糖－氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法技術

本發明專利技術公開了糖－氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法。該方法采用高效凝膠過濾色譜法測定，采用普適校正法繪制標準曲線，繪制相對標準曲線所使用的分子量標準物質是多糖分子量標準品，普適標準曲線是根據糖－氫氧化鐵復合物和多糖分子量標準品的Ｋ、α值校正而得到的；或者采用高效凝膠過濾色譜法測定，繪制分子量標準曲線的標準物質采用若干個不同分子量的與待測糖－氫氧化鐵復合物屬同種物質的糖－氫氧化鐵復合物標準品，不需要通過Ｋ、α值進行校正。該方法誤差較小，精確度較高，采用糖－氫氧化鐵復合物標準品還可避免繁瑣的校正工作。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于分子量測量領域，涉及糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，具體地說是以蔗糖鐵(蔗糖-氫氧化鐵復合物)為代表的糖-氫氧化鐵復合物的分子量及其分布的測定方法。
技術介紹
糖-氫氧化鐵復合物是目前廣泛應用的抗缺鐵性貧血的補鐵劑，特別是應用于腎臟疾病血液透析所導致的缺鐵性貧血。該類復合物的分子量及分子量分布是評價其質量的重要指標之一，研究發現糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布與藥物的藥理作用、臨床療效和鐵的生物利用率存在著密切的關系，因此準確測定糖-氫氧化鐵復合物的分子量和分子量分布對于控制和提高產品質量有著十分重要的意義。糖-氫氧化鐵復合物的結構核心是多核氫氧化鐵(III)，核心的表面被大量非共價結合的糖分子所占據，從而形成平均分子量從幾千到幾百萬道爾頓(da)的大分子復合物。如上所述蔗糖鐵的分子量及分子量分布范圍是評價該產品質量的重要指標，準確測定糖-氫氧化鐵復合物的分子量和分子量分布對于控制和提高產品質量有著十分重要的作用。而傳統的測定大分子多糖分子量的方法多采用高效凝膠過濾色譜法，這是一種測定分子量及分布的相對方法，測量的準確性往往依賴于對分子量標準品的選取。若所選用的標準物質與被測物質的化學結構有較大差異，就會導致測試結果與被測物的實際分子量有較大的差異。目前，一般采用的多糖分子量標準品多為線性分子結構，如葡聚糖、聚麥芽三糖和右旋糖苷等。而糖-氫氧化鐵復合物卻有特殊的結構，它是糖通過其活潑羥基取代多核氫氧化鐵膠體母核表面的水分子與之結合所形成的同心球結構。由蔗糖鐵原子力顯微鏡圖(見圖1)可見蔗糖鐵分子為球狀分子且表面面不光滑，其表面凸出結構是蔗糖絡合形成的，據此推斷蔗糖鐵分子為蔗糖分子通過絡合并包被三價鐵母核形成的同心球狀結構。這與多糖的線性結構有很大的不同，如果直接使用一般的多糖分子量標準品測定糖-氫氧化鐵復合物的分子量及分布顯然會帶來很大的誤差，不利于該類產品的質量控制。鑒于此，為了更準確、更方便的測定這類復合物的分子量，在使用一般多糖分子量標準品繪制分子量標準曲線時，須采用適當的方法對分子量標準曲線進行校正。而另一個方面，選取合適的糖-氫氧化鐵復合物標準品繪制分子量標準曲線，也同樣可以達到準確測定的目的，還可以避免繁瑣的普適校正工作。
技術實現思路
本專利技術的目的是建立一種普適校正法測定糖-氫氧化鐵復合物分子量及其分布的高效凝膠過濾色譜法方法。本專利技術的另一個目的是建立一種無需校正的測定糖-氫氧化鐵復合物分子量及其分布的高效凝膠過濾色譜法方法。本專利技術的普適校正法的原理為Mark-Houwink經驗公式η＝KMα。公式中η為特性粘數，M為分子量，K、α為系數，普適校正法標準曲線的方程式推導如下標準物1以lgM-V0訂定相對標準曲線，得一次方程為V0＝a-blgM1(式1)標準物2由式K1M11+α1=K2M21+α2]]>得lgM2-1+α11+α2lgM1=11+α2lgK1K2]]>lgM1=(1+α2)*(lgM2-11+α2lgK1K2)1+α1]]>(式2)將式2代入式1得V0=a+b1+α1lgK1K2-b(1+α2)1+α1lgM2]]>(式3)式3即為普適校正法標準曲線的方程式。一種測定糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布的方法，該方法為采用高效凝膠過濾色譜法測定，采用普適校正法繪制標準曲線，繪制相對標準曲線所使用的分子量標準物質是多糖分子量標準品，普適標準曲線是根據糖-氫氧化鐵復合物和多糖分子量標準品的K、α值校正而得到的；或者采用高效凝膠過濾色譜法測定，繪制分子量標準曲線的標準物質采用若干個不同分子量的與待測糖-氫氧化鐵復合物屬同種物質的糖-氫氧化鐵復合物標準品，不需要通過K、α值進行校正。