本發明專利技術公開了一種膽汁酸測定試劑。本發明專利技術的測定試劑包括試劑１和試劑２兩個組成部分，在本發明專利技術的試劑中添加了丙酮酸鈉和亞鐵氰化鉀等試劑，提高了試劑的穩定性和靈敏度，并增加了試劑對甘氨酸的親和能力。（*該技術在2024年保護過期，可自由使用*）
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物診斷試劑，具體涉及一種膽汁酸測定試劑。
技術介紹
1974年挪威科明公司采用純制的3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD)成功地生產出第一代酶法膽汁酸試劑，使膽汁酸的測定真正進入到臨床領域。總膽汁酸測定方法較快，到目前為止已經發展到第五代。肝細胞損傷、肝流血量減少，和肝內外門脈分流等，皆影響肝臟對膽汁酸的清除作用，從而使周圍中膽汁酸鹽含量增加膽管梗阻和膽汁淤滯時，膽汁酸鹽反流入血，使膽汁酸鹽濃度顯著升高。隱私，檢查血、尿中膽汁酸鹽能反映肝臟德攝取，合成及排泄功能。很多證據表明，膽汁酸的生成和代謝與肝臟有十分密切的關系，血清膽汁酸水平是反映肝實際損傷的一個重要指標。膽酸是在肝臟從膽固醇生成的24-碳類固醇化合物。在體液中被發現的以下四個膽酸形式占99％以上，四種膽酸形式分別為脫氧膽酸、石膽酸、鵝去氧膽酸、甘氨膽酸，其中甘氨膽酸又是膽酸主要的存在形式。檢測甘氨膽酸又具有十分重要的臨床意義，如肝細胞損傷程度，急性肝炎的病情觀察，判斷肝硬化等(詳見張宋英、候振江、王英文“甘氨膽酸診斷肝病的價值”《新消化病學雜志》1996.4(7)395-396)已有詳細報道。目前，臨床上應用的是第五代酶法測定膽汁酸試劑，該第五代酶法測定與原有的方法相比具有靈敏度高、對分析儀器污染弱等特點，但其試劑的穩定性較差，測臨床低值樣本不夠準確等，同時對血清中甘氨膽酸的反應也不夠靈敏。因而，在應用上存在一定局限.
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，設計一種新的膽汁酸測定試劑，提高檢測中的靈敏度和試劑穩定性。本專利技術提供了一種膽汁酸測定試劑，該試劑包括兩個試劑組份試劑1甘氨酸 1.5g/L～3.75g/LThio-NAD 0.95g/LNaN31g/LTriton X-100 1ml/L丙酮酸鈉 0.1g/L～150g/L亞鐵氰化鉀 0.1g/L～100g/L試劑2二乙醇胺 6.0g/L～16.2g/L苯或烷基二醇 10ml/L～100ml/L硼氫化物 0.8g/L～10g/L3αHSD 12.5ku/LNaN31g/LTritoNX-100 1ml/Lα-糊精 5g/L～20g/LNADH 6g/L 本專利技術提供的膽汁酸測定試劑是專利技術人通過改進試劑組份而實現了克服已有技術存在的缺陷。本專利技術人為提高試劑對甘氨酸的親和能力，在試劑1的組份中，添加了丙酮酸鈉和亞鐵氰化鉀；為提高試劑的穩定性，在試劑2的組份中，添加了硼氫化物和烷基或苯基二醇作為穩定劑，保護NADH的穩定；為提高試劑對測低值標本的準確性，同時在試劑2的組份中，增加了α-糊精，有效地提高了試劑對樣本反應的靈敏度。上述添加試劑的濃度范圍為烷基二醇或苯二醇0.01％-10％硼氫化物0.01％-25％丙酮酸鈉0.01％-15％亞鐵氰化鉀0.01％-10％α-糊精0.01％-10％本專利技術人對本專利技術試劑的靈敏度、穩定性和對甘氨膽酸的親和能力分別進行了檢測，其結果如下一、提高試劑的靈敏度配制試劑1含有甘氨酸1.5g/L，Thio-NAD 0.95g/L，NaN31g/L，TritonX-100 1ml/L，丙酮酸鈉10g/L，亞鐵氰化鉀10g/L配制試劑2含有二乙醇胺16.2g/L，苯二醇10ml/L，硼氫化鈉10g/L，3αHSD 12.5ku/L，NaN31g/L，Triton X-100 1ml/L，NADH 6.0g/L 膽汁酸濃度(umol/L)＝ΔA樣本管/ΔA標準管*標準濃度按圖1測50μmol/l樣本，測得ΔA＝0.0500A/min在試劑2中添加α-糊精(分子量5000)18g/l后，按圖1測50μmol/l樣本，測得ΔA＝0.2000A/min靈敏度提高了300％，這樣對測低值樣本時更具有準確性。結果表明在試劑中添加α-糊精能有效提高試劑對樣本反應的靈敏度。