二十四元大環席夫堿在制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用制造技術

本發明專利技術公開了二十四元大環席夫堿在制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用。本發明專利技術通過圓二色光譜、Western?Blot等方法發現二十四元大環席夫堿可以和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌中

【技術實現步驟摘要】
二十四元大環席夫堿在制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用
本專利技術涉及醫藥
，具體的指二十四元大環席夫堿在制備治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用。
技術介紹
1961年，科學家首次分離出了耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，該菌種在90年代迅速擴散，如今，其導致感染已遍布全球。耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌除對甲氧西林耐藥外，對其它所有與甲氧西林有類似結構的β-內酰胺類抗生素均耐藥，還可通過改變抗生素作用靶位、產生修飾酶、降低膜通透性等不同機制，對氨基糖苷類、大環內酯類、四環素類、氟喹喏酮類、磺胺類、利福平均產生不同程度的耐藥，這對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引起感染的臨床治療帶來極大的挑戰。目前普遍認為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的耐藥機制主要由MecA基因調控，MecA基因的過度表達導致了PBP2a蛋白的高表達。PBP2a是青霉素結合蛋白家族中的一種，但其活性位點與β-內酰胺類抗生素的親和力極低。當正常青霉素結合蛋白和β-內酰胺類抗生素結合而失去活性時，PBP2a能夠代替其功能，繼續肽聚糖合成，從而維持細菌的生長和繁殖，因此呈現出高度耐藥性。如何從基因層面減輕PBP2a的表達量，進而減輕耐甲氧西林金黃色葡萄球菌對β-內酰胺類抗生素的耐藥性，具有十分重要的意義。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是針對上述
技術介紹
的不足，提供二十四元大環席夫堿在制備耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用，所述二十四元大環席夫堿的結構式如式Ⅰ所示：進一步，所述二十四元大環席夫堿可以使耐甲氧西林金黃色葡萄球菌中的青霉素結合蛋白PBP2a的表達量下降為對照組的11.7％。進一步，所述二十四元大環席夫堿使用量為5μM時，最低可以使耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(苯唑西林)降低為0.5μg/mL。進一步，所述二十四元大環席夫堿制備的藥品類型為注射劑、粉針劑、口服劑、口含片、噴霧劑、膠囊劑、栓劑等。進一步，所述二十四元大環席夫堿與β-內酰胺類抗生素合用制成治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物。本專利技術合成的二十四元大環席夫堿可以通過使MecA基因調控區域關鍵序列形成G-四鏈體結構從而抑制MecA基因的表達，降低了PBP2a的表達量，極大的降低了耐甲氧西林金黃色葡萄球菌使用β-內酰胺類藥物的最低抑菌濃度，達到使用常規劑量的β-內酰胺類藥物治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染的作用。本專利技術的優點在于：1.本專利技術對二十四元大環席夫堿開發了新的醫療用途，作為治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物會產生可觀的經濟效益。2.本專利技術使用的二十四元大環席夫堿可以人工合成，步驟簡單，合成產品純度高，能夠保證工業化生產。3.本專利技術的二十四元大環席夫堿性質穩定，可以作為多種劑型使用，如：注射劑、粉針劑、口服劑、口含片、噴霧劑、膠囊劑、栓劑等。附圖說明圖1為二十四元大環席夫堿的核磁共振1H譜圖。圖2為二十四元大環席夫堿的核磁共振13C譜圖。圖3為MecA基因核心序列和二十四元大環席夫堿作用前后的圓二色光譜譜圖。圖4為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和二十四元大環席夫堿作用前后的最低抑菌濃度(MIC值)結果。