檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法技術

檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法，涉及中藥制劑的質量控制方法，具體是建立指紋圖譜以檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法。方法為：（ａ）參照品溶液的制備（ｂ）供試品溶液的制備（ｃ）色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相為ｐＨ４．５０～５．０５的０．０５～０．１０ｍｏｌ／Ｌ醋酸鈉緩沖液與２０～８０％的乙腈水溶液組成的梯度洗脫液；柱溫：３０～５０℃；熒光檢測：激發(fā)波長為２５０ｎｍ，發(fā)射波長為３９５ｎｍ流速：０．５～１．５ｍＬ.ｍｉｎ－１；時間：３０～８０ｍｉｎ；（ｄ）測定：高效液相色譜法得指紋圖譜。本方法能有效表征夏桑菊制劑的質量，有利于監(jiān)控產(chǎn)品質量；具有方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好；可快速、準確地鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)蝺?yōu)劣。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術涉及中藥制劑的質量控制方法，具體地說是采用高效液相色譜法建立指紋圖譜以檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的一種方法。
技術介紹
夏桑菊制劑是國家批準上市的公知產(chǎn)品，它由中藥材夏枯草、桑葉、野菊花為原料制成，具有清肝明目、疏風散熱、除濕痹、解瘡毒的功能，用于風熱感冒、目赤頭痛、高血壓、頭暈耳鳴、咽喉腫痛、療瘡腫毒等癥。夏桑菊制劑在中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十五冊已有收載，是深受歡迎的中藥制劑，現(xiàn)已有夏桑菊無糖顆粒劑，夏桑菊口服液，夏桑菊飲料等劑型上市，用公開的夏桑菊制劑處分，一般技術人員很容易用常規(guī)的技術制備其它的制劑如膠囊劑、片劑、合劑等。國家和企業(yè)對夏桑菊顆粒的質量控制主要采用薄層色譜法鑒別是否有主藥夏枯草的熊果酸的成分；楊冬梅等在文獻“夏桑菊沖劑的質量標準研究”安徽醫(yī)藥，2001，5(3)218報道了用分光光度法測定夏桑菊制劑中總黃酮的含量；馬穩(wěn)等在雜志“分析科學學報”2004，20(3)284公開了用高效液相色譜紫外可見檢測夏桑菊中熊果酸的分析方法；黃淑彰在文獻“現(xiàn)代中藥研究與實踐”2004，18(3)33報道了采用HPLC法測定了夏桑菊顆粒中熊果酸的含量；熊國營等在文獻“江西中醫(yī)學院學報”2004，16(6)48)中報道了用HPLC法測定顆粒中所含活性成分綠原酸的含量方法。以上均是針對個別成分進行鑒別或含量測定的方法，難以全面表征復方夏桑菊制劑的物理化學特征，因此，對復方夏桑菊制劑的質量控制方法有待進一步完善。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的是提供一種有效控制夏桑菊制劑質量的檢測方法，主要是建立指紋圖譜來。為達到本專利技術的目的所采用的技術方案用高效液相色譜法建立指紋圖譜，，具體方法包括如下步驟 (a)參照品溶液的制備取天門冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸17種標準品用純水配成濃度均為100μmol·L-1的混合氨基酸對照品溶液，取混合氨基酸對照品溶液20μL放入干燥管中，加入160μL硼酸緩沖液，混和并加入20μL 1％的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液，混和15min，樣品管封口，放于60℃烘箱中加熱10分鐘，冷卻，作為參照品溶液。(b)供試品溶液的制備精密稱取夏桑菊固體制劑0.1～10g或夏桑菊液體制劑0.01～10mL，置1～50mL容量瓶中，加水溶解，并加水至刻度，搖勻，用超微孔濾膜過濾，取過濾液10～100μL放入干燥管中，加入80～500μL硼酸緩沖液，混和并加入10～100μL體積濃度為0.1～5％的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯乙腈溶液，混和10～30秒鐘，樣品管封口，于45～90℃烘箱中加熱30～5分鐘后放冷，即得供試品溶液；(c)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相為pH為4.50～5.05的0.05～0.10mol/L醋酸鈉緩沖液(流動相A)與20～80％的乙腈水溶液(流動相B)組成的梯度洗脫液；柱溫30～50℃；熒光檢測激發(fā)波長為250nm，發(fā)射波長為395nm；流速0.5～1.5mL·min-1；時間30～80min；(d)測定精密吸取供試品溶液5～25μL注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。