當歸、川芎中藥材指紋圖譜的建立方法技術

本發明專利技術涉及當歸、川芎中藥材飲片及其由此二味中藥單獨或復方制備的制劑的指紋圖譜建立方法及其標準指紋圖譜。當歸、川芎飲片經甲醇或無水乙醇提取、制劑溶解或直接稀釋至適宜濃度后可直接采用高效液相色譜法檢測，記錄色譜圖，以藁本內酯色譜峰為參照，計算各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，從而建立起標準指紋圖譜。本發明專利技術的優點是同時測定當歸、川芎藥材和制劑中的水溶性和揮發油兩個有效部位，較之于以前的單指標檢測方法更為科學，而且方法簡便、穩定、精密度高、重現性好，對整體上把握當歸、川芎藥材及其制劑的品種和質量起到有益的幫助，將其作為當歸、川芎質量控制以及真偽鑒別的指標之一。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種用高效液相色譜方法(HPLC)進行的指紋圖譜研究，建立當歸和川芎中藥材及由二者單獨或復方而制備的制劑的標準指紋圖譜，對中藥材和制劑的真偽及質量進行監控。
技術介紹
當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，川芎為傘形科植物Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖。二者伍用稱為佛手散，方出《千金要方》，名見《醫方類聚》，互補為用，活血，養血，行氣三者并舉，且潤燥相濟，當歸之潤可制川芎之燥，川芎之燥可制當歸之膩，祛閼而不傷氣血，養血而不滯血瘀，從而起到活血祛瘀，養血和血功效。本方在現代臨床上應用極廣，主要應用在血虛、血瘀及婦科頑疾的治療上，是治療心腦血管疾病及婦科病癥的優選藥物。然而，由于當歸和川芎品種較多，產地、采收季節等均會影響中藥材的質量，因而制成的制劑尤其是注射劑質量參差不齊，難以確保其療效的一致性。而且，目前當歸和川芎中藥材或制劑大多是以其中所含的一種活性成分(阿魏酸)作為指標進行含量測定，對其質量進行控制，并僅以其含量多少來評價其是否合格。例如，以阿魏酸含量(陳漢平，中草藥，1988，19(10)15)來評價當歸藥材的質量；以阿魏酸的含量(張濤，廣西中醫學院學報，2001，4(3)60)來評價當歸注射液的質量；以阿魏酸的含量(羅蘭等，中藥材，1998，21(4)184)來評價川芎藥材及炮制工藝對其的影響；以阿魏酸的含量(孟德寶等，軍隊醫藥，2000，10(3)18)評價復方川芎注射液的質量。然而，當歸、川芎中所含活性成分包括以阿魏酸為代表的水溶性有效部位及藁本內酯為代表的揮發油有效部位兩部分，僅以阿魏酸代表部分水溶性部位，來評價中藥材及其制劑的質量，具有相當大的片面性。中藥指紋圖譜是指某種中藥材及其制劑中所共有的、具有特征性的某類或數類成分的色譜或光譜的圖譜。在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有十分明確的情況下，指紋圖譜的建立對于有效控制中藥材及其制劑的質量具有重要的意義。目前，有關川芎藥材的指紋圖譜研究已有報道，但其僅涉及川芎中的部分有效成分，如王嗣岑等以阿魏酸為對照品關于川芎中水溶性部位的指紋圖譜方法研究(王嗣岑等，西安交通大學學報(醫學版)，2003，24(3)221)；中國專利申請號為02149769.9的一種治療腦血管疾病的藥物，是涉及川芎采用超臨界萃取方法提取的揮發油類活性成分的指紋圖譜；另外還有采用高效電泳法對川芎藥材部分活性成分的研究(孫沂等，中國中藥雜志，2003，28(2)167)，而采用高效液相色譜方法對川芎藥材的水溶性部位和揮發油性有效部位同時進行檢測的指紋圖譜研究尚無相關報導。當歸及由其復方組成的制劑的高效液相色譜方法指紋圖譜研究均無報道。
技術實現思路
本專利技術的目的是通過用高效液相色譜法對當歸、川芎中藥材及兩者組成的制劑的指紋圖譜研究，提供一種質量控制方法，確立該指紋圖譜的制備方法，并分別建立其標準指紋圖譜。本專利技術通過以下步驟實施1.當歸藥材標準指紋圖譜的建立(1)當歸藥材供試品溶液的制備當歸飲片粉碎，精密稱重，加入甲醇或無水乙醇提取后過濾，取少量續濾液經0.45μm微孔濾膜過濾后，稀釋至適當濃度，即為當歸藥材供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取藁本內酯對照品適量，加甲醇制成適宜濃度的參照物溶液。(3)當歸藥材指紋圖譜的測定精密吸取當歸藥材供試品溶液及參照物溶液，分別注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，以參照物的色譜峰相對保留時間和峰面積為1，計算10批當歸藥材中名共有峰的相對保留時間和相對峰面積，即得到當歸藥材標準指紋圖譜。