桔霉素免疫層析檢測試紙及其制作方法與應用技術

本發明專利技術公開了一種桔霉素免疫層析檢測試紙及其制作方法與應用。本發明專利技術的檢測試紙，包括襯墊，樣品墊，示蹤粒子結合物墊，硝酸纖維素膜，吸水墊，檢測線，質控線；在襯墊上按順序有樣品墊，示蹤粒子結合物墊，硝酸纖維素膜，吸水墊；示蹤粒子結合物墊上有示蹤粒子標記的抗桔霉素的抗體，硝酸纖維素膜上還設有檢測線和質控線，檢測線上有桔霉素檢測抗原，質控線上有抗抗體，其中抗抗體是抗桔霉素的抗體的抗體。本發明專利技術的優點在于：本發明專利技術有放射免疫分析和酶聯免疫吸附試驗ＥＬＩＳＡ的優點。同時，本發明專利技術有簡單、快速、常溫保存、單份測定、一次試驗測出桔霉素、除商品試劑外不需任何儀器設備的優點，特別適合桔霉素的現場快速檢測。（*該技術在2023年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物
，公開了一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法與應用。
技術介紹
桔霉素是青霉屬和曲霉屬的某些菌株產生的真菌毒素，于1931年首次被分離純化。它能引起顯著的腎臟毒性，并有致癌性。調查發現，一些桔霉素的產生菌在自然界分布廣泛，經常引起玉米、大米等農作物的霉變。近年來，桔霉素的污染問題越來越引起人們的關注。在1991年法國里昂召開的真菌毒素和地方腎病及泌尿道腫瘤研討會上，討論了桔霉素在Balcan地方腎病發生中的作用，引起了國際癌癥研究會的高度重視。當年，桔霉素被國際生命科學院自然毒素檢測委員會歐洲分會列為必須檢測的毒素之一。1995年法國學者Blanc證實某些紅曲霉菌株也能產生桔霉素。這一發現在食品界引起了不小的震動。在此之前，紅曲霉一直是作為食品生產加工的菌種來使用的。在我國，利用紅曲霉發酵生產食品和藥品已有上千年的歷史，許多傳統食品如紅曲米、紅曲酒和腐乳等深受人們的喜愛。現代研究還發現紅曲霉的代謝產物中有許多在食品、醫藥和化工中很有價值的發酵產物。如品質優異、著色性好、色調豐富的天然紅曲色素；能顯著抑制膽固醇合成、降低血脂含量的莫那可林MonacollinK和洛伐它丁Lovastain；還有含量非常豐富的麥角固醇、長鏈脂肪酸及多種抗菌活物質。90年代初，歐美、日本等國對我國的食用紅曲、藥用紅曲及其相關產品需求猛增，給我國的紅曲生產廠家帶來了可觀的經濟效益。桔霉素問題不僅使我國的紅曲產品出口受到了損失，還嚴重地威脅到人們的健康。日本、德國等國家制定了針對我國出口的紅曲相關產品的新標準，規定桔霉素的含量必須低于規定值，否則嚴禁進口銷售。而我國的紅曲產品大多達不到這些標準。面對這一嚴峻的形勢，應盡快建立桔霉素快速檢測的方法，才能保障人民健康，并挽救這一古老而年輕的食品生產行業。目前檢測桔霉素的技術可分為兩類，一類為色譜分析法，包括薄層色譜、氣相色譜、液相色譜等，一直是最重要的真菌毒素的化學分析方法，薄層色譜由于方法靈敏度和分離效率等問題，1985年以后便很被采用，現在比較普遍的真菌毒素的分析方法還是液相色譜法，包括液相色譜-質譜聯用技術，在方法適用性、分離效率和靈敏度方面，液相色譜法及液相色譜-質譜聯用技術都是其他方法所無法替代的。近年來，毛細管電泳及毛細管電泳-質譜聯用技術以其高分離效率也開始應用在真菌毒素分析領域并引起了廣泛關注。但是由于其設備昂貴、操作復雜和對樣品的純度有較高的要求，不適合對大批量的樣本進行檢測，因而使用受到限制。另一類是免疫化學方法，由于對樣品的純度要求不高，并具有較高的靈敏度和特異性。特別適合于大批量樣本的檢測，近年來被廣泛應用于各種真菌毒素的檢測。這類方法通常包括放射免疫公析法RIA和酶聯免疫分析法ELISA。RIA方法盡管具有較高的靈敏度，但由于使用了對人體有害的放射性物質，故無法推廣使用。ELISA方法由于操作簡單、使用安全而被普遍采用。免疫層析法是在免疫化學基礎上發展起來的定性測定方法，它往往以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細作用使樣品溶液在層析條上泳動，并同時使樣品中的待測物與層析材料上針對待測物的受體，如抗體或抗原，發生高特異高親和性的免疫反應，層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區域如檢測帶，通過酶反應或直接運用可目測的標記物，如膠體金，而得到直觀的實驗現象，如顯色。而游離標記物則越過檢測帶，達到與結合標記物自動分離之目的。免疫層析技術常見的示蹤粒子有膠體金，乳膠，膠體硒、明膠、磁性顆粒等，其中運用最成功的標記物為膠體金。示蹤粒子若選用常用的顯色標記，當檢測線、質控線正常顯色，肉眼可直接分辨，若采用磁性顆粒作為示蹤粒子，則需儀器判讀。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法。本專利技術的另一目的在于應用該檢測試紙。