本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種對(duì)個(gè)體的腫瘤（如肝癌）的易感性和／或預(yù)后進(jìn)行診斷的方法它包括步驟：檢測(cè)該個(gè)體的ＬＬＧＬ１基因、轉(zhuǎn)錄本和／或蛋白，并與正常的ＬＬＧＬ１基因、轉(zhuǎn)錄本和／或蛋白相比較，存在差異就表明該個(gè)體患腫瘤的可能性高于正常人群和／或已經(jīng)患有腫瘤。本發(fā)明專利技術(shù)還提供了相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物
，具體地說(shuō)，本專利技術(shù)涉及一組LLGL1變異體，適用于肝癌組織學(xué)分級(jí)和判斷病人易感性和/或預(yù)后。
技術(shù)介紹
肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常見(jiàn)惡性腫瘤之一，在全世界范圍內(nèi)肝癌的發(fā)病率居于惡性腫瘤第五位(＞500,000/年)，并且肝癌的死亡率高，是腫瘤死亡的第三大原因(Block，T.M.等，Molecular viral oncology of hepatocellularcarcinoma.Oncogene 22(33)5093-107.2003)。這與肝癌的發(fā)病特點(diǎn)有很大的關(guān)系，肝癌發(fā)病通常比較隱秘，早期診斷率低，臨床治療效果差，確診后五年生存率＜5％。肝癌的發(fā)病目前認(rèn)為與HBV(肝炎B病毒，hepatitis B virus)，HCV(肝炎C病毒，hepatitis C virus)感染等可以導(dǎo)致肝組織炎癥性病變及肝硬化等因素有關(guān)，而對(duì)于他的發(fā)病機(jī)理還不清楚(Brnix，J等，F(xiàn)ocus on hepatocellular carcinoma.Cancer Cell 5(3)215-9.2004)。而目前對(duì)于肝癌的治療方案還主要是基于肝癌的大小，個(gè)數(shù)這類影像診斷指標(biāo)，而沒(méi)有特異性的分子指標(biāo)指導(dǎo)臨床治療。隨著腫瘤癌基因，抑癌基因及其它相關(guān)基因的研究深入，腫瘤被認(rèn)為是一種多基因異常的疾病，對(duì)腫瘤實(shí)行個(gè)體化，預(yù)見(jiàn)性的治療有利于提高腫瘤患者的無(wú)瘤生存期及絕對(duì)生存期。因此，確定肝癌相關(guān)基因及其參與肝癌發(fā)病機(jī)理，為肝癌個(gè)體化和預(yù)見(jiàn)性治療提供基礎(chǔ)，也為新的治療方案提供靶點(diǎn)，從而有利于提高肝癌的治愈率(Thorgeirsson，S.等，Huntingfor tumor suppressor genes in liver cancer.Hepatology 37(4)739-41.2003)。lgl(果蠅幼蟲(chóng)巨大致死性基因，lethal giant lavae)，dlg(成蟲(chóng)盤(pán)巨大基因，discslarge，)和scribble(紊亂基因，scrib)三個(gè)基因是果蠅的抑癌基因(tumor suppressor)，這三個(gè)基因在功能上有協(xié)同作用。其中任何一個(gè)基因發(fā)生突變的細(xì)胞及生物學(xué)表型相似，表現(xiàn)為果蠅幼蟲(chóng)的先前視中樞及成蟲(chóng)盤(pán)會(huì)發(fā)生惡性腫瘤樣的增生，細(xì)胞過(guò)度增生失去原有的組織結(jié)構(gòu)(Wodarz，A等，Tumor suppressorslinking cell polarityand growth control.Curr Biol 10(17)R624-6.2000；Bilder，D等，Cell polaritysquaring the circle.Curr Biol 11(4)R132-5，2001)。lgl-/-細(xì)胞植入成蟲(chóng)的體內(nèi)會(huì)形成腫瘤并且會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移(Bilder，D等，Epithelial polarity and proliferation controllinksfrom the Drosophila neoplastic tumor suppressors.Genes Dev 18(16)1909-25.2004)。另外還有證據(jù)顯示這些基因的失活可能會(huì)促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移(Pagliarini，R等，Agenetic screen in Drosophila for metastatic behavior.Science 302(5648)1227-31.2003)。人果蠅同源性致死性巨大基因(lethal giant larvae homolog 1，LLGL1)是人與果蠅lgl同源的基因，同源性達(dá)到27％。lgl在果蠅中起著抑癌基因的作用，如果lgl發(fā)生突變，功能失活，原有的組織形態(tài)消失，并且這種增生的組織接種到成蟲(chóng)體內(nèi)會(huì)不停的增生并發(fā)生廣泛的轉(zhuǎn)移”(Watson，K.L.Drosophila in cancer researchthefirst fifty tumor suppressor genes.J Cell Sci Suppl 1819-33.1994)。許多研究證明lgl在進(jìn)化上很保守(Baek，K.H.等，Structural and functional conservation of the lglrecessive oncogenes(Review).Int J Oncol 24(5)1257-61.2004)。例如在線蟲(chóng)，果蠅，哺乳動(dòng)物及人中都存在同源基因，并且在結(jié)構(gòu)上都包含有多個(gè)WD40區(qū)及保守的絲氨酸序列；在功能上，來(lái)自各個(gè)種屬的lgl之間可以進(jìn)行功能替代(Kim，Y.S.等，F(xiàn)unctional and expression analyses of mgl-1，a mouse orthologue of lethal giantlarvae recessive oncogene.Int J Oncol 23(6)1515-9.2003；Kim，Y.K.等，Complementation of temperature tolerance by rat Rgl-1 recessive oncogene in theabsence of Saccharomyces cerevisiae Sop genes.Oncol Rep 12(5)1105-8.2004)。LLGL1位于人的17號(hào)染色體近著絲點(diǎn)區(qū)，17p11.2-12，近來(lái)的分子學(xué)研究顯示這一區(qū)域可能存在與神經(jīng)外胚層腫瘤相關(guān)基因。