一種代替陽性血清用作診斷試劑標準品的交聯復合物及其作為標準品的使用方法技術

本發明專利技術涉及一種可以代替陽性血清用作診斷試劑標準品的復合物。該復合物是抗原特異性抗體與人免疫球蛋白的交聯復合物，抗原特異性抗體通過單克隆抗體技術或者通過抗原免疫動物獲得的抗血清制備的。本發明專利技術還揭露了一種該復合物的使用方法，該方法至少包括如下步驟：ａ．用抗原免疫動物，獲得的特異性抗體；ｂ．用交聯劑將所述特異性抗體和所述人免疫球蛋白交聯；ｃ．將所述交聯后的抗體梯度稀釋，繪制標準曲線；以及，ｄ．所述交聯后的所述抗體作為標準品應用于定量診斷檢測方法中。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物醫學領域，有關于一種新的可用作診斷試劑標準品的復合物及其作為診斷試劑標準品的使用方法，尤其有關于一種可以代替陽性血清用作診斷試劑標準品的抗原特異性抗體與人免疫球蛋白的交聯復合物及其作為診斷試劑標準品的使用方法。
技術介紹
抗體是在對抗原刺激的免疫應答中，由B淋巴細胞產生的一類糖蛋白，分子基本結構包括兩條完全相同的重鏈(H鏈)和兩條完全相同的輕鏈(L鏈)組成，輕、重鏈之間和兩重鏈之間由二硫鍵連接。根據重鏈恒定區的不同，抗體分為5類，即IgG、IgM、IgA、IgE和IgD，IgG的重鏈分子為γ鏈，IgM、IgA、IgE和IgD的重鏈分別為μ、α、ε和δ鏈，多肽重鏈不同，使得各類抗體在不同類型的免疫反應以及免疫應答過程中的特定時期發揮不同的作用。盡管有5種不同的重鏈，但輕鏈只有兩種，即κ和λ鏈(E.哈洛，D.萊恩.《抗體技術實驗指南》.)。輕鏈大約有220個氨基酸殘基，分為兩個區，每區大約含有110個氨基酸殘基，靠近氨基端的區是異質性的可變區(V區)，靠近羧基端的是恒定區(C區)。IgG重鏈大約有440個氨基酸殘基，包括一個可變區和3個恒定區，每一個區域由110個氨基酸殘基組成，不同類的重鏈可能有不同數量的恒定區，如IgM有1個可變區和4個恒定區。一條重鏈和一條輕鏈的可變區結合形成一個抗原結合部位。可變區的不均一性可以用來啟動有效的免疫反應，而形成龐大抗體種類。但是序列的不一致性并非隨機發生在所有可變區，而是集中分布在一些由5-10個氨基酸殘基組成的高變區，重鏈和輕鏈各有3個高變區，這些高變區組成了抗體和抗原結合的主要接觸殘基，而且位于與抗原相互作用的短氨基酸殘基環上。因為高變區是與抗原真正結合的部位，故又稱為互補決定區(complementarydetermining regions，CDRs)。可變區提高抗原結合位點和特異性，恒定區決定抗體的功能，在所有抗體的恒定區均提供了一系列的結合部位，發揮重要功能，如提供了和Fc受體細胞結合的功能區，促進了巨噬細胞和粒細胞的吞噬及促進了淋巴細胞和NK細胞發生抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用。還提供了結合補體鏈反應的重要區域，促進了外來入侵抗原的溶解。抗原和抗體之間的高度特異性結合的特性，使得它們成為理想的臨床診斷試劑。據統計，現有臨床診斷中，50％的檢測項目是通過抗體或抗原的檢測實現的。免疫分析提供了快速和敏感的檢測傳染病原物、生理指標、過敏、自身免疫性疾病、癌癥、藥物代謝等的實驗方法。手動和自動免疫分析通常使用特定抗體來檢測特異抗原或相關抗原。現在已經有了很多種免疫分析方法，但主要可以分為兩大類競爭性和非競爭性分析。抗體或抗原通過共價或非共價交聯于固相載體上，例如，多孔或無孔材料、乳膠顆粒、磁性材料、微載體、玻璃珠、膜、微孔和塑料管等。根據分析方法的特性決定固相材料和抗原/抗體標記方法。如，在一些免疫分析中，無需標記，如檢測可觀察到的血紅細胞表面的抗原時，可通過凝集反應判斷。另外，抗原-抗體反應也可生成可觀測的變化。在多數情況下，免疫檢測中都包括一種信號分子或“標記物”標記的抗原或抗體。這種信號分子或“標記物”自身是可以檢測的，或通過和其他一種/幾種其他化合物反應來產生可檢測信號。信號分子包括染料、同位素(如125I，131I，32P，3H，35S，14C)、熒光材料、化學發光材料、微粒(可見或熒光)、核酸、復合物或催化劑如酶等(如堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶等)。