本專利技術的技術方案為一種桔霉素免疫層析檢測試紙，包括襯墊，樣品墊，示蹤粒子結合物墊，硝酸纖維素膜，吸水墊，檢測線，質控線；在襯墊上按順序有樣品墊，示蹤粒子結合物墊，硝酸纖維素膜，吸水墊；示蹤粒子結合物墊上有示蹤粒子標記的抗桔霉素的抗體，硝酸纖維素膜上還設有檢測線和質控線，檢測線上有桔霉素檢測抗原，質控線上有抗抗體，其中抗抗體是抗桔霉素的抗體的抗體。一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法示蹤粒子標記為如下任意一種膠體金顆粒；乳膠顆粒；膠體硒顆粒；明膠顆粒；磁性顆粒。檢測原理是這樣的在樣品墊上滴加樣品，如果樣品中有桔霉素，則桔霉素經層析作用移動到示蹤粒子結合物墊，與限量的抗桔霉素的抗體結合，當移動到檢測線時，示蹤粒子標記的抗桔霉素的抗體已無多余的結合位點與檢測線上的檢測抗原結合，檢測線不顯色或不出現磁性增強。示蹤粒子標記的抗桔霉素的抗體繼續向前移動到質控線，與質控線上的抗抗體反應，質控線顯色或出現磁性增強。若樣品中無桔霉素，則示蹤粒子結合物墊上的示蹤粒子標記的抗桔霉素的抗體和檢測線上的檢測抗原結合，檢測線顯色或出現磁性增強，質控線顯色或出現磁性增強。一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法包括如下步驟，(A)桔霉素抗原的制備，包括單克隆抗體的免疫抗原和桔霉素檢測抗原的制備；(B)硝酸纖維素膜的檢測線和質控線的制備；(C)示蹤粒子結合物墊的制備；(D)組裝試紙條。一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法桔霉素抗原的制備，包括如下步驟(A)桔霉素通過活性酯法使其羧基與一同時帶有羧基和氨基的小分子化合物的氨基以肽鍵相連，形成新的化合物。(B)該化合物再次通過活性酯法與高分子量載體物質的蛋白質、多糖、多核苷酸、多聚賴氨酸、多聚苯乙烯或其它人工合成的高分子量物質相連形成人工抗原；(C)選擇桔霉素抗原的一種作為免疫抗原。(D)選擇桔霉素抗原的一種作為檢測抗原。一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法硝酸纖維素膜的檢測線和質控線的制備，包括如下步驟(A)用桔霉素檢測抗原在硝酸纖維素膜上線狀點樣制備一條檢測線；(B)用抗抗體在硝酸纖維素膜上進行線狀點樣制備一條質控線。一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法檢測線和質控線是這樣制備的將硝酸纖維素膜按10-35mm寬的尺寸剪裁；將經生理鹽水緩沖液充分透析，濃度調整為0.01-5mg/mL的桔霉素檢測抗原在膜上線狀點樣作為檢測線，檢測線點樣位置離膜底邊4-16mm，然后在膜的頂端用濃度調整為0.01-5mg/mL的抗抗體噴涂質控線，硝酸纖維素膜4室溫干燥30分鐘，置于0.1-5％脫脂奶粉的生理鹽水中浸泡30分鐘，取出吸干水分，于37℃孵育30分鐘，置室溫下干燥處密封儲藏。一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法示蹤粒子結合物墊的制備包括如下步驟(A)用示蹤粒子標記抗桔霉素的抗體，抗體包括IgG型抗體、IgM型抗體、IgA抗體；(B)把示蹤粒子標記好的抗桔霉素的抗體分散在硝酸纖維素膜上。一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法制備示蹤粒子結合物墊的示蹤粒子為如下任意一種膠體金顆粒；乳膠顆粒；膠體硒顆粒；明膠顆粒；磁性顆粒。一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法組裝試紙條，步驟如下在襯墊1上加上有檢測線和質控線的硝酸纖維素膜；在襯墊上加上示蹤粒子結合物墊；在襯墊上加上樣品墊；在襯墊上加上吸水墊；組裝為檢測試紙條。一種桔霉素免疫層析檢測試紙在檢測桔霉素中的應用。本專利技術免疫層析技術檢測桔霉素，測本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種桔霉素免疫層析檢測試紙的制作方法，桔霉素免疫層析檢測試紙，包括襯墊（１），樣品墊（２），示蹤粒子結合物墊（３），硝酸纖維素膜（４），吸水墊（５），檢測線（６），質控線（７），在襯墊（１）上按順序有樣品墊（２），示蹤粒子結合物墊（３），硝酸纖維素膜（４），吸水墊（５）；示蹤粒子結合物墊（３）上有示蹤粒子（９）標記的抗桔霉素的抗體（１０），硝酸纖維素膜（４）上還設有檢測線（６）和質控線（７），檢測線（６）上有桔霉素檢測抗原（８），質控線（７）上有抗抗體（１１），其中抗抗體（１１）是抗桔霉素的抗體（１０）的抗體；其特征在于：包括如下步驟，（Ａ）桔霉素抗原的制備，包括單克隆抗體的免疫抗原和桔霉素檢測抗原（８）的制備；（Ｂ）硝酸纖維素膜（４）的檢測線（６）和質控線（７）的制備；（Ｃ）示蹤粒子結合物墊（３）的制備；（Ｄ）組裝試紙條。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：許楊，劉仁榮，熊勇華，賴衛華，陳高明，
申請(專利權)人：江西中德生物工程有限公司，
類型：發明
國別省市：36[中國|江西]