源：高性能砷空心陰極燈；形態分析測量軟件： ?。常?、ＳＨＡ－Ｃ水浴恒溫振蕩器； ４）、ＳＨ／Ｔ００９３砂芯過濾器； ?。担ⅲ樱龋冢难h式真空泵； ６）、ＤＥＬＴＡ３２０酸度計； ７）、ＫＱ－６００ＤＥ數控超聲清洗器； ８）、０．４５μｍ水系微孔濾膜； ９）、氬氣：純度≥９９．９９％： ?。ǎ玻?、配置試劑與標準溶液； ?。保?、試劑； ａ、①、５０％的鹽酸溶液，量?。玻担埃恚虧恹}酸，慢慢加入２５０ｍＬ水中，混勻；②、７％的鹽酸溶液：量?。玻福埃恚帖}酸，慢慢加入３７２０ｍＬ水中，混勻： ?。?、５ｇ／Ｌ的氫氧化鉀溶液：稱取氫氧化鉀５ｇ溶于水中，并稀釋至１０００ｍＬ： ?。恪ⅲ保担纾痰呐饸浠浫芤?；取硼氫化鉀１５ｇ溶于１０００ｍＬ的５ｇ／Ｌ氫氧化鉀溶液中： ?。洹ⅲ龋校蹋昧鲃酉酁椋保担恚恚铮欤蹋ǎ危取郏矗荩郏玻荩龋校稀郏矗萑芤?，ｐＨ用１０％甲酸調節至６，使用之前需經過０．４５μｍ濾膜過濾并超聲脫氣： 所有的試劑均是分析純或是優級純，整個實驗都使用超純水；玻璃儀器使用前需經１５％硝酸浸泡２４ｈ； ?。玻?、砷的混合標準溶液： ＣＨ↓［３］ＡｓＯ（ＯＮａ）↓［２］.６Ｈ↓［２］Ｏ（ＭＭＡ）和Ｎａ↓［２］ＨＡｓＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］ＯＡｓ（ｖ），（ＣＨ↓［３］）↓［２］ＡｓＯ↓［２］Ｈ（ＤＭＡ），１０００μｇ／ｍＬ的Ａｓ（Ⅲ）標準儲備溶液： ?。?、通過溶解相應量的ＭＭＡ、ＤＭＡ、Ａｓ（Ⅴ）得到１００ｐｐｂ／ｍＬ的各單標溶液；將Ａｓ（Ⅲ）也稀釋至１００ｐｐｂ／ｍＬ，以上四種標液可在４℃冰箱存放備用： ?。?、混合砷標準溶液稀...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：尚德榮，翟毓秀，寧勁松，王聯珠，冷凱良，
申請(專利權)人：中國水產科學研究院黃海水產研究所，
類型：發明
國別省市：95[中國|青島]
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