作為PPARδ調節標志的PDK制造技術

本發明專利技術涉及ＰＤＫ４作為ＰＰＡＲδ活性的生物標志的用途，以及用于診斷與ＰＰＡＲδ活性調節異常相關疾病如血脂異常、肥胖或胰島素抵抗的方法、用于監測對患有ＰＰＡＲδ活性調節異常相關疾病患者的治療情況的方法和用于鑒定調節ＰＰＡＲδ活性的化合物的方法。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】過氧化物增殖物激活受體(PPAR)是核激素受體超家族成員。PPAR是調節基因表達和控制多種代謝途徑的配體激活型轉錄因子。已描述了三種PPAR亞型，它們是PPARα、PPARδ(也稱作PPARβ)和PPARγ。PPARδ是普遍表達的。PPARα主要表達于肝、腎和心臟。至少有兩種主要的PPARγ的同工型。PPARγ1在大多數組織中表達，而另一個更長的同工型PPARγ2近乎專一性的在脂肪組織中表達。PPAR調節多種生理反應，其包括葡萄糖穩態和脂類穩態和代謝的調節、能量平衡、細胞分化、炎癥和心血管事件。接近半數的冠狀動脈疾病患者的血漿高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)濃度低。在約25年前首次強調了HDL的抗動脈粥樣硬化功能，并且激起了對影響HDL水平的遺傳和環境因素的研究。HDL的保護性功能來自它在膽固醇逆向轉運過程中的作用。HDL介導了從外周組織細胞，包括動脈壁的動脈粥樣硬化損傷中的那些細胞移走膽固醇。隨后，HDL將其中的膽固醇遞送到肝臟和固醇代謝器官，以便使其轉化為膽汁和清除。來自Framingham的研究數據顯示，HDL-C水平是患冠狀動脈疾病風險的預示，該患病風險不依賴于LDL-C(低密度脂蛋白膽固醇)水平(Gordon等人，Am.J.Med.1977，62，707-714)。據估計，在HDL-C小于35mg/dl的20歲及20歲以上的美國人當中，年齡調整的患病人數是16％(男性)和5.7％(女性)。目前，可以使用多種制劑中的煙酸治療實現HDL-C的實質性增長。然而，相當大的副作用限制了該方法的治療潛力。在美國，被診斷為2型糖尿病的1400萬患者中，有90％的人超重或肥胖，而且高比例的2型糖尿病患者脂蛋白濃度異常。總膽固醇＞240mg/dl的患病人數在男性糖尿病患者中是37％，在女性中是44％。對于LDL-C＞160mg/dl患病人數，男女患者的各自比率分別是31％和44％，對于HDL-C＜35mg/dl，分別是28％和11％。糖尿病是由于對胰島素作用的響應發生部分損傷導致患者對血液中葡萄糖水平的控制能力下降的疾病。II型糖尿病(T2D)又稱為非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)，在發達國家80-90％的糖尿病患者為II型糖尿病。在T2D中，胰腺的郎格漢島持續產生胰島素。然而，胰島素作用的靶器官(主要是肌肉、肝臟和脂肪組織)對胰島素刺激表現出完全的抗性。身體通過產生非生理性高水平的胰島素持續補償，在疾病晚期由于胰腺的胰島素產生能力耗盡和衰退使胰島素水平最終下降。因此T2D是伴有包括胰島素抵抗、血脂異常、高血壓、內皮細胞功能異常和炎性動脈粥樣硬化在內的多種共病的心血管代謝綜合征。用于血脂異常和糖尿病的一線治療通常包括低脂和低糖飲食、運動和減輕體重。然而，順應性可以是適度的，隨著疾病發展，需要使用諸如用于血脂異常的他汀類和貝特類脂調節劑和諸如用于胰島素抵抗的磺酰尿或二甲雙胍的低血糖藥物治療多種代謝缺陷。近來引入的一類有前景的新藥能夠恢復患者對其自身胰島素的敏感性(胰島素致敏劑)，由此使血糖和甘油三酯水平恢復正常，并且在很多情況下避免或減少對外源胰島素的需要。吡格列酮(ActosTM)和羅格列酮(AvandiaTM)屬于噻唑烷二酮(TZD)類PPARγ激動劑并且是該類藥物中第一個在多個國家獲準用于治療NIDDM的藥物。然而，這些化合物受到包括少見但嚴重的肝毒性(如使用曲格列酮所見)在內的副作用的影響。它們還會增加患者體重。因此，急需新的、更有效的并且具有更高的安全性和更低的副作用發生率的藥物。