目前已有報(bào)道顯示LLGL1在63％的肺癌，76％的乳腺癌，50％的卵巢癌，53％的前列腺癌及40％的黑色素瘤中表達(dá)下降或不表達(dá)，支持LLGL1有可能也是一個(gè)抑癌基因(Grifoni，D.等，Thehuman protein Hugl-1 substitutes for Drosophila lethal giant larvae tumour suppressorfunction in vivo.Oncogene 23(53)8688-94.2004)。近來(lái)Schimanski等人的研究顯示LLGL1在結(jié)腸癌的低表達(dá)與結(jié)腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在293細(xì)胞過(guò)表達(dá)LLGL1會(huì)抑制細(xì)胞的遷移(Schimanski，C.C.等，Reduced expression of Hugl-1，the humanhomologue of Drosophila tumour suppressor gene lgl，contributes to progression ofcolorectal cancer.Oncogene.2005)。由于癌癥是危害人類健康的主要疾病之一。為了有效地治療和預(yù)防腫瘤(如肝癌)，目前人們已越來(lái)越關(guān)注腫瘤的早期診斷和預(yù)后，而目前本領(lǐng)域?qū)τ贚LGL1是否是在肝癌的發(fā)生發(fā)展中的作用還不清楚。因此，現(xiàn)有技術(shù)迫切需要將LLGL1抑癌基因與肝癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)聯(lián)，從而為肝癌的診斷和預(yù)后提供依據(jù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的之一是提供體外檢測(cè)LLGL1的基因和轉(zhuǎn)錄本是否存在變異的方法。本專利技術(shù)的目的之二是提供一組分離的LLGL1突變體核苷酸和氨基酸序列，用以通過(guò)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)分析LLGL1的突變體對(duì)細(xì)胞生物學(xué)特征的影響，從而進(jìn)一步驗(yàn)證本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種體外檢測(cè)ＬＬＧＬ１的基因和轉(zhuǎn)錄本是否存在變異的方法，其特征在于，它包括步驟：檢測(cè)所述的ＬＬＧＬ１基因或轉(zhuǎn)錄本，并與正常的ＬＬＧＬ１基因、轉(zhuǎn)錄本的核苷酸序列相比較，存在選自下組的差異就表明ＬＬＧＬ１的基因和轉(zhuǎn)錄本存在變異： １）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第１１５位至１７９６位堿基被刪除， ２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第１５８位堿基被刪除， ３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第２８２位至１７５９位堿基被刪除， ４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第３４７位至１５５７位堿基被刪除， ５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第３６５位至１５１５位堿基被刪除， ６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第３９２位和３９３位堿基中插入序列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２的３８?jìng)€(gè)堿基， ７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第４１６位至１６９２位堿基被刪除， ８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第７１５位至１２８４位堿基、第１３５３位至１５０６位堿基和第１６１６位至１９０８位堿基被刪除， ９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第８３１位至１８８５位堿基被刪除且于此處插入序列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３的６７個(gè)堿基， １０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第９９８位至１６３４位堿基被刪除， １１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第１１２９位至１４４７位堿基被刪除， １２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第１３５３位至１５０６位堿基和第１６１６位至１８０８位堿基被刪除， １３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第９２位至１６２７位堿基被刪除， １４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第３０８位至１３８１位堿基被刪除， １５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第４３５位至１６１９位堿基被刪除， １６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第６４４位至１７５９位堿基被刪除， １７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第７１５位至８６７位堿基被刪除， １８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第９６９位至１２８６位堿基被刪除的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１或第９６６位至１２８４位堿基被刪除， １９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第７１６位至１２６７位堿基被刪除， ２０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，其中第１１３５位至１４３１位堿基被刪除，...
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳正軍，蘆雪峰，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：31[中國(guó)|上海]
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