圖5為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌中青霉素結合蛋白PBP2a和二十四元大環席夫堿孵育后的Westerm-Blot結果。具體實施方式下面結合具體實施例，對本專利技術做進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本專利技術而非用于限制本專利技術的范圍，該領域的技術熟練人員可以根據上述專利技術的內容作出一些非本質的改進和調整。實施例1：二十四元大環席夫堿的合成。1.實驗儀器核磁共振譜儀使用Bruker公司500MHz核磁共振譜儀，質譜使用賽默飛公司LCQFleet液質聯用儀器。2.實驗藥品與試劑2,5-二羥基對苯二甲醛和對苯二胺購自于薩恩化學技術(上海)有限公司。其余常規試劑均為分析純。3.實驗方法二十四元大環席夫堿的合成采用溶劑稀釋法。具體為：稱取0.83g2,5-二羥基對苯二甲醛(5mmol)溶于500mL甲醇溶液中，攪拌條件下逐滴滴加100mL溶解有0.54g對苯二胺(5mmol)的甲醇溶液，室溫下攪拌6小時，得到橙黃色沉淀。抽濾，收集沉淀，大量乙醚洗滌，得到的黃色固體真空干燥，通過核磁和質譜進行表征。1H核磁譜圖如附圖1所示。1H-NMR(500MHz,d6-DMSO)δ＝8.83(s,4H)；7.21(s,4H)；7.11(s,4H)；7.01(s,4H)。13C核磁譜圖如附圖2所示。13C-NMR(125MHz,d6-DMSO)δ＝163.65,147.39,140.88,132.39,121.85,118.46。質譜：[M+H]+計算值477.16，觀測值477.58。核磁和質譜表征結果和結構式相符。實施例2：二十四元大環席夫堿誘導MecA基因核心序列形成G-四鏈體結構的驗證。1.實驗儀器圓二色光譜儀購自于英國應用光學物理公司2.實驗藥品與試劑MecA基因序列來自GeneBank,選取其核心序列為5’-GATGGTAAAGGTTGGCAGG-3’，DNA購自于生工生物工程(上海)股份有限公司，三甲基氨基甲烷(Tris)購自于華美生物工程公司，二十四元大環席夫堿高濃度儲備液為20mM，使用DMSO溶解。3.實驗方法體系1：含終濃度為10μMMecADNA和10mM的Tris-HCl，總體積200μL，不足部分蒸餾水補齊。體系2：含終濃度為10μM的MecADNA和10mM的Tris-HCl，10μM的二十四元大環席夫堿，總體積200μL，不足部分蒸餾水補齊。設定圓二色光譜儀測試波長為230-310nm，分別掃描體系1和2的譜圖。4.實驗結果由附圖3結果可以看出，單純的單鏈DNA峰出現在257nm附近，加入二十四元大環席夫堿后出現了295nm附近的正峰和265nm附近的負峰，表明了平行結構的G-四鏈體的生成。該結果表明二十四元大環席夫堿可以誘導MecA基因核心序列形成G-四鏈體結構。實施例3：二十四元大環席夫堿降低耐甲氧西林金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度(MIC值)的驗證。1.實驗儀器麥氏比濁儀購自于北京天安聯合科技有限公司，隔水式恒溫培養箱購自于上海樹立儀器儀表有限公司。2.菌株收集某醫院微生物檢驗室2018年7月至12月分離的金黃色葡萄球菌菌株，排除同一病人的重復菌株，根據中華醫學會和衛生部頒布的抗菌藥物敏感性試驗執行標準(第二十二版)鑒定出其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌菌株，共收集17株菌株。質控菌株采用金黃色葡萄球菌ATCC29213，購自于廣東環凱微生物科技有限公司。3.實驗藥品與試劑M-H肉湯粉購自于英國Oxoid公司，血平板購自于合肥天達生物有限公司，苯唑西林購自于石藥集團中諾藥業(石家莊)有限公司。M-本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.二十四元大環席夫堿在制備治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用，其特征在于：所述二十四元大環席夫堿的結構式如式Ⅰ所示：/n

【技術特征摘要】
1.二十四元大環席夫堿在制備治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用，其特征在于：所述二十四元大環席夫堿的結構式如式Ⅰ所示：





2.如權利要求1所述的二十四元大環席夫堿在制備治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染藥物中的應用，其特征在于：所述二十四元大環席夫堿使用量為5μM時，使耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度降低為0.5μg/mL。


3....

【專利技術屬性】
技術研發人員：苑立博，
申請(專利權)人：河南工業大學，
類型：發明
國別省市：河南;41