本專利技術可優(yōu)選如下方法檢測(b)供試品溶液的制備精密稱取夏桑菊有糖顆粒劑1.6g或夏桑菊飲料60μL置5mL容量瓶，加水溶解至刻度，搖勻，用超微孔濾膜過濾，取20uL濾液至干燥管中，加入160uL硼酸緩沖液，混和并加入20uL體積濃度為1％的6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-氨基甲酸酯的乙腈溶液，混和15秒鐘，樣品管封口，于60℃烘箱中加熱10分鐘后放冷，即得；(c)色譜條件色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相為pH是5.05的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液(A相)與60％乙腈組成的梯度洗脫液(B相)；柱溫37℃；流速1.0mL.min-1；分析時間50min；在步驟(c)中，所述的梯度洗脫，優(yōu)選梯度洗脫程序以如下體積濃度配制進行0分鐘時，流動相A為100％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0％的60％乙腈溶液0.5分鐘時，流動相A為100％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0％的60％乙腈溶液；1分鐘時，流動相A為99％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為1％的60％乙腈溶液；10分鐘時，流動相A為99％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為1％的60％乙腈溶液；19分鐘時，流動相A為93％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為7％的60％乙腈溶液；25分鐘時，流動相A為90％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為10％的60％乙腈溶液；38分鐘時，流動相A為67％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為33％的60％乙腈溶液；39分鐘時，流動相A為67％的0.05％醋酸鈉緩沖液、流動相B為33％的60％乙腈溶液；40分鐘時，流動相A為0％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為100％的60％乙腈溶液；45分鐘時，流動相A為100％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0％的60％乙腈溶液；50分鐘時，流動相A為100％的0.05mol/L醋酸鈉緩沖液、流動相B為0％的60％乙腈溶液。具體見下表 按照本專利技術方法測定廣州星群(藥業(yè))股份有限公司生產(chǎn)的夏桑菊顆粒劑中氨基酸類成分建立的指紋圖譜，指紋圖譜中主要有有12個特征共有峰。其中4個為人體必需氨基酸，分別為9號峰纈氨酸(Val)、10號峰異亮氨酸(Ile)、11號峰亮氨酸(Leu)、12號峰苯丙氨酸(Phe)，具體如下1號峰為天門冬氨酸，平均保留時間RT為19.54min，RSD為0.25％，2號峰為絲氨酸，平均保留時間RT為20.45min，RSD為0.25％，3號峰，平均保留時間RT為23.37min，RSD為0.16％，4號峰，平均保留時間RT為25.61min，RSD為0.17％，5號峰，平均保留時間RT為26.36min，RSD為0.27％，6號峰，平均保留時間RT為30.19min，RSD為0.24％，7號峰為脯氨酸，平均保留時間RT為30.60min，RSD為0.14％，8號峰，平均保留時間RT為31.69min，RSD為0.14％，9號峰為纈氨酸，平均保留時間RT為35.35min，RSD為0.13％，10號峰為異亮氨酸，平均保留時間RT為38.84min，RSD為0.12％，11號峰為亮氨酸，平均保留時間RT為39.56min，RSD為0.12％，12號峰為苯丙氨酸，平均保留時間RT為40.08min，RSD為0.12％。RT為42min以后出現(xiàn)的峰為溶劑峰。用本專利技術所提供的方法可測定夏桑菊制劑中氨基酸類成分，所說的制劑包括固體制劑和液體制劑如含糖顆粒劑，無糖顆粒劑、片劑，膠囊劑，飲料，合劑、口服液等。用本方法測定廣州星群(藥業(yè))股份有限公司所生產(chǎn)的夏桑菊含糖顆粒劑、無糖顆粒劑、片劑、膠囊劑、飲料、口服液等制劑均能得到相同、相近似的指紋圖譜。不同廠商生產(chǎn)的夏桑菊制劑由于原材料的不同，生產(chǎn)工藝不完全相本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種檢測夏桑菊制劑中氨基酸類成分的方法，其特征在于采用高效液相色譜法建立指紋圖譜，具體包括如下步驟：（ａ）參照品溶液的制備：取天門冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、纈氨 酸、蛋氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸１７種標準品用純水配成濃度均為１００μｍｏｌ.Ｌ↑［－１］的混合氨基酸對照品溶液，取混合氨基酸對照品溶液２０μＬ放入干燥管中，加入１６０μＬ硼酸緩沖液，混和并加入２０μＬ１％的６－氨基喹啉基－Ｎ－羥基琥珀酰亞氨基－氨基甲酸酯的乙腈溶液，混和１５ｍｉｎ，樣品管封口，放于６０℃烘箱中加熱１０分鐘，冷卻，作為參照品溶液。（ｂ）供試品溶液的制備：精密稱取夏桑菊固體制劑０．１～１０ｇ或夏桑菊液體制劑０．０１～１０ｍＬ置１～５０ｍＬ容 量瓶中，加水溶解，并加水至刻度，搖勻，用超微孔濾膜過濾，取過濾液１０～１００μＬ放入干燥管中，加入８０～５００μＬ硼酸緩沖液，混和并加入１０～１００μＬ體積濃度為０．１～５％的６－氨基喹啉基－Ｎ－羥基琥珀酰亞氨基－氨基甲酸酯的乙腈溶液，混和１０～３０秒鐘，樣品管封口，于４５～９０℃烘箱中加熱３０～５分鐘后放冷，即得供試品溶液；（ｃ）色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相是ｐＨ為４．５０～５．０５的０．０５～０．１０ｍｏｌ／Ｌ醋酸鈉緩沖液與２ ０～８０％的乙腈水溶液組成的梯度洗脫液；柱溫：３０～５０℃；熒光檢測：激發(fā)波長為２５０ｎｍ，發(fā)射波長為３９５ｎｍ；流速：０．５～１．５ｍＬ.ｍｉｎ↑［－１］；時間：３０～８０ｍｉｎ；（ｄ）測定：精密吸取供試品溶液５～２５μＬ注入高效 液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：孫維廣，柯雪紅，蘇廣豐，姚江雄，方鐵錚，
申請(專利權)人：廣州星群藥業(yè)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：81[中國|廣州]