二、檢測試劑的穩定性配制試劑二乙醇胺16.2g/L，3αHSD 12.5ku/L，NaN31g/L，Triton X-1001ml/L，α-糊精(分子量5000)18g/L，NADH 6.0g得A溶液在405nm處檢測溶液A的吸光度，得下列結果 在A溶液基礎上添加苯二醇10ml/L和硼氫化鈉10gL后，在405nm處檢測試劑A的吸光度，得下列結果 試劑穩定效果明顯結果顯示在試劑中添加了苯二醇和硼氫化鈉，使試劑穩定性明顯得到了提高。三、試劑對甘氨膽酸的親和能力的檢測配制試劑1甘氨酸15g/L，Thio-NAD 0.95g/L，NaN31g/L，TritoN X-1001ml/L配制試劑2二乙醇胺16.2g/L，苯二醇10ml/L，硼氫化鈉10g/L，3αHSD12.5ku/L，NaN31g/L，TritoN X-100 1ml/L，NADH 6.0g/L按圖1分別檢測40μmol/l的脫氧膽酸，石膽酸，鵝去氧膽酸，甘氨膽酸的樣本，得下列結果 在試劑1中添加入亞鐵氰化鉀10g/L和丙酮酸鈉10g/L后，依上法分別檢測40μmol/l的脫氧膽酸，石膽酸，鵝去氧膽酸，甘氨膽酸的樣本，得下列結果 通過實驗表示，在試劑1中添加亞鐵氰化鉀和丙酮酸鈉，能使試劑對甘氨膽酸的結合能力得到明顯提高。本專利技術所述的試劑中，硼氫化物可以為硼氫化鈉或硼氫化鉀；烷基或苯基二醇可以為乙二醇、丙二醇、丁二醇或苯二醇；α-糊精的分子量為1000～2000。本專利技術試劑與酶循環法測定試劑同時對30例臨床樣本進行了檢測，說明本專利技術的試劑是符合臨床檢測要求，與日本產品相符。本專利技術提供的膽汁酸測定試劑具有穩定性好，靈敏度高的優點，并增加了試劑對甘氨膽酸的親和能力強，因此，在臨床上有較好的應用前景。附圖說明圖1本專利技術試劑與日本第一化學株式會社制的試劑對30例臨床樣本檢測應。其中X橫座標表示日本試劑Y縱座標表示本專利技術試劑回歸方程Y＝1.001X+0.680；相關系數r＝0.998具體實施例方式實例例1試劑1甘氨酸 1.5g/LThio-NAD0.95g/LNaN31g/LTriton X-1001ml/L丙酮酸鈉10g/L亞鐵氰化鉀 10g/L試劑2二乙醇胺16.2g/L苯二醇 10ml/L硼氫化鈉10g/L3αHSD 12.5ku/LNaN31g/LTriton X-1001ml/Lα-糊精(分子量5000) 18g/LNADH6.0g/L例2試劑1甘氨酸 3.75g/LThio-NAD0.95g/LNaN31g/L Triton X-100 1ml/L丙酮酸鈉 5.7g/L亞鐵氰化鉀 105g/L試劑2二乙醇胺6g/L乙二醇 10ml/L硼氫化鉀5g/L3αHSD 12.5ku/LNaN31g/L吐溫20 0.5g/Lα-糊精(分子量3000) 20g/LNADH6.0g/L例3試劑1甘氨酸 1.5g/LThio-NAD0.95g/LNaN31g/LTriton X-1001ml/L丙酮酸鈉1g/L亞鐵氰化鉀 1g/L試劑2 二乙醇胺 16.2g/L丙二醇 50ml/L硼氫化鈉 1g/L3αHSD 12.5ku/LNaN31g/LTriton X-100 1ml/Lα-糊精(分子量20000) 本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種膽汁酸測定試劑，其特征在于該試劑包括下列兩個試劑組份： 試劑１： 甘氨酸 １．５ｇ／Ｌ～３．７５ｇ／Ｌ Ｔｈｉｏ－ＮＡＤ ０．９５ｇ／Ｌ ＮａＮ↓［３］ １ｇ／Ｌ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００ １ｍｌ／Ｌ 丙酮酸鈉 ０．１ｇ／Ｌ～１５０ｇ／Ｌ 亞鐵氰化鉀 ０．１ｇ／Ｌ～１００ｇ／Ｌ 試劑２： 二乙醇胺 ６．０ｇ／Ｌ～１６．２ｇ／Ｌ 苯基或烷基二醇 １０ｍｌ／Ｌ～１００ｍｌ／Ｌ 硼氫化物 ０．８ｇ／Ｌ～１０ｇ／Ｌ ３αＨＳＤ １２．５ｋｕ／Ｌ ＴｒｉｔｏＮＸ－１００ １ｍｌ／Ｌ α－糊精 ５ｇ／Ｌ～２０ｇ／Ｌ ＮＡＤＨ ６ｇ／Ｌ。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫衛兵，
申請(專利權)人：上海復星長征醫學科學有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]
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