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中糖-氫氧化鐵復合物的糖配體是下列雙糖中的一種蔗糖、麥芽糖、乳糖、纖維二糖；或者是下列單糖中的一種葡萄糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖；或者是下列多糖或寡糖中的一種右旋糖苷、淀粉、聚麥芽糖、糊精纖維素。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中高效凝膠過濾色譜法的測定條件為流動相是超純水、0.02～5M硝酸鈉、pH 6.0～10.0之間的0.02～5M醋酸鈉、或者0.02～5M磷酸鹽緩沖溶液；分析柱用一根或多根分離范圍在1,000～2,000,000da之間的多糖分子量分析柱組合而成；分析柱的柱溫在15～55℃之間；流速為0.02ml/min～5.0ml/min。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中流動相選用0.1mol/L的醋酸鈉或0.1mol/L磷酸鹽緩沖液，緩沖液的pH值是6.0～8.0；分析柱用兩根填料為聚羥甲基-甲基丙烯酸樹酯凝膠，填料孔徑分別為120和1000的多糖凝膠柱串聯；柱溫為45℃，流速為0.5ml/min。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中用于繪制普適標準曲線的多糖分子量標準品重均分子量在1000da到2,000,000da之間；繪制相對標準曲線所使用的分子量標準物質是Polymaltotriose或者Dextran，優選Dextran。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中普適的標準曲線中需要K，α進行校正；K值為0.1278～0.0043，α值為0.3897～0.9263。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中當糖-氫氧化鐵復合物的糖配體為蔗糖時，K值為0.1029～0.0050，α值為0.4115～0.9027。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中當糖-氫氧化鐵復合物的糖配體為蔗糖時，溫度為15-55℃，K值為0.0570～0.0121，α值為0.4913～0.7545。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中當糖-氫氧化鐵復合物的糖配體為蔗糖時，溫度為45℃，K值為0.0453～0.0461，α值為0.6000～0.7000。所述的糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中當糖-氫氧化鐵復合物的糖配體為蔗糖時，溫度為45℃，K值為0.0457，α值為0.614。所述的測定糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布的方法，其中當糖-氫氧化鐵復合物的糖配體為蔗糖時，采用高效凝膠過濾色譜法測定，繪制分子量標準曲線的標準物質為若干個不同分子量的蔗糖-氫氧化鐵復合物標準品，不需要通過K、α值進行校正。所述的測定糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布的方法，其中所采用的蔗糖-氫氧化鐵復合物標準品分子量分布(D值)在1.05～1.4之間。所述的測定糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布的方法，其中所采用的蔗糖-氫氧化鐵復合物標準品的重均分子量采用激光散射法測定，其重均分子量在1,000-2,000，000Da之間。所述的測定糖-氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布測定方法，其中蔗糖-氫氧化鐵復合物標準品是通過以下步驟制造的采用FeCl本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種測定糖－氫氧化鐵復合物分子量及分子量分布的方法，其特征在于：采用高效凝膠過濾色譜法測定，采用普適校正法繪制標準曲線，繪制相對標準曲線所使用的分子量標準物質是多糖分子量標準品，普適標準曲線是根據糖－氫氧化鐵復合物和多糖分子量標準品的Ｋ、α值校正而得到的；或者采用高效凝膠過濾色譜法測定，繪制分子量標準曲線的標準物質采用若干個不同分子量的與待測糖－氫氧化鐵復合物屬同種物質的糖－氫氧化鐵復合物標準品，不需要通過Ｋ、α值進行校正。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：田遠年，方文，熊守軍，花傳政，
申請(專利權)人：南京生命能科技開發有限公司，
類型：發明
國別省市：84[中國|南京]