所采用的色譜色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動性組成為A甲醇(含0.4％冰醋酸)、B水(含0.4％冰醋酸)，采用梯度洗脫，洗脫程序見表1，檢測波長為280nm。表1 當歸藥材指紋圖譜洗脫程序 所得的當歸藥材指紋圖譜圖形如說明書附圖中的圖1所示，共有峰峰數為15個。2.川芎藥材標準指紋圖譜的建立川芎藥材的指紋圖譜制備方法過程中的供試品溶液的制備、參照物溶液的制備、色譜條件及檢測方法均與當歸藥材相同。以參照物藁本內酯的色譜峰的保留時間和峰面積為1計算10批川芎藥材中各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，即得川芎中藥材的標準指紋圖譜。所得的川芎藥材指紋圖譜圖形如說明書附圖中的圖2所示，共有峰峰數為17個。3.制劑標準指紋圖譜的建立(1)供試品溶液的制備精密取制劑適量，甲醇溶解后稀釋至適宜濃度，或制劑直接稀釋至適宜濃度，必要時經微孔濾膜過濾，即得制劑供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取藁本內酯對照品適量，加甲醇制成適宜濃度的參照物溶液。(3)制劑指紋圖譜的測定精密吸取制劑供試品溶液及參照物溶液，分別注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，以參照物藁本內酯色譜峰的保留時間和峰面積作為1計算10批制劑中各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，即得制劑標準指紋圖譜。所采用的色譜色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動性組成為A甲醇(含0.4％冰醋酸)、B水(含0.4％冰醋酸)，采用梯度洗脫，洗脫程序見表2，檢測波長為280nm。表2 復方當歸川芎注射液指紋圖譜洗脫程序 所得注射液指紋圖譜圖形如說明書附圖中的圖3所示，共有峰峰數為13個。與現有技術相比，本專利技術具有以下優點1.本專利技術中采用無水乙醇回流提取的方法，兼顧其水溶性及揮發油兩部分有效部位，具有簡便、穩定、精密度高以及重現性好等優點，彌補了以往的技術中只涉及其中某一活性部位的缺點，使對中藥質量的控制更加全面、真實、科學。2.本專利技術采用高效液相色譜方法進行檢測，檢測波長為280nm，檢測方法簡便可行，較之于氣相色譜法、高效電泳法等更為實用，大大節約了成本和時間。3.本專利技術將當歸或川芎中所含的化學成分進行全面分析，通過共有峰的有無來對中藥材質量進行評價，與只采用藥材中某一有效成分來分析評價藥材質量的方法相比較，更為科學。4.本專利技術包含了以當歸和川芎組方的制劑指紋圖譜研究，通過制劑中的共有峰的數目來控制制劑的質量，從而確保制劑質量的均一性，使中藥制劑在應用過程中更加安全、可控，減少因中藥制劑成分復雜不清所引起的各種潛在的危險。附圖說明圖1是本專利技術的當歸藥材標準指紋圖譜。圖2是本專利技術的川芎藥材標準指紋圖譜。圖3是本專利技術的復方當歸川芎制劑標準指紋圖譜。圖1中從左到右分別是共有峰1至15號峰。圖2中從左到右分別是共有峰1至17號峰。圖3中從左到右分別是共有峰1至13號峰。具體實施例方式本專利技術的優選實施方式如下實施實例1當歸標準指紋圖譜的建立1.儀器與試藥SPD-M10A VP高效液相色譜儀(日本島津公司)；SPD-M10A VP二極管陣列檢測器(日本島津公司)；CTO-10AS VP柱溫箱(日本島津公司)；98-1-B型電子調溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)；FW-100高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)。藁本內酯對照品(自制，純度98％以上)；當歸飲片購于天津中藥飲片廠；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。2.色譜條件色譜柱ODS C18色譜分析柱(4.6×200mm，5μm，迪馬公司)；流動相A甲醇-HOAC(99.6∶0.4)，流動相B；水-HOAC(99.6∶0.4本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種當歸、川芎中藥材飲片及其制劑標準指紋圖譜的建立方法，其特征在于：當歸、川芎中藥飲片經甲醇或無水乙醇提取后稀釋至適當濃度、制劑直接稀釋或先溶解再稀釋后直接采用高效液相色譜方法制備而得。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：崔福德，馮麗莉，胡杰，
申請(專利權)人：沈陽藥科大學，
類型：發明
國別省市：89[中國|沈陽]