可溶性CD164在炎性和/或自身免疫性疾病中的應用制造技術

本發明專利技術涉及包含人ＣＤ１６４的細胞外區域的可溶蛋白新的治療用途，特別是用于治療炎性和／或自身免疫性疾病。（*該技術在2024年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及炎癥和自身免疫疾病的領域，特別是涉及炎性和/或自身免疫疾病的預防和/或治療用的新蛋白質的發現。
技術介紹
以下討論是為了易于對本專利技術的理解，而不是意指或者認為其為本專利技術的現有技術。CD164是糖蛋白中的類粘蛋白受體或涎粘蛋白總科的成員之一。涎粘蛋白是跨膜糖蛋白，其分子量為50-3000千道爾頓，在cDNA和氨基酸水平上呈現出有限相似性。類粘蛋白表達的蛋白質有共同的特性，即大量的O糖基化連接在絲氨酸和蘇氨酸殘基上，它可以推斷出多種細胞-細胞或細胞-細胞外質之間的相互作用。O交聯側鏈的密集排列特征為一使許多類粘蛋白分子足夠長的延伸結構，其突出在多聚糖遠端的圍繞著細胞的多糖包被，以及末梢糖的最佳顯露和高度多樣性。基于結構構象以及所帶負電荷的優點，類粘蛋白糖蛋白在細胞對粘蛋白(附著)無特殊受體時可以作為一排斥性屏障。粘蛋白受體的功能依賴于與核心粘蛋白肽以及糖基轉移酶的細胞特異性表達相關的細胞類型和活動狀態，依次調節O交聯的低聚糖側鏈的結構和呈遞，膜的固定，信號轉導能力和/或粘蛋白到正確細胞內片段的運輸。人CD164是一種鼠科的MGC-24v(M musculus)和大鼠內溶素(R.norvegicus)的異物種同源蛋白，一種在哺乳動物細胞溶體和內涵體的間隔里發現的膜蛋白。不同異構體與功能上重要的片段和CD164/內涵體在亞細胞的分布之間的關系已有所描述(Chan YH等人，J Biol.Chem，2762139-2152，2001)。在天然狀態下，人CD164是一個二硫化物交聯的兩個80-85千道爾頓的亞單位的同型二聚體。CD164高度糖基化，含有O-和N-交聯的多聚糖。細胞外區域包括被一含有二硫化物內橋以及一富有半胱氨酸的基序的非粘蛋白片段連接的2個粘蛋白區域(I和II)，此基序類似一個之前在生長因子和細胞因子受體里發現的一致模式。CD164也含有一單途徑跨膜區域和一包含一可將蛋白送到內涵體和溶體的C末端基序(即，YHTL)的13個氨基酸細胞內區域。有人已描述了4種人CD164的mRNA，其由一位于人染色體6q21的單個基因組轉錄單位有選擇地剪接6個真實的外顯子而產生。(Zannettino A，J Biol Regul HomeostAgents，15394-396，2001；Watt and Chan，Leuk Lymph，37(1-25.2000)。可能存在4種選擇性的啟動子、2個無互相重迭的可選擇的最后外顯子和一個并不剪接的內在內含子。主要的CD164(E1-6)異構體代表了一178個氨基酸I型跨膜糖蛋白。所描述的其它異構體是一含有178個氨基酸的涎粘蛋白CD164或CD164異構體Δ5；一184個殘基的CD164異構體Δ4；以及一200千道爾頓主要可溶的異構體稱為MGC24(即24千道爾頓的多糖基化的核心蛋白質)，此蛋白質缺少跨膜固定的基序，有189個殘基。所有異構體都是具有O-或N-交聯的糖基化位點的高度糖基化的蛋白質(附圖1)。CD164功能包括介導或調節造血祖細胞粘連以及負性調節它們的生長和/或分化。CD164通常為CD34+和CD34lo/-造血干細胞和聯合微環境細胞所表達(Watt等人，Blood，92849-866，1998)。CD164也被定向骨髓細胞和紅細胞集落形成細胞在骨髓間質和內皮細胞表達，在淋巴細胞和間充質干細胞有較弱表達。CD164在血細胞形成中起重要作用，它作為一個潛在的信號分子，使人CD34+細胞較易附著于骨髓間葉，抑制了CD34+和CD38lo/-造血祖細胞的增殖(Zannettino等人，Blood，922613-2628，1998)。這些結果包括了被單克隆抗體(mAbs)105A5和103B2/9E10識別的CD164 I類和/或II類抗原決定部位。