近來研究提供證據表明，PPARδ的激動作用將使化合物具有提高的治療潛力(即此類化合物應該能夠改善脂譜)、與當前所用治療相比對HDL-C增加具有更好的影響以及對胰島素水平正常化具有額外積極的影響(Oliver等人；Proc Nat Acad Sci USA 2001；985306-11)。新近觀察還表明，PPARδ激動劑除了具有眾所周知的降低甘油三酯的功能之外，還對胰島素致敏具有不依賴于PPARα介導的的影響(Guerre-Millo等人；J BiolChem 2000；27516638-16642)。因此，選擇性的PPARδ激動劑或具有額外的PPARα活性的PPARδ激動劑具有更好的治療功效而沒有在使用PPARγ激動劑時所出現的體重增加的副作用。本專利技術涉及PPARδ調節的標志以及用于診斷與PPARδ活性調節異常相關疾病的方法、用于監測對患有PPARδ活性調節異常相關疾病的患者的治療情況的方法和用于鑒定調節PPARδ活性的化合物的方法。編碼丙酮酸脫氫酶激酶同工酶4(PDK4)的基因被鑒定為PPARδ的直接靶基因，而且該基因可以用作PPARδ的生物標志。PDK4涉及對禁食的代謝反應。PDK4曾經作為PPARα的靶基因被描述過(Sugden等人，Diabetes.2001；50(12)2729-2736)。然而新近研究提出，在某些組織和細胞中PPARδ對PDK4基因的作用至少與PPARα同樣大。特別是在肌細胞中PDK4基因主要由PPARδ激活。本專利技術提供PDK4用作檢測或監測PPARδ調節的標志的用途。優選地，PDK4用作檢測或監測肌細胞中PPARδ調節的標志。PDK4還可以用于確定肌細胞中的毒性。肌細胞可以是骨骼肌細胞或心肌細胞。如本文所用的術語“調節”涉及PPARδ轉錄活性的激活或抑制。因此，PDK4可以作為PPARδ活性調節的標志。如本文所用的術語“標志”意指核酸或多肽。本專利技術還涉及將PDK4作為診斷涉及PPARδ活性調節異常的疾病諸如血脂異常、肥胖或胰島素抵抗的標志。因此，PDK4可以作為檢測PPARδ活性調節的標志。本專利技術還提供了檢測或監測宿主中PPARδ活性的方法，其包括定量PDK4 mRNA的表達水平。代表性的小鼠PDK4 cDNA示于SEQ.IDNO1。在上文所述方法的一個實施方案中，PDK4的mRNA表達水平是相對于對照確定的。宿主可以是動物、組織、細胞或任何其它能夠進行RNA轉錄(包括體外轉錄)的生物系統。優選地，動物是非人動物。對照可以是不同宿主的PDK4 mRNA表達水平。此外，本專利技術提供了確定測試化合物是否調節宿主中PPARδ活性的方法，其包括a)將宿主暴露于測試化合物，和b)定量PDK4的mRNA表達水平。在上文所述方法的一個實施方案中，PDK4的mRNA表達水平是相對于對照確定的。宿主可以是動物、組織、細胞或任何其它可以進行RNA轉錄(包括體外轉錄)的生物系統。優選地，動物是非人動物。對照是未處理宿主中的PDK4 mRNA表達水平，該宿主可以是處理前的上述宿主或不同的宿主和/或經過適當時間處理后達到處理前正常化水平的上述宿主。在上文所述方法的優選的實施方案中，調節PPARδ活性的化合物是拮抗物或者激動劑。本專利技術還提供了用于監測對患有與PPARδ活性調節異常相關疾病例如血脂異常、肥胖或胰島素抵抗的患者的治療情況的方法，其包括步驟a)從分離自使用PPARδ活性調節物所治療患者的肌細胞純化mRNA，和b)測定PDK4的mRNA表達。在上文所述方法的一個實施方案中，PDK4的mRNA表達水平是相對于對照確定的。宿主可以是動物、組織、細胞或任何其它可以進行RNA轉錄(包括體外轉錄)的生物系統。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
ＰＤＫ４，其作為確定ＰＰＡＲδ活性的生物標志。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：RG克萊爾，C加爾德，M邁耶，MB賴特，
申請(專利權)人：弗哈夫曼拉羅切有限公司，
類型：發明
國別省市：CH[瑞士]