在使用酶標記時，還需要化學、熒光或可見光生成底物產生可檢測信號。時間分辨熒光分析法、內部反射熒光法、核酸擴增(PCR)和拉曼光譜分析法也有應用。免疫分析已經用于體液如血漿、血清、腦脊髓液、唾液、淚液、鼻液或組織和細胞水溶液抽提物的檢測。兩種常用的形式用于人體特定抗體的檢測(1)抗原包被，人類的體液包含特定的抗體，可以和抗原起反應，然后，抗體結合包被的抗原，用標記的抗人抗體(抗抗體，又稱二抗)檢測；(2)抗體包被，人類的體液包括特定的抗原，可以和包被抗體起反應，然后，用標記的針對同一抗原不同表位的第二個抗體檢測；在這兩種方法中，抗體可以是單抗也可以是多抗。抗體是機體對外來分子、微生物或者其他因子免疫應答產生的免疫球蛋白，在一定的條件下，免疫系統發生紊亂，也會針對自身抗原產生免疫應答，產生自身抗體，導致機體的自身組織和器官出現病理性改變并出現相應的臨床表現，這類疾病統稱為自身免疫性疾病。自身免疫性疾病在歐洲和北美的發病率高達5％，在美國總患病人數約為一千三百萬，自身免疫性疾病是繼癌癥和心血管疾病的第三大類疾病，其中類風濕性關節炎的發病率為1％(Advances inthe Laboratory Diagnosis of Autoimmune Diseases，Business Briefing Global Health Care2002，Issue 3.)，這些疾病的診斷除了各自不同的臨床癥狀之外，患者血清中的抗體的檢測是診斷的關鍵性指標。因許多抗體的滴度和疾病的發生、發展和預后有很大關聯性，如抗肝細胞漿I型抗原抗體(Liver Cytosol Antigen type 1 Autoantibodies，LC-1)滴度與疾病活動程度、血清轉氨酶和丙種球蛋白水平明顯相關。高效價的抗-LC1只在有著高活動度的慢性肝炎或肝硬化中檢測到(Lenzi M，Mantotti P，Muratori L，Cataleta M，et al.Liver cytosolic 1antigen-antibody system in type 2 autoimmune hepatitis and hepatitis C Virusinfection.Gut，1995，36749-754.)。抗-LC1對皮質類固醇和硫唑嘌呤的療效沒有預測意義，LC-1是反映疾病進程和治療效果的一個較好的血清免疫學指標。因此對自身抗體的定性，和進一步定量至關重要。對抗體的檢測，除了明確存在以外，還應對其類和亞類進行鑒定，一般來說，IgM類主要常見于急性感染性疾病，IgG4亞類主要見于器官特異性自身免疫病，而IgG1，IgG3主要見于器官非特異性自身免疫病(鄧安梅，仲人前，孔憲濤.自身免疫病患者可抽提核抗體譜與體液免疫的關系.中華醫學檢驗雜志，1999，22299-300.)。臨床診斷試劑盒一般都包括標準品或陰性和陽性對照品，定量自身抗體診斷試劑盒的標準品往往來自于抗體滴度較高的陽性血清的系列稀釋品，或直接使用不同滴度的病人血清。但用病人血清做標準品有很多缺點1)很難獲得具有高滴度，高特異性的病人血清；2)個體之間的抗體滴度和特異性差異性較大，難以標準化；3)由于血清是多抗，具有不同的抗體類型、親和性和特異性，限制了它的應用；4)價格昂貴，由于資源的限制，可能不能保證標準品的產量。因此，開發生產標準品的方法，用以檢測特異性抗體的水平具有重要意義。人鼠嵌合抗體可以用于人血清抗體檢測的標準品，用于制備標準曲線(美國專利6,015,662)，但該方法具有很大的局限性1)工藝非常復雜，包括動物免疫，細胞融合，單抗的篩選，抗體基因克隆，人鼠嵌合基因工程抗體的構建和表達等，時間長，費用高；2)每次構建本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種可以代替陽性血清用作診斷試劑標準品的復合物，其特征是：　　　　所述復合物是抗原特異性抗體與人免疫球蛋白的交聯復合物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊子義，倪健，羅鵬，魏國蘭，陳聞卓，司徒維娜，
申請(專利權)人：上海富純中南生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]