此抗原決定部位依賴于碳水化合物，位于N末端的粘蛋白片段I(Watt等人，Blood，95，3113-3124，2000；Doyonnas等人，J Immunol，165840-851，2000)。在直接微環境中造血細胞和間葉/內皮細胞之間的交互作用被認為在造血干細胞的自我更新、靜止、定向和移動中起主要作用。這些交互作用包括附著受體、它們所識別的配體和細胞因子之間的合作。參與這些過程的一些細胞附著分子(CAMS)包括免疫球蛋白、整聯蛋白、鈣黏著蛋白、選擇蛋白和類粘液素蛋白家族。在體外，CD164起肌源分化的作用(Lee等人，Mol Cell Biol，217696-7706，2001)。CD164在成肌細胞系的過量表達加速了分化的生化標記的表達，增強了多核肌管的形成，而反義CD164或者CD164可溶的細胞外區域抑制肌細胞生成。可溶的MGC-24花生凝集素(PNA)結合位點代表了一在很多惡性腫瘤中表達的腫瘤聯合碳水化合物標記。在人結腸直腸癌中MGC-24的總mRN被發現低于正常的毗連粘膜組織(Matsui等人，J Biochem，1271103-1107，2000)。在結腸癌中，腫瘤淋巴導管的侵入與低水平的MGC-24的mRNA有相互關系，而高水平的MGC-24的mRNA與較少導管侵入和較少遠處轉移有相互關系。CD164特異性的單克隆抗體可以證明對癌癥的診斷或治療以及對造血細胞抑制有作用(EP889054，EP761814)。已經發現有其它的類CD164蛋白質(NOV25，WO 02/098917；SEQ ID NO7852，EP1033401；附圖1)，但是尚未分析它們的生化特性。專利技術概述令人驚訝的是，業已發現一含有人CD164細胞外區域的成熟的形式的可溶蛋白質，當用介質如伴刀豆球蛋白A刺激的時候，會對一般產生細胞因子的細胞中的細胞因子表達起抑制作用(稱為干擾素-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10和TNF-α)。而且，在與炎性和/或自身免疫疾病相關的動物模型中，這種CD164可溶的片段抑制相關的生理反應(如淋巴細胞或巨噬細胞移動)。因此，含有一與人CD164細胞外區域的成熟的形式有至少85％同源的可溶蛋白，可用于治療和/或預防炎性和/或自身免疫疾病的藥物生產。包括這些可溶蛋白質中任何一種的藥物組合物適合于治療和/或預防炎性和/或自身免疫疾病，以及一般可用于個體給藥抑制細胞因子的表達。從下面的詳細描述中，本專利技術的其它特性和優點將更為清楚。附圖說明圖1(A)全長氨基酸排列，人CD164(hCD164；NCBI Acc.No.NP_006007；SEQ IDNO3)，人CD164-delta4(hCD164-DELTA4；NCBI Acc.No.AAG53908；SEQ ID NO4)，CD164-delta5(hCD164-DELTA5；NCBI Acc.No.AAG53907；SEQ ID NO5)，以及MGC-24(hMGC-24；NCBI Acc.No.Q04900；SEQ ID NO6)。信號系列在方框中。細胞外區域的末端用箭頭指示。糖基化位點用星號指示。(B)CD164的細胞外區域的成熟形式的氨基酸排列(氨基酸1-140 of SEQ ID NO1，對應于SEQ ID NO3的氨基酸24-163和SEQ ID NO2的氨基酸1-140)，MGC-24(SEQ ID NO6本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種可溶蛋白在制備治療和／或預防炎性或／和自身免疫性疾病的藥物中的應用，其特征在于，所述可溶蛋白包括一與人ＣＤ１６４（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）的細胞外區域的成熟形式至少８５％同源的序列。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：Y奇韋提克，
申請(專利權)人：應用研究系統ARS股份公司，
類型：發明
國別省市：AN[菏屬安的列斯群島]