預測和/或診斷發展成胃癌危險性的方法技術

本發明專利技術涉及預測患癌癥危險性的方法，尤其是診斷和／或預測螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法。（*該技術在2020年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及預測癌癥危險性的方法，尤其是診斷和/或預測幽門螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法。目前還沒有對幽門螺桿菌感染者進行胃癌預測或診斷的非侵害性檢測。對于中度癥狀但歸為“高危”人群的對象和必須進行內窺鏡檢查并承受其風險的對象來說，這樣的檢測特別有意義。即使在具有“危險癥狀”而仍然需要內窺鏡檢查的對象中，這樣的非侵害性檢測也可用作輔助診斷工具。這種方法上的改變將對醫療保健行業產生重大影響。本專利技術目的之一就是要克服或減輕現有技術缺陷至少其一，即提供另一種有用的選擇。專利技術概述出人意料的發現是在發生胃癌或癌前損傷(化生和消化不良)的幽門螺桿菌感染者中，抗幽門螺桿菌粘膜IgG2抗體和γIFN水平降低，IL-4水平升高。這些改變也會反映在此類對象的血液中。但是，在胃粘膜被幽門螺桿菌感染的其他疾病中則沒有這樣的改變。首先，本專利技術提供了以下診斷和/或確定螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法，該方法包括a)檢測對象的抗幽門螺桿菌IgG2抗體水平；b)將以上抗幽門螺桿菌IgG2抗體水平與預定的對照水平相比，該水平低于對照說明發展成胃癌的危險性存在和/或升高。其次，本專利技術提供了以下診斷和/或確定螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法，該方法包括a)檢測對象的γIFN水平；b)將以上γIFN水平與預定的對照水平相比，該水平低于對照說明發展成胃癌的危險性存在和/或升高。第三，本專利技術提供了以下診斷和/或確定螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法，該方法包括a)檢測對象的IL-4水平；b)將以上IL-4水平與預定的對照水平相比，該水平高于對照說明發展成胃癌的危險性存在和/或升高。第四，本專利技術提供了一種診斷和/或確定螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法，該方法包括將第一，和/或第二，和/或第三種方法相互聯用。第五，本專利技術提供了一種診斷和/或確定螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法，該方法包括將以上第二與第三種方法聯用。所述螺桿菌感染最好是幽門螺桿菌感染。測定的是諸如血液、唾液、胃液等生物液樣品中的抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4水平。所述抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4水平測定可同時作為反映幽門螺桿菌感染情況的方法，或與這樣的方法聯用。最好通過近體試驗(near-subjectassay)中檢測所述抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4。然而，該試驗也可以是實驗室試驗。較好的是，所述試驗為抗體試驗，但是其他已知檢測方法也同樣可用且有效。所述試驗最好是ELISA。第六，本專利技術提供了以下診斷和/或確定螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法，該方法包括a)檢測對象血液中抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4產生細胞的頻率；b)將以上抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4產生細胞頻率與預定的對照水平相比，對象的抗幽門螺桿菌IgG2抗體和/或γIFN產生細胞頻率低于對照，和/或IL-4產生細胞頻率高于對照說明發展成胃癌的危險性存在和/或升高。本領域技術人員都知道，可純化血液以富集白細胞，然后進一步將此白細胞群分離成特定細胞群。較好的是，在檢測抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4前，用幽門螺桿菌刺激抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4產生細胞。