免疫球蛋白制造技術

本發明專利技術涉及免疫球蛋白，例如抗體，其特異性結合制瘤蛋白Ｍ（ＯＳＭ），特別是人ＯＳＭ（ｈＯＳＭ），并調節ＯＳＭ與ｇｐ１３０之間的相互作用。在典型的實施方案中，ＯＳＭ被糖基化。本發明專利技術還涉及調節ＯＳＭ的位點Ⅱ和位點Ⅲ二者與其對應互作配偶體之間的相互作用的抗體。本發明專利技術進一步公開了藥用組合物、篩選方法和藥物治療方法。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及免疫球蛋白，其特異性結合制瘤蛋白M(OSM)，特別是人OSM(hOSM)。更具體地說，本專利技術涉及特異性結合hOSM的抗體。本專利技術還涉及用所述免疫球蛋白治療疾病或障礙的方法、含所述免疫球蛋白的藥用組合物以及生產方法。由下文的描述顯而易見本專利技術的其它方面。
技術介紹
制瘤蛋白M是一種28KDa的糖蛋白，屬于細胞因子的白介素6(IL-6)家族，該家族包含IL-6、白血病抑制因子(LIF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、心肌營養蛋白-1(CT-1)和心肌營養蛋白-1樣細胞因子(參見Kishimoto T等(1995)Blood 861243-1254)，它們共用gp130跨膜信號轉導受體(參見Taga T和Kishimoto T(1997)Annu.Rev.Immunol.15797-819)。OSM最初因其抑制黑素瘤細胞系A375生長而被發現(參見Malik N(1989)等，Mol Cell Biol 92847-2853)。隨后，發現了更多作用，發現其是類似于IL-6家族其它成員的多功能介導物。OSM在各種細胞類型中產生，包括巨噬細胞、活化T細胞(參見Zarling JM(1986)PNAS(USA)839739-9743)、多形核嗜中性粒細胞(參見GrenierA等(1999)Blood 931413-1421)、嗜酸性粒細胞(參見Tamura S等(2002)Dev.Dyn.225327-31)、樹突細胞(參見Suda T等(2002)Cytokine 17335-340)。其存在于胰腺、腎、睪丸、脾、胃和腦(參見Znoyko I等(2005)Anat Rec A Discov Mol Cell Evol Biol 283182-186)以及骨髓(參見Psenak O等(2003)Acta Haematol 10968-75)中。其主要生物作用包括活化內皮(參見Brown TJ等(1993)Blood 8233-7)、激活急性期反應(參見Benigni F等(1996)Blood 871851-1854)、誘導細胞增殖或分化、調節炎性介導物釋放和造血作用(參見Tanaka M等(2003)1023154-3162)、骨重建(參見de Hooge ASK(2002)Am J Pathol1601733-1743)以及促進血管生成(參見Vasse M等(1999)ArteriosclerThromb Vasc Biol191835-1842)和傷口愈合。OSM受體(OSM受體β，“OSMRβ”)在廣泛細胞上表達，包括上皮細胞、軟骨細胞、成纖維細胞(參見Langdon C等(2003)J Immunol170548-555)、神經元、平滑肌、淋巴結、骨、心臟、小腸、肺和腎臟(參見Tamura S等(2002)Mech Dev 115127-131)以及內皮細胞。若干方面的證據提示，內皮細胞是OSM的主要靶。這些細胞在用OSM刺激后表達10-20倍高數量的高親和性和低親和性受體，展現出意義深遠且長期的表型改變(參見Modur V等(1997)J Clin Invest 100158-168)。另外，OSM是Kaposi肉瘤細胞的主要自分泌生長因子，Kaposi肉瘤細胞被認為是內皮起源(參見Murakami-Mori K等(1995)J ClinInvest 961319-1327)。和其它IL-6家族細胞因子一樣，OSM結合跨膜信號轉導糖蛋白gp130。gp130細胞因子的關鍵特征是形成寡聚受體復合物，其包含gp130和一種或多種取決于配體的共受體(綜述于Heinrich PC等(2003)Biochem J.3741-20)。因此，根據所形成受體復合物的組成，這些細胞因子在體外和體內均可介導共有的和獨特的生物活性。人OSM(hOSM)和其它IL-6細胞因子的差別在于，其可與gp130以及兩種共受體LIFR或制瘤蛋白受體(OSMR)中的任一種形成復合物。附圖說明圖1圖解了hOSM與gp130、LIFR和OSMR之間的相互作用。業已破解了hOSM的晶體結構，表明該結構含4個α螺旋束和2個潛在糖基化位點。已通過對hOSM分子定點誘變鑒別出兩個獨立的配體結合位點(參見Deller MC等(2000)Structural Fold Des.8863-874)。第一個稱為位點II(有時稱為“位點2”)，其與gp130相互作用，第二個位點稱為位點III(有時稱為“位點3”)，在相反的分子末端，其與LIFR或OSMR相互作用。誘變實驗表明，LIFR和OSMR的結合位點幾乎相同，但單個氨基酸突變可區分二者。OSM作為前體蛋白被合成，前體蛋白包含25個氨基酸(AA)的疏水N端信號序列和33個氨基酸的C端前肽，這二者被切割，產生成熟OSM。OSM前體蛋白確實具有生物活性，但通過切割C端前肽顯著增加了活性(參見Bruce A.G.等(1992)Prog.Growth Factor Res.4157-170，Malik N等(1989)Mol.Cell Biol.92847-2853)。業已將OSM描述為“緊湊的柱型分子”，具有約20×27×56的維度。有4個α螺旋區(螺旋A 10-37 AA，螺旋B 67-90 AA，螺旋C 105-131 AA和螺旋D 159-185 AA，AA編號在除去信號序列后開始)。螺旋A和C包含“扭折”。螺旋通過兩個突出環(AB環38-66 AA，CD環130-158 AA)連接，排列成兩個反平行對(A-D和B-C)。(參見Deller M.C等(2000)Structure 8；863-874)。OSM經位點II結合gp130似乎可使另一個OSM分子通過位點III相互作用而結合gp130。OSM還通過位點III結合LIFR或OSMR。因此，OSM與其受體形成復合物，該復合物由1個gp130、1個LIFR或OSMR以及2個OSM分子構成。(參見Sporeno E(1994)J.Biol.Chem.26910991-10995，Staunton D等(1998)Prot.Engineer 111093-1102和Gearing D.P(1992)Science 225306-312)。利用誘變發現，對于位點II OSM-gp130結合而言，重要的殘基是Gln20、Gly120、Gln16和Asn124。對于位點III OSM-OSMR結合而言，重要的殘基是Phe160和Lys163。因此，OSM位點II相互作用依賴于hOSM上的Gln20、Gly120、Asn124，并較低程度地依賴于hOSM上的Gln16。已在gp130中鑒別出3個互補殘基(Phe169、Tyr196和Glu282)在OSM和gp130相互作用中特別值得注意。(參見Deller M等(2000)Structure 8863-874，Aasland D等(2002)J.Mol.Biol.315637-646，Timmermann A等(2000)FEBS Lett.468120-124)。SEQ.I.D.NO13列出了由1位開始的hOSM氨基酸序列。MGVLLTQRTLLSLVLALLFPSMASMA本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種治療性抗體，其特異性結合ＯＳＭ，特別是ｈＯＳＭ，并調節ＯＳＭ與ｇｐ１３０之間的相互作用。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：JH埃利斯，A埃安杜瓦爾，V杰馬徹維斯基，C普魯普頓，NT拉普森，MR韋斯特，
申請(專利權)人：葛蘭素集團有限公司，
類型：發明
國別省市：GB[英國]