第七，本專利技術提供了以下診斷和/或確定螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法，該方法包括a)檢測對象胃粘膜上抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4產生細胞的頻率；b)將以上抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4產生細胞頻率與預定的對照水平相比，對象的抗幽門螺桿菌IgG2抗體和/或γIFN產生細胞頻率低于對照，和/或IL-4產生細胞頻率高于對照說明發展成胃癌的危險性存在和/或升高。所述細胞最好來自組織活檢樣本。抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4產生細胞最好用流式細胞計數法檢測。可以用正常個體即無幽門螺桿菌感染的個體的生物液樣品，或用患有未并發慢性胃炎或無癥狀的幽門螺桿菌感染者的樣品來確立抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4的對照水平。某些時候，對于進行預后隨訪的對象，對照水平可以是內部的，即對象自身的對照水平。本專利技術方法還可通過檢測抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4來診斷和/或確定發生諸如化生或消化不良等癌前損傷的危險性。本領域技術人員可以看出，可將抗幽門螺桿菌IgG2抗體、γIFN和/或IL-4與其他參數(例如抗幽門螺桿菌IgG抗體總量)之比用作胃的癌變前期或癌性病變(包括化生和消化不良)的指標或用于其診斷。對癌變前期或癌性病變更精確的預測和/或診斷需要使用特定的比值，例如IL-4∶γIFN之比，IgG2∶總IgG之比或IgG2∶IgG1之比。也可采用其他比值。本專利技術說明書中，“γIFN”與“IFNγ”混用，都表示細胞因子γ干擾素。圖2顯示粘膜活檢樣本中的IL-4分泌與幽門螺桿菌抗原刺激后血液T細胞之間高度相關。沒有接收處理的、未并發性慢性胃炎的幽門螺桿菌感染者的抗原激發T細胞不分泌IL-4。圖3幽門螺桿菌感染者胃粘膜中的細胞因子(IL-8，IL-4和γIFN)的產生。圖4患各種胃腸疾病的幽門螺桿菌感染者血清中的抗幽門螺桿菌IgG1和IgG2水平。圖5患各種胃腸疾病的幽門螺桿菌感染者血清中的抗幽門螺桿菌IgG1和IgG2水平。已知，可將血液和胃粘膜中的抗幽門螺桿菌IgG總水平作為幽門螺桿菌感染情況的指標。所以，在以下實施例中，在用抗幽門螺桿菌IgG作為幽門螺桿菌感染情況常規指標的同時，本專利技術還包括用IgG2亞類測得值作為胃癌預測指標或用于其診斷。檢測人樣品中細胞因子和抗體的方法是本領域熟知的，所用方法和試劑可方便地獲得。有些可用的技術如后文所述，用來說明如何進行某些測定。除非另做說明，所用的都是標準教科書和實驗室手冊中的各種標準技術。實施例1測定血樣中的細胞因子和抗體水平標準試驗包括用抗IL-4單克隆抗體(MoAb)包被96孔微滴板的微孔。去除抗體并用PBS/Tween20洗滌后，在含有100μl AIM-V培養基的各孔中加入100μl全血。37℃孵育24小時后，分離出血漿上清液，用ILISA檢測γIFN(附圖說明圖1)。用ELISA法測定各孔中被IL-4 MoAb俘獲的IL-4量(圖1和圖2)。用ELISA法測定凝血的血清或上述血漿上清液中的抗幽門螺桿菌IgG1和IgG2亞類水平，或IgG2/IgG之比(圖4和圖5)。試驗前，所有樣品保存于-80℃。單獨測定IL-4或同時測定IL-4和抗幽門螺桿菌IgG抗體的試驗系統用含2μg/ml抗IL-4單克隆捕捉抗體的pH8.5碳酸氫鈉溶液包被96孔平底微滴板的各孔。去除抗體溶液后，在各孔中加入等量的新鮮收集的全血。37℃孵育24小時后，分離血漿上清液，通過與生物素化抗IL-4抗體和鏈霉親和素-過氧化物酶偶聯物的反應檢測結合的IL-4。在讀板儀中，使用合適的標準，根據顯色測定IL-4量。在同一板上，將血漿上清液加入以4μg/ml幽門螺桿菌包被的孔，可同時用ELISA試驗檢測抗幽門螺桿菌IgG抗體。結果見表1。表1全血中的IL-4產生和抗幽門螺桿菌IgG抗體對象IL-4產生(pg/ml)抗幽門螺桿菌IgG(ELISA指本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種診斷和／或確定螺桿菌感染者發展成胃癌危險性的方法，該方法包括：ａ）檢測對象的抗幽門螺桿菌ＩｇＧ２抗體水平；ｂ）將以上抗幽門螺桿菌ＩｇＧ２抗體水平與預定的對照水平相比，該水平低于對照說明發展成胃癌的危險性存在和／或升高。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：RL克蘭西，G龐，
申請(專利權)人：昂科俄勒特控股有限公司，
類型：發明
國別省市